Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri

8.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52329

⸱

20 Ocak 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Florey Institute of Neuroscience and Mental Health, The University of Melbourne

Bu makalede

Özet

Bu protokol, yetişkin farelerde adaptif davranış ve beyin onarımının altında yatan çevresel kaynaklı beyin değişikliklerini incelemek için iki farklı çevresel manipülasyonu ve eşzamanlı bir beyin infüzyon protokolünü tanımlar.

Özet

Beyin veya beyin plastisite 'Uzun süreli değişiklikler hastalık ya da yaralanma aşağıdaki uyarlamalı davranış ve beyin onarımı altında yatan. Ayrıca, bizim çevre ile etkileşimleri beyin plastisite neden olabilir. Giderek, araştırma beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı beyin plastisite teşvik hangi ortamlar belirlemek için çalışıyor. İki çevresel manipülasyonlar açıklanan hangi artırmak veya yetişkin fare orta beyindeki nöronlar tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısını (TH +, dopamin (DA) sentezinde hız kısıtlayıcı enzim) azaltın. İlk eşleştirme erkek ve birlikte sürekli erkeklerde yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar artar 1 hafta için dişi farelerin içermektedir, ancak kadınlarda yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar azaltır. İkinci vb çalışan tekerlekleri, oyuncaklar, halatlar, yuvalama malzeme, içeren 'zenginleştirilmiş ortamlarda' (EE) 2 hafta boyunca sürekli konut fareler içermektedir ierkeklerde yaklaşık% 14 oranında orta beyin TH + nöronlar ncreases. Ayrıca, bir protokol eş zamanlı çevre kaynaklı beyin plastisite altında yatan mekanizmaları belirlemek yardımcı olmak için bu çevresel manipülasyonlar sırasında doğrudan orta beyin içine uyuşturucu beslerken için tarif edilmiştir. Örneğin, daha orta beyin TH + nöronların EE-indüksiyon orta beyin nöronlar üzerine sinaptik girdi eşzamanlı ablukası tarafından kaldırılmıştır. Birlikte, bu veriler çevre ile ilgili bilgiler veya 'DA' genlerin ifadesi kapatmak için orta beyin nöronların sinaptik giriş üzerinden geçirilen olduğunu göstermektedir. Böylece, altta yatan mekanizmaların hedef uygun çevresel stimülasyon ya da ilaç, orta beyin DA dengesizliklerin ile ilişkili beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı olabilir (örn Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı).

Giriş

Ortabeyin ventral tegmental alan (VTA) ve substantia nigra pars compactadaki (SNc) nöronların tarafından DArgic sinyal ödül motive bilişsel, duygusal ve motor davranışlar için önemli olduğu düşünülmektedir. Ancak, çok fazla veya çok az orta beyin DA sinyal birçok devre dışı nörolojik bozukluklar çeşitli belirtileri (örneğin Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı) neden olur. Artırmak veya DA bu belirtileri hafifletmek sinyalizasyon azaltan ilaçlar, ancak onlar da düzensiz sinyal atfedilebilecek yan etkileri ve hedef dışı etkiler üretmek. İlaç etkinliği, aynı zamanda, beynin telafi tepkiler zamanla azalır. Bu bakımdan, bir daha hedefli ve fizyolojik şekilde normal orta beyin DA sinyal geri ve bir tercih yaklaşım artan ya da orta beyin DA nöron sayısını azaltarak gereğidir.

