Kornea vasküler dokularda yoksun olduğunu eşsizdir. Ancak, güçlü bir anjiyojenik faktörler tarafından güçlü bir kan damarı büyümesi ve hayatta kalma kornea uyarılabilir. Bu nedenle, kornea bizimle anjiyogenik çalışmalar için değerli bir araç sağlayabilir. Bu protokol, kornea cep tahlil ve nasıl anjiyogenik faktörleri kullanarak bu model ile indüklenen anjiyogenez değerlendirmek için fare modeli gerçekleştirmek için nasıl kullanılacağını gösterir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Normal kornea vasküler dokuların açıktır. Ancak, kan damarları, büyümek ve hayatta kalmak için güçlü anjiogenik faktörler 1 yönetilmektedir kornea uyarılabilir . Bu teklik kornea cep tahlil anjiyogenez çalışmalar için en çok kullanılan modeller biri yaptı. Kornea hücrelerinin çoklu katmanlar oluşturur. Bu nedenle, anjiyogenik etkisi 2,3 araştırmak için kornea ilgi anjiogenik faktör içeren bir pelet gömmek mümkündür. Burada, (I) anjiogenik faktör içeren pelet (II) (III) ilgi anjiogenik faktör tarafından tetiklenen anjiyogenez analiz pelet kornea içine gömün üretmek için nasıl bir adım adım gösteri sağlar. Temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF), en güçlü anjiogenik faktörler 4 biri olarak bilindiğinden, korneada anjiyogenez ikna etmek için kullanılır .
Protokol
Kullanılan tüm ekipmanların ve reaktifler sterildir. Hayvan Bakım protokol tarafından onaylanmış ve NEI / NIH Komitesi (ACUC) kullanın (hayvan çalışması protokol NEI-553), ve Ulusal Sağlık Enstitüsü, kurallar ve düzenlemelere göre yapıldı.
1. Anjiogenik faktör içeren pelet üretimi
Bu bölümde, faiz anjiogenik faktör içeren pelet hazırlanmıştır.
- % 10 (w / v) PBS ile sukralfat çözümü olun. Oda sıcaklığında saklayın.
- % 12 (w / v) mutlak etanol ile poli-HEMA olun. Oda sıcaklığında saklayın.
- 1 mcg / ml bFGF çözüm olun. -80 ° C saklayın
- 50 pelet yapmak için, poli-HEMA sukralfa....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Fare kornea cep tahlil modeli, ilk olarak Muthukkaruppan VR ve Auerbach R 6 1979 yılında tarif edilmiştir. Detaylı protokolleri farklı laboratuvarlar 2,3,7,8 tarafından yayınlanmıştır. Laboratuvarımız, uzun yıllar 4 için modifiye edilmiş ve çalışmalarımız bu yöntem kullanılır . Fare kornea cep testi büyük tekrarlanabilirlik ile nispeten basit bir model. Bu modelin bir diğer avantajı, kornea, kan damarlarının normal yoksun olması nedeniyle, bu testte arka plan en az miktarda olduğunu. Bu .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bizim araştırma NIH, Ulusal Göz Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ekipman | Şirket | Katalog numarası | |
| Diseksiyon mikroskobu | Dünya Hassas Aletler | PZMIV-BS | |
| Von Graefe katarakt bıçakla (1.5x25mm bıçak, düz) | Ambler Cerrahi | 3401E | |
| Dumont # 5 forseps | Güzel Bilim Araçları | 11252-50 | |
| Oftalmoskopla | Zeiss | 30 SL-M |
Tablo 1. Ekipmanları
| Reaktif | Şirket | Katalog # | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| bFGF (temel fibroblast büyüme faktörü) | PEPROTECH A.Ş. | 100-18B | |
| Sukralfat (Sakkaroz octasulfate-alüminyum kompleksi) | Sigma | S0652 | PBS içinde% 10 |
| poli-HEMA (Poli (2-hidroksi etil metakrilat)) | Sigma | P3932 | Etanol% 12 |
Tablo 2. Reaktifler ve materyaller
Kaynaklar
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
