Yöntem makalesi

İnme Preklinik Değerlendirme Ağı Tromboembolik İnme ve Trombolizli Çok Laboratuvarlı Modeli: TE-MCAo

DOI:

10.3791/69522

⸱

19 Aralık 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neuroscience, Zilkha Neurogenetic Institute, Keck School of Medicine of USC, 2Department of Neurosurgery, Keck School of Medicine of USC, 3Department of Population Health Science and Policy, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Internal Medicine, Division of Hematology, Oncology and Blood & Marrow Transplantation, Carver College of Medicine, University of Iowa, 5Departments of Neurology & Neurosurgery, Carver College of Medicine, Department of Epidemiology, College of Public Health, University of Iowa, 6The Medical College of Georgia at Augusta University, 7Department of Anesthesiology, Duke University, 8University of California, San Diego, 9Department of Neurology, Yale University, 10Neurovascular Research Unit, Massachusetts General Hospital, 11Laboratory of NeuroImaging, USC Mark and Mary Stevens Neuroimaging and Informatics Institute of the Keck School of Medicine of USC, 12Department of Neurology, Keck School of Medicine of USC

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tromboembolik inmeyi simüle etmek için, heterolog fare kanından hazırlanan embolileri orta beyin arterine enjekte edildi ve ardından rekanalizasyon için sistemik tromboliz uygulandı. Bu model versiyonu, çoklu laboratuvar ağında kullanılmak üzere optimize edilmiştir ve birden fazla aday tedavi yönteminin test edilmesini destekler.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut translasyonel kemirgen inme modelleri, insan felini simüle etmek için naylon filamentler, enjekte emboli, intraluminal trombin veya perivasküler endotelin-1 kullanarak orta beyin arter tıkanmasını (MCAo) indük etmektedir. Bu yöntemler arasında, tromboemboli enjeksiyonu ve ardından tromboliz, insan hastalarda görülen nöroinflamatuar olayları en iyi şekilde taklit eder ve en yaygın kullanılan inert naylon filament yöntemine tercih edilebilir. Ancak önde gelen tek laboratuvarlarda kullanılan standart tromboembolik modeller zaman alıcı, değişken sonuçlar verebilir ve ustalaşması önemli bir beceri gerektirir. Bu sınırlamaları gidermek için, damar tıkanmasını hedefleyen ve klinik senaryolarda uygulanan sistemik trombolizi paralellik olarak damar tıkanmasını hedefleyen ve damar içi tromboliz kullanarak rekanalizasyon sağlayan bir tromboembolik MCAo modeli geliştirdik. Hayvan sayısını azaltmak için, donör hayvanlardan kan depolayıp daha sonra birden fazla denek için embolisi hazırlığı için bir yöntem geliştirdik. Prefabrik Doccol mikrokateterlerimizin kullanımı, trombus hazırlığını ve enjeksiyonunu kolaylaştırıyor; mikrokateterlere tromboembolileri önceden yüklemek ve ardından iç karotis arterine yerleştirilmektedir. Rekanalizasyon sağlamak için, 1,5 mg/kg dozda damar içi Tenecteplase uyguladık. Tekrarlanabilirliği artırmak için standart ameliyat prosedürleri, eğitim videoları ve uygulamalı cerrahi eğitim atölyeleri hazırladık ve sahada test ettik. Model, yaygın olarak kabul gören naylon filament modelini kullanan tüm araştırmacılar için aşina olması gereken standart bir cerrahi yaklaşım kullanır. Mikrokateterin distal iç karotis arteriye geçişi, pterygopalatin arterini kaçırarak, naylon filament yerleştirmesine benzer bir şekilde gerçekleştirilir. İyileşme ve inme sonrası değerlendirmeler tipik davranışsal, radyografik ve histolojik protokollerle yapılabilir. Bu model, kontrollü yeniden kanalize edilmiş tromboembolik MCAo modeli arayan araştırmacılar için pratik, tekrarlanabilir ve erişilebilir bir yaklaşım sunar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnme, dünya çapında ölüm ve engelliliğin önde gelennedenlerinden biridir 1. Birçok hasta damar içi trombolizden faydalanırken, seçilmiş hastalar mekanik trombektomiden fayda sağlar. Tüm hastalar tromboliz veya trombektomi için hastaneye zamanında gelmediği ve tüm hastaların tam iyileşmeden faydalanmadığı için, ek veya yardımcı serebroprotektif tedavilerin geliştirilmesine ciddi ihtiyaç vardır. En yaygın kullanılan kemirgen iskemik inme modeli, orta beyin arterinin (MCA) monofilament tıkanması ve ardından tam reperfüzyon yöntemidir. Bu model, büyük damar tıkanmasını (LVO) simüle ederek, büyük inmeli hastaların başarılı tam mekanik trombektomi geçirmesini modeller. Ancak bu model, klinik felçlerin küçük bir yüzdesini kapsamaktadır. Buna karşılık, daha fazla hasta ateroskleroza sekayıl tromboembolik inme (in situ aterosklerotik plak yırtılması veya sistemik hastalıktan kaynaklanan atero-emboli) maruz kalır ve sadece sistemik trombolizle tedavi edilir; naylon model bunutekrarlayamaz 2,3. Ayrıca, naylon filament MCAo modelinde trombotiktıkanıklık 4,5 ile ilişkili inflamatuar kaskad yok. Tromboemboli ve ardından sistemik trombolitik uygulama içeren hayvan modelleri, birçok felç hastasında meydana gelen patofizyoloji ve temel biyolojiyi temsileder 4,6. Ancak şimdiye kadar, kemirgen tromboembolik inme modelleri karmaşık ve çoğaltılması zor olarak bilinmektedir. Özel uzmanların olduğu izole laboratuvarlarda, makul tekrarlanabilirlikle tromboembolik bir model elde edilebilir. Böyle bir model, çoklu laboratuvar projelerinde ihtiyaç duyduğu gibi yaygın kullanıma kolay kolay uygun değildir.

