Este vídeo demonstra a dissecção e remoção do timo fetal, bem como o preparo de culturas ex vivo de 2-dGuo tratados com timo.
Abstract
No timo, CD4 + timócitos imaturos 8 expressar rearranjadas aleatoriamente receptor de células T α-e b-corrente genes submetidos a eventos de seleção positiva e negativa com base em sua capacidade de reconhecer complexo de histocompatibilidade self-peptide/major (MHC) moléculas expressas por tímica células do estroma. Análise in vivo do papel das células do estroma tímico durante a seleção intratímicas é dificultada pela complexidade celular do microambiente do timo no timo steady-state de adultos, e pela falta de estratégias apropriadas visando manipular a expressão gênica do timo, em especial compartimentos estromal. Nós mostramos que o microambiente tímico pode ser facilmente manipulados in vitro através do uso de culturas de órgãos reaggregate timo, que permitem a preparação de três lobos-dimensional definido timo de células do estroma e linfóide. Embora outros sistemas in vitro suporte a alguns aspectos do desenvolvimento de células T, reaggregate cultura órgão timo continua sendo o único sistema in vitro capaz de suportar MHC classe I e II eficiente mediada por eventos de seleção timócito, e assim pode ser usado como uma ferramenta eficaz para estudar a regulação celular e molecular da seleção positiva e negativa no timo.
Protocol
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