Kanıt sev için biriken edilmiştir(1 gözden) olgun yetişkin hücrelerde metabolize ve ticareti DA ve diğer katekolaminlerin yer alan genlerin ve proteinlerin ifadesi değiştirilebilir olduğunu eral yıl. TH immunonegative (TH-) nöron sayısı karşısında modelini gösterir iken orta beyin, tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısı (TH + DA sentezi, oran-sınırlayıcı enzim) nöron sonra, (örneğin, bir artış nörotoksin verilmesini 2,3 aşağıdaki da artar sonra) 3 azalır. Bu daha sonra bazı hücreler tarafından 'DA fenotip' bir kazanç kaybı ile tutarlıdır. TH + ve TH- SNc nöronların sayısı da bu hücrelerin 4,5 elektrik aktivitesini değiştirmeyen farklı tedavilerin ardından eşit fakat ters yönde değiştirmek için gösterilmiştir. Örneğin, 2 hafta boyunca orta beyin içine küçük iletkenlik enfüzyon, kalsiyum ile aktive edilen potasyum (SK) kanalı antagonisti apamin (aynı miktarda) nu TH + ve artar sayısını azaltmaktadırTH- SNc ve mber 4,5 nöronlar. Buna karşılık, SK kanal agonisti 1-EBIO infüzyon TH + sayısını artırır ve (aynı tutarda) TH- SNc nöronlar 4,5 sayısını azaltır. Benzer değişiklikler, afferent girişi 4 hedef olan de dahil olmak üzere SNc nöronal aktivitenin, hedefleme çeşitli uygulamalar aşağıdaki görüldü. Nöronal aktivitenin ve afferent tarafından SNc DArgic nöronların sayısının bu bariz düzenleme ortamı veya davranış SNc nöron sayısını etkileyebilir olasılığını yükseltir. Farklı ortamlara maruz kalan Gerçekten de, yetişkin fareler daha az ya da orta beyin (SNc VTA) TH + nöronlar ve bu ortam ile endüklenen değişikliklerin en azından bir orta beyin 6 sinaptik giriş eşzamanlı ablukası ile ortadan kaldırılamaz sahiptir. (1) çevresel manipülasyonlar ve ilaç infüzyonu nasıl uygulanacağı konusunda daha fazla ayrıntı sağlamak;: Bu iletişim amaçları vardır ve (2) e bizim çekişme destekleyen daha fazla veri sağlamakbütünlüklü afferent yoluyla, orta beyin DA nöron sayısını düzenler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

NOT: Tüm hayvanlar üzerinde deney prosedürleri Nörobilim & Ruh Sağlığı Hayvan Etik Kurulu Florey Enstitüsü tarafından onaylanmış ve Avustralya'nın Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi uygun edildi bilimsel amaçlar için hayvanların bakımı ve kullanımı için uygulama kodu (7. sürümü yayınlandı 2004).

1. Çevre İşlemler

  1. Cinsiyet Eşleştirme
    1. Cinsel olgun (> 8 haftalık), yaştaki erkek ve dişi fareler kullanın.
      NOT: Biz genellikle C57BL / 6 fareler kullanın, ancak bu protokol İsviçre fareleri kullanarak aynı sonuçları vardı. Bu, tipik olarak, n = (n = 4 erkek), n = 2 erkek-erkek çiftler halinde ayrılır, her bir deney için, n = 8 erkek ve n = 8 kadın kullanımı 2 dişi-erkek çiftleri (n = 4 kadın), ve n = 4 erkek-dişi çiftleri (n = 4 erkek ve n = 4 kadın).
    2. Hayvan tutma tesisi, grup içi içine girişte> 3 gün boyunca cinsiyete göre fareler iklime alıştırmak için. Burada ve Throughout cinsiyet eşleştirme, yabancı çevre uyaranlara tutmak (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın.
    3. Rasgele bir erkek-erkek çifti, bir dişi-erkek çifti ya da bir erkek-dişi çifti her bir fare atar. Yiyecek ve su ad libitum giriş ile izole temiz bir kafes (2 fare / kafes) her bir çifti yerleştirin ve sadece 7 gün boyunca sürekli olarak bu şekilde yerleştiren.
      NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır. Erkek ve kadın littermates eşleştirme önlemek için dikkat edin.
  2. Çevre Zenginleştirme
    1. Cinsel olgun (> 8 haftalık), yaştaki erkek ya da dişi farelerin kullanın.
      NOT: Biz genellikle n = 6 / tedavi grubuna ayrıldı her bir deney için n = 18 fare, kullanın.
    2. Grup ev sahipliği özdeş standart içinde yer tutmak hayvan tutma tesis haline girişte (SH) (örn 3 gün iklime alıştırmak için> bu aşamada) aşağıdaki koşulları görmek. Burada ve deney boyunca, yabancı çevre uyaranlara tutmak (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın.
    3. Çevre zenginleştirme başlamak için, rastgele 3 gruba birine her fare atamak: SH; çalışma tekerleği (RW), ya da ortam olarak zenginleştirilmiş (DT) ve bir araya yiyecek ve su ad libitum giriş ile aynı temiz bir kafes içine, farelerin her bir grubu yerleştirin.
      NOT: Tüm gruplar için Burada, büyük sıçan tutan kafesleri, 42 cm uzunluğunda, geniş 27 cm boyutlarında, ve derin 16 cm kullanıldı.
      1. Buna ek olarak, aşağıdaki çevresel her grup için koşulları sağlamak: katta sadece çöp içeren SH (kağıt pelet ya da talaş); RW içeren SH artı 2 çalışan tekerlekler; EE (halatlar, merdivenler, tüneller ve boş kağıt havlu ruloları ve doku kağıt parçaları gibi nesneleri) RW artı oyuncaklar içeren hangi explore, oyun, tırmanma, gizlemek, ve yuva.
      2. 14 gün boyunca sürekli bu şekilde onları ev.
        NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır.
    4. 1 saat / gün (aynı saatte her gün), 5days / hafta yeni oyuncaklar içeren daha geniş bir kafese araya koyarak ek 'süper-zenginleştirme' (SE) tabi EE fareler.
      NOT: Burada, 46 cm genişliğinde 69 cm uzunluğunda ve 40 cm derinliğinde plastik küvet kullanıldı.
      1. Oyuncakların farklı bir dizi her oturum sunarak yenilik koruyun. Temiz oyuncaklar sabunlu su ve kokular kaldırmak için% 80 etanol ile farelere yeniden sunulmak üzere.
      2. Her SE oturumunu takiben, kendi EE kafesine fareler dönün. Kolu SH ve RW fareler bu dönem boyunca (SE kendisi hariç) SE fareler aynı (örneğin kaldırmak ve gelen ve kafesine her SH ve RW fareyi dönüş).

2. İlaç İnfüzyon için Ozmotik Pompa ve Beyin İnfüzyon Kanül İmplantlar

  1. Hazırlık
    1. Piyasada mevcut olan steril ozmotik pompalar ve beyin infüzyon kitleri kullanın. implantasyon gün önce, aseptik teknik kullanılarak, her bir pompa dolum (pompalar birlikte verilen talimatlara açıklandığı gibi), steril ilaç veya araç solüsyonu ile tüp ve kanül bağlayarak Başbakan implantlar. Birbirine geç ve 37 ° C'de gece boyunca steril tuzlu su içinde inkübe edilir. Çapraz bulaşmayı önlemek için ayrı ayrı ilaç ve araç-dolu implantlar inkübe.
  2. Cerrahi.
    NOT: deneyci ülkeye bağlı olarak, özel hayvan deneyleri izin veya ödenekleri cerrahi ve ameliyat sonrası deneyler bu tip sürdürmeye gerekmektedir.
    1. Tüm cerrahi ekipman sterilize ve aseptik boyunca teknik kullanır. (Örneğin havada% 1-2 isofluorane kullanarak) bir fare anestezisi ve bir stere yerleştirinotaxic Headframe. Prosedür boyunca anestezi derinliğini kontrol edin ve gerekirse daha fazla anestezi yönetmek (zararlı pençe tutam bacak çekilmesi örneğin yokluğu yeterli anestezi göstergesidir). Emin olun gözler yağlayıcı göz merhemi ile kuruma karşı korumalıdır ve farenin vücut ısısı prosedürü boyunca normal kalmasını edilir.
    2. Cm kafatasının arka kenarına posterior 2 gözü arasında ve bitirme başlayarak deri yoluyla orta hat kesi yapmak. Rahat pompayı ve kanül (bağlantı tüpü bitiminde bükük olmamalı) implante bir kez bağlantı tüpü sığacak kadar büyük bir subkutan 'cep' oluşturmak için uzak fare arka aşağı yatan fasya cilt teşrih künt. Kafatasının dorsal yerinden fasya temizlemek kazıyın.
    3. , Yaklaşık 1.5 mm çapında diş çapak kullanarak uygun stereotaksik u koordinatları kafatası içine detayantil kemik ince, esnek bir tabaka kalır. Peel uzakta ince forseps kullanarak bu katman (bu diş çapak ile yatan dura mater ve beyin zarar önler). Emin olun kafatası herhangi bir kan ve kemik parçalarının temizlenmesi ve olduğunu başka kanıyor.
    4. Bir kanül sahibi tarafından düzenlenen kanül ile, farenin sırtını örten deri altı 'cebine' içine pompa ve bağlantı tüpü yerleştirin. Sonraki uygun stereotaksik koordinatlarda ve beynin yüzeyinde kanül ucu yerleştirin. Dikkatle beyin içine kanül düşük ama gerekli derinlik kısa yaklaşık 1 mm durdurun.
      NOT: Kalan derinliği diş akrilik ilk katman uygulanması aşağıdaki müzakere edilecektir.
    5. Kafatasının yüzeyi temiz ve kuru olduğundan emin olun tekrar, daha sonra diş akrilik küçük bir hacim hazırlamak ve th etrafında kafatası yoluyla çapak-deliğe dahil, kafatası tüm maruz alanın üzerine düzeltmek için bir kürdan kullanınE kanül. Akrilik sertleşir önce, kanül hedef haline kalan derinliğini ucu düşük.
    6. Yerinde kanül düzeltmek için, kanül beyaz plastik desteği üzerinde yanı sıra, diş akrilik başka küçük hacimli hazırlayın ve ilk aşkın bu katmanı. Gerektiğinde akrilik ilave tabakalar ile tekrarlayın.
    7. Akrilik sertleştikten sonra, dikkatle kanül tutucusunu çıkarın ve bir bütan alev ile ısıtılan bir neşter bıçak kullanarak beyaz plastik çıkarılabilir kanül sekmesini kesti. Son olarak, tüm implant üzerinde kapalı cilt sütür.
  3. Hayvanların Post-cerrahi Tedavi
    1. Cilt marjları antiseptik merhem sürün ve fare bir anti-inflamatuar yönetmek (örn Meloksikam, 3 mg / kg sc). , Çerçeve fareyi çıkarın ısı lambası altında yerleştirin, ve bilinç kavuşur kadar gözlemlemek. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir fare iade etmeyin.
      NOT: Uzmcinsiyet eşleştirme ve çevre zenginleştirme gibi erimental manipülasyonlar başlatılan veya erken ameliyat ertesi gün devam edilebilir.
    2. Kendi vücut ağırlığı, günlük genel davranış ve görünüm izleyin. Topikal antiseptik merhem cerrahi kesiler etrafında enfeksiyon belirtileri (örn şişlik, kızarıklık, irin) davranın. Gerektiğinde sistemik analjezikler ve / veya antibiyotik ile herhangi bir belirti hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık (>% 10 vücut ağırlığı, sosyal geri çekilme, damat eksikliği örneğin kaybı, "kabartmak", hareket disfonksiyon, nöbetler) davranın.
    3. >% 15 kilo kaybı ya da hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık belirtileri iyileştirici tedavi 1 hafta içinde olmayan geri kazanılabilir ise fareler Euthanize.