Burada, güncellenmiş ve standartlaştırılmış tromboembolik orta beyin arter tıkanması (TE-MCAo) ve ardından sistemik tromboliz modeli için ayrıntılı protokoller sunuyoruz. Özellikle, tromb hazırlığını basitleştirdik, trombüs yüklemesini kateterlere standartlaştırdık ve bu modelin çok laboratuvarlı denemeler için ölçeklenebilirliğini doğruladık. Bu modeli İnme Ön Klinik Değerlendirme Ağı (SPAN) için geliştirdik. Ancak, modelin yeni, aday tedavilerin yüksek hacimli pre-klinik ağ denemelerini uygulamak isteyen herhangi bir ağ için faydalı olmasını amaçladık. Standartlaştırılmış modelimizi kullanarak, çalışma dönemi boyunca her çalışma alanında günde 6 fareye TE-MCAo indükleyebildik.

SPAN ve benzeri ağlar, umut vadeden serebroprotektantların preklinik ortamdan klinik uygulamada başarıya çevrilmedeki tekrarlayan ve devam eden başarısızlıklara yanıt olarakbüyümüştür 7. 2019 yılında, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüleri (NINDS) SPAN8'i başlattı. SPAN, merkezi maskeleme, rastgeleleştirme ve otomatik merkeziyetli sonuç analizi yoluyla önyargıyı en aza indirerek potansiyel tedavileri daha etkili bir şekilde taramayı amaçlar. SPAN 1, ilk iki versiyonunda naylon filament modelini kullandı çünkü tüm katılımcı laboratuvarlar zaten kullanıyordu ve9'u dağıtmak kolaydı. Tromboembolizm ve trombolizin birçok yönünü daha sadık bir şekilde modellemek için SPAN, burada tanımlanan TE-MCAo modelini yaratmayı amaçlamıştır. Bu model, naylon filament modelinden TE-MCAo modeline geçiş yapan preklinik cerrahlar için faydalı olacaktır. Preklinik laboratuvarların MCAo (veya TE-MCAo) sonrası 24/48 saat içinde bir görüntüleme tekniği (örneğin manyetik rezonans görüntüleme (MR) kullanılarak inme varlığını doğrulamasını öneriyoruz.

SPAN Ağı, öncekiçalışmalarda tam olarak tanımlanmıştır 9 ve tüm SPAN Standart Çalışma Prosedürleri (SOP) SPAN web sitesinde mevcuttur. Kısacası, ağ, ilaç dağıtımı, veri kalite kontrolü, protokol uyumu doğrulaması ve ağ iletişimini yöneten bir koordinasyon merkezi (CC) tarafından yönetilmektedir. Tüm SOP'lar CC tarafından hazırlanır ve incelemeden sonra bir Yönlendirme Komitesi tarafından onaylanır. SPAN'da, tüm kemirgenler araştırma laboratuvarlarına vardıklarında MRI uyumlu barkodlu kulak etiketi takılır ve tüm denekler SPAN Araştırma Elektronik Veri Yakalama (REDCap) Veritabanı'na kaydedilir. Hayvanlar, CC tarafından alan ve cinsiyete göre katmanlanmış randomizasyon tabloları kullanılarak rastgele seçilir. SPAN 1 ve SPAN 2'de, katılımcı altı araştırma laboratuvarında varsayıma dayalı tedavilerin etkinliği araştırıldı. Tüm test ilaçları, aynı görünümlü şişelerde paketlendi, koordinasyon merkezinde etiketlendi ve projenin başında araştırma laboratuvarlarına gönderildi.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

USC'deki koordinasyon merkezi dahil olmak üzere tüm katılımcı SPAN laboratuvarları, hayvanların insancıl ve etik muamelesi için NIH ve AAALAC yönergelerine uydu. Tüm sahalarda yerel IACUC onayı alındı.

1. Trombus hazırlığı

NOT: Tüm kan ve trombuslar, biyolojik tehlikeler için tüm yerel kurum yönergelerine uygun şekilde işlenmelidir. Kanla temas eden tüm maddeler ya biyolojik tehlike atıkları olarak bertaraf edilmeli ya da cerrahi aletler durumunda otoklavla iyice temizlenip dezenfekte edilmelidir. Bu denemede kan bağışçı hayvanların kullanımını azaltmak için, donör kanını depolamak ve gerektiğinde tromboemboli yapmak için kan kullanmak için bir yöntem geliştirdik.

  1. Bir arterden taze donör kanını 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne veya pediatrik etilenediamin tetra-asetik asit (EDTA) mikrotüplerine çekin, sadece 500 μL seviyesine kadar doldurun.
    NOT: Kan alımlarımızda femoral arter kanülasyonunu tercih ediyoruz, çünkü femoral arterin büyük bir ışık çapı kateterizasyona olanak tanır, iki ayrı kan alımı yapılabilir ve kemirgenler için hayatta kalabilir bir ameliyattır. Deneyimimize göre, kan 4 °C'de 4 hafta boyunca saklanabilir.
  2. Depolanmış, antikoagüllenmiş kan 500 μL'ye 1 mL CaCl2 çözeltisi (5mg/mL) ekleyin.
  3. CaCl2 ile antikoagülasyon tersine çevirildikten hemen sonra, mikrosantrifüj tüpünden kanı nazik emiş kullanarak 100 cm PE-50 tüpüne aspire edilir.
    NOT: Gecikme, PE-50 tüplerine çekilmeden önce kan pıhtılaşmasına yol açar.
  4. Sarılmış tüpleri önceden ısıtılmış fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS) 37 °C'de 2 saat boyunca masa üstü fırında inkübe edin.
    NOT: Petri kabını açık sıcak plakaya koymak, tutarsız ısı dağılımı nedeniyle tutarsız bir sonuç çıkar.
  5. 2 saatlik kuluçkanın sonunda, kanla doldurulmuş PE-50 tüpünü hemen depolamak üzere 4 °C'ye aktarın. Sonraki adımlar için 20-72 saat arasında kullanılabilir kalacaktır.

2. Kateter yüklemesi

  1. Sarılmış PE-50 borusunu (iç çap: 0,58 mm) tuzlu bir 3 veya 5 cc şırıngaya bağlayın ve trombü nazikçe PBS içeren bir petri kabına fırlatın.
    NOT: Bu oldukça fazla kuvvet gerektirebilir. Bağlantı bölgesindeki baskıyı geri tutun ki kateter ve şırınga, ekstrüzyon sırasında ayrılmasın. PE-50 kateteri, gerekirse ekstrüzyonu kolaylaştırmak için daha küçük segmentlere (10-50 cm) kesilebilir.
  2. Trombüsün yaklaşık 6 cm uzunluğunda kesimleri jiletle yapıldı.
  3. Her trombus segmentini nazikçe bir PE-50 kateterine çekip 5 kez tamamen dışarı atarak yıkayın.
  4. Sonra, trombusy nazikçe bir PE-10 kateterine (iç çap: 0,279 mm) çekip 15 kez tamamen dışarı atarak yıkayın.
    NOT: Bu aşamada sık sık kırılma yaşanırsa, trombüsün kateter açıklığıyla hizalı şekilde aspirasyon yapıldığından emin olmak için ameliyat mikroskobu veya cerrahi lupe ile büyütme kullanmayı düşünün.
  5. ISTEĞE BAĞLI: Evan'ın Mavi'sini kullanarak trombüleri görselleştirmek
    1. 1x PBS çözeltisiyle %4 Evan's Blue hazırlayın.
    2. %4 Evan's mavisinden 200 μL'ni 10 mL 1x PBS ile doldurulmuş bir petri kabına ekleyin. Bu, daha yoğun çözelti = Evan'ın Mavi Sulandırması #1 olacaktır.
    3. 400 μL Evan's Blue Dilution # 1 alıp 20 mL 1x PBS ile doldurulmuş ayrı bir petri kabına karıştırın. Bu, Evan's Blue = Evan's Blue Seyreltme #2'nin seyreltilmiş bir çözeltisidir.
    4. Pıhtı daha yoğun Evan's Blue petri kabı çözeltisine (seyreltme #1) 1 saniye koyun ve ardından seyreltilmiş Evan's Blue petri kabına (seyreltme #2) aktar.
  6. Bir yıkanmış trombu, hava embolisi olmadan ıslak-ıslak yöntemle prefabrik mikrokateterlere (iç çap: 0,2 mm, dış çap: 0,360 mm, uzunluk: 300 mm, dişi Luer kilide bağlı) yükleyin.
    NOT: Bu adım için büyütme (örneğin, 2.5x lup) kullanmanızı öneririz.
  7. Tromb tamamen yüklendikten sonra, mikrokateterde tam olarak 5,0 cm kalacak kadar trombü ekstrüze edin. Fazlalığı jiletle kesin.
    NOT: Yüklü trombüsün uzunluğu, istenen darbe boyutuna bağlı olarak farklı uygulamalara göre ayarlanabilir.
  8. Mikrokateteri ucundan 16 mm uzaklıkta işaretleyin; böylece kateterin ortak karotis arterinin bifurkasyonundan intraluminal olarak ilerletilmesi gereken alanı belirleyin.

3. Hayvan cerrahisi ve anestezi

  1. 30:70 oksijen:azot oksit karışımında %4 izofluran ile anestezi başlatın ve aynı gaz karışımında %1-2 isofluran ile anestezi uygulanın.
  2. Ameliyat sırasında hayvan rahatlığını korumak için intraperitoneal olarak karprofen 5 mg/kg ve intraperitoneal olarak atropin 0,05 mg/kg verin.
    NOT: Birçok cerrah, kesi bölgesine 1.0 mL bupivakain (2.5 mg/mL) infüze eder.
  3. Ameliyat boyunca vücut sıcaklığını 37 ± 0,5 °C arasında tutun, rektal sıcaklık probuyla kontrol edilen bir ısıtma pediyle kullanın.

4. Donör kanının toplanması

  1. Donör kanını femoral arterial kateterizasyon yoluyla toplayın. Donörün ve alıcının biyolojik cinsiyetini eşleştirin.
  2. Aynı gün kan kullanılacaksa:
    1. Üç adet 1.5 mL santrifüj tüpü hazırlayın. Her tüpü 500 μL işaretinde silinmez bir laboratuvar kalemi ile işaretleyin.
    2. Her biri 100 cm uzunluğunda üç set PE-50 tüpünü hazırlayın; bu setler 23 kalibre bir küt iğne ile 1.0 mL'lik bir enşiringeye bağlanır.
  3. Kan daha sonra kullanılