Yöntem makalesi

MALDI Numune Hazırlama: Ultra İnce Tabaka Yöntemi

DOI:

10.3791/192

⸱

29 Nisan 2007

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Mass Spectrometry and Gaseous Ion Chemistry, Rockefeller University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu video Matriks Yardımlı Lazer Desorpsiyon İyonizasyon Kütle Spektrometresi (MALDI-MS) ile peptitler ve proteinlerin analizi için bir ultra-ince matris / analit bir tabaka hazırlık göstermektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu video Matriks Yardımlı Lazer Desorpsiyon İyonizasyon Kütle Spektrometresi (MALDI-MS) 1, 2, peptidler ve proteinler analiz etmek için bir ultra-ince matris / analit bir tabaka hazırlık göstermektedir. Ultra-ince bir tabaka yöntemi, matris kristalleri bir matris / analit karışımı sonraki kristalizasyon için ekim alanı olarak hizmet veren örnek bir tabak, bir substrat katmanı üretimi (alfa-siyano-4-hydroxycinnamic asit) içerir. Diğer örnek birikimi yaklaşımlar (örneğin kuru damlacık) üzerinden ultra-ince bir tabaka yöntemin avantajları (i), tuzları ve deterjanlar, (ii) daha iyi çözünürlük, ve (iii) yüksek uzaysal tekdüzelik gibi kirleri daha fazla dayanıklılık sağlar. Bu yöntem, proteinlerin doğru kitle belirlenmesi için özellikle yararlıdır. Bu protokol başlangıçta geliştirilmiş ve membran proteinlerin analizi için optimize edilmiş ve başarıyla iyon kanalları, metaboliti taşıyıcılar ve reseptörler analiz etmek için kullanılır, 2 ile 12 transmembran etki alanı 2 arasındaki içeren oldu. Orijinal yayınlandığından beri, aynı zamanda eşit çözünür proteinlerin analizi için yararlı olduğu gösterilmiştir. Gerçekten de, 380 kDa 3 gibi yüksek molekül kitleler de dahil olmak üzere geniş bir yelpazede, özellikleri olan proteinlerin çok sayıda kullanmıştır. Şu anda tüm proteinlerinin moleküler kitle analizi için tercih edilen bir yöntemdir. Açıklanan prosedür tutarlı, yüksek kaliteli spektrumları üretir ve hassas, sağlam ve uygulanması kolay.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu ince bir tabaka hazırlanması sırasında pudrasız eldiven giymek çok önemlidir.

Örnek plaka temizliği

  1. Paslanmaz çelik ya da altın MALDI örnek tabak kullanın.
  2. MeOH ile yıkayın ve bir Kimwipe hafifçe silin. Yüzeyin çizilmemesi için, Kimwipe yüzey rub veya fırçalayın.
  3. H 2 O ile yıkayın ve bir Kimwipe hafifçe silin.
  4. MeOH ile yıkayın ve bir Kimwipe hafifçe silin.
  5. Gerekirse, her zaman MeOH ile biten MeOH / H 2 O / MeOH temizleme programı tekrarlayın.
  6. Plaka üzerinde kalan hayalet lekeler veya kalıntı olmadığından emin olun. Hayalet lekeler varsa, eldivenli el (Kimwip....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Tüm reaktifler en yüksek kalitede (örneğin HPLC grade) olduğu kritik öneme sahiptir.

Pudrasız eldiven (lateks veya nitril)
Paslanmaz çelik ya da altın MALDI örnek plaka
Metanol (MeOH)
Su
Kimwipes
alfa-siyano-4-hydroxycinnamic asit (4 HCCA)
Trifloroasetik asit (TFA) (H 2 O final konsantrasyon% 0.1)
Asetonitril (ACN)
Formik asit
Isopropanol

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xiang, F., Beavis, R. C. A Method to Increase Contaminant Tolerance in Protein Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization by the Fabrication of Thin Protein-Doped Polycrystalline Films. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 8, 199-204 (1994).
  2. Cadene, M., Chait, B. T.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Matris Destekli Lazer Desorpsiyon yonizasyonuProtein K tle AnaliziMembran Proteini Analiziz n r Protein AnaliziPlaka Temizleme Protokolnce Tabakal SubstratVakum Aspirat r Kullan mKontaminant Giderme

İlgili makaleler