3. Beyin Doku Hazırlama, İşleme İmmunohistokimyasal ve Stereoloji

  1. Serpilme
    1. Hemen çevre / ilaç manipülasyonlar takip, çalışma için beyin hazırlamak.
      Not: Burada bildirilen deneylerde SNc TH + nöron sayısı ölçülmüş ve farklı tedavi gruplarının her karşılaştırıldı.
    2. İlk (örneğin 100 mg / kg ip sodyum pentobarbiton) fareler öldürmek için anestezik aşırı dozda yönetmek. Bir kez anestezi ancak kalp yenerek durur önce, sırtında fare yatıyordu ve kravat ya da her iki ön ayakları aşağı pin.
    3. Bir neşter kullanılarak toraks sonra karın boşluğuna sadece göğüs kafesinin altındaki kas yoluyla insizyon örten cilt kesip. Göğüs kafesi kılıç şeklinde süreci bir kelepçe yerleştirin ve diyaframı açığa karaciğer yukarı ve uzağa göğüs kafesi kaldırın.
    4. Diyafram yoluyla ve yanal göğüs kafesi geri akciğerler ve kalbi maruz başının üzerinde katlanabilir kadar büyük makas kullanarak her iki tarafta kaburga kesti. İnce makas bir çıkış kan nokta ve perfüze çözümleri gibi sağ atrium küçük bir kesi yapmak kullanarak, daha sonra sol grupların sol ventrikül tabanı kesticle ve sol ventrikül, sol atrium aracılığıyla bir kanül yerleştirin ve aort içine.
    5. Heparinize sıcak (37 ° C) pompa sonra yerinde kanül Kelepçe ve sağ atrium çıkan çözelti kadar damar yoluyla 0.1 M fosfat tamponlu fizyolojik tuzlu su (PBS) kan tamamen ücretsizdir. Tüm fare de sabit kadar sonra, damar yoluyla soğuk (4 ° C) sabitleştirici solüsyonu (PBS gibi% 4 paraformaldehid) pompa. Beyin lavabolar kadar 2-3 gün süreyle% 30 sakaroz ile PBS beyin ve yer çıkarın.
      Not: Doku hazırlanması için daha başka türlü ilgili laboratuarda uzmanlık bağlı olarak tatbik edilebilir.
  2. Serbest yüzen kriyokesitler hazırlanması
    1. Ilgi beyin bölgeleri ile seri bölümleri kesin ve PBS bu toplamak.
      NOT: Bir sirostat kullanılarak 40 mikron kalınlığında kesitler kesti. Doku kesit diğer tipleri correspondi uzmanlık bağlı olarak uygulanabilecekng laboratuvar.
  3. İmmünohistokimya
    1. Ilgi proteinlerin için standart immunohistokimyasal gerçekleştirin. 48 saat süre ile 4 ° C'de (400 1) sonra, poliklonal biyotinlenmiş keçi anti-poliklonal tavşan anti-TH ile, daha sonra 30 dakika için immüno-reaksiyona girme oda sıcaklığında PBS içinde% 5 normal keçi serumu ve% 0.3 Triton X-100 bölümleri inkübe 2 saat süre ile, oda sıcaklığında: -rabbit (1.000 1).
    2. 18-20 dakika boyunca oda sıcaklığında ve daha sonra, kobalt ve nikel yoğun diamino-benzidin (0.5 mg / ml) 'de, 1 saat boyunca oda sıcaklığında;: Daha sonra, avidin peroksidazı (1: 500) inkübe diamino-benzidin inkübasyon son 3-5 dakika boyunca Chromagen çökelmesini katalize etmek üzere hidrojen peroksit (% 0.01) ilave edin. Önce, sonra ve yukarıdaki adımların her biri arasında PBS bölümleri 10 dakika süreyle üç kez her yıkayın.
    3. Daha sonra, hava onları kurutun, jelatinize mikroskop slaytlar üzerinde Nissl leke (nötr kırmızı) bölümleri monte, alkol, berrak (X-3B) ve lamel içinde kurutmak.
  4. Stereoloji
    1. Tarafsız stereolojik yöntemlerle TH + ve TH- SNc (ve VTA ve LC) nöronların toplam sayısını tahmin edin. Stereologist alınan tedaviye kör olduğundan emin olun. Soma çapı <5 mikron bazında glia Dışlama ve görünür bir çekirdeğin yalnızca bu hücreleri saymak.
    2. TH + hücreleri ve Paxinos ve Watson 7 beyin atlası göre anatomik noktalar / sınırları mekansal konumlara göre SNC (ve VTA ve LC) tanımlayın. (X = 100 mm, y = VTA ve LC 100 mm x = y 140 mikron = SNc için 140 mikron) düzenli önceden belirlenmiş aralıklarla sayma çerçevesinde TH + hücreler (55 x 55 mm = 3025 mm 2) Sayım Her Dördüncü bölümde her çekirdeğin boyunca.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu çevresel manipülasyonlara maruz Yetişkin fareler orta beyin numaralarını (SNc ve VTA), ancak LC değiştirmiştir, TH + nöronlar, EE artı pikrotoksin veya bicuculline ya eşzamanlı orta beyin infüzyon (GABA A reseptör antagonistleri) ve EE-indüksiyon ortadan kaldıran daha SNc TH + nöronlar. Bu veriler, daha önce 6 yayınlandı. Mevcut veriler bir önceki çalışmanın bir parçası olarak gerçekleştirilen tekrarlanan deneylerde derlendi, ama başka bir yerde yayınlanmamış olması.

...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Çevre manipülasyonlar

Bu çevresel manipülasyonlar (cinsiyet eşleştirme ve çevresel zenginleştirme) tasarım arkasındaki motivasyon ortamına olup olmadığını belirlemek için, ve / veya çevre tarafından istendiğinde davranış, orta beyin DA nöronların sayısında değişiklikler ile ilişkilidir. Odak ortamları sağlanması ve orta beyin DA sinyal meşgul muhtemel davranışları uyarıcı nedenle oldu. Bu karşı cinse dahil eşleştirme, ve,, oyun keşfetmek tırmanmaya gizlemek için jantlar, halatlar, m...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Avustralya Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) Projesi hibe 1022839 tarafından desteklenmiştir. AJH, Avustralya Araştırma Konseyi (ARC) FT3 Gelecek Üyesidir (FT100100835). Florey Sinirbilim ve Ruh Sağlığı Enstitüsü, Victoria Hükümeti'nin Operasyonel Altyapı Destek Hibesi'nden destek aldığını kabul ediyor.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İzofloranBaxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, AvustralyaAHN3640
ALZET Ozmotik pompa 1002DURECT Corporation, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-05300004317
ALZET Beyin infüzyon kiti 1DURECT Şirketi, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-05300004760
ALZET kanül tutucu 1DURECT Şirketi, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-05300008860
Vertex Monomer Kendiliğinden kürlenen (dental akrilik solvent)Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Hollandan/a
Vertex Self Curing (dental akrilik toz)Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Hollandan/a
METACAM (Meloxicam)Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 AvustralyaL10100
Sodyum PentobarbitonLethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Avustralya571177
Normal keçi serumuChemicon-Temecula, CAS26-Litre
Triton X-100Merck Millipore Genel Merkezi , 290 Concord yolu, Billerica, MA 018211.08603.1000
Poliklonal tavşan anti-tirozin hidroksilazMerck Millipore Genel Merkezi , 290 Concord yolu, Billerica, MA 01821AB152
Poliklonal biyotinile keçi anti-tavşanDako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Avustralya 2060EO432
Avidin peroksidazSigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AUA3151-1mg
Diamino-benzidinSigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AUD-5637
Stereo AraştırmacıMicroBrightField Biyobilim, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495yok

Kaynaklar

  1. Aumann, T., Horne, M. Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons. Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).
  2. Sauer, H., Oertel, W. H. Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat. Neuroscience. 59, 401-415 (1994).
  3. Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat. The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).
  4. Aumann, T. D., et al. Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons. Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).
  5. Aumann, T. D., et al. SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta. Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).
  6. Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice. Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).
  7. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The mouse brain in stereotaxic coordinates. , 2nd, Academic Press. (2001).
  8. Schultz, W. Behavioral dopamine signals. Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).
  9. Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry. Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).
  10. Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease. Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).
  11. Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).
  12. Lie, D. C., et al. The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).
  13. Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor. Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).
  14. Yoshimi, K., et al. Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain. Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).
  15. Shan, X., et al. Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice. Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).
  16. Zhao, M., et al. Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).
  17. Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).
  18. Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion. Brain research. 339, 151-153 (1985).
  19. Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).
  20. Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).
  21. Richard, F., et al. Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold. Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).
  22. Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).
  23. Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons. Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).
  24. Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons. Neuron. 74, 858-873 (2012).
  25. Tepper, J. M., Lee, C. R. GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons. Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).
  26. Hannan, A. J. Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity. Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).
  27. Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system. Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).
  28. Chmiel, D. J., Noonan, M. Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects. Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).
  29. Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects. Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).
  30. Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders. Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).
  31. Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice. Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).
  32. Rampon, C., et al. Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).
  33. Eckert, M. J., Abraham, W. C. Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus. Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).
  34. Sztainberg, Y., Chen, A. An environmental enrichment model for mice. Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).
  35. Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy. Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Çevresel ZenginleştirmeCinsiyet EşleşmesiTH Pozitif NöronlarOzmotik Pompa İnfüzyonuStereotaksik CerrahiGABAergik Sinaptik İletimBeyin PlastisitesiSinaptik Girdi Blokajı
Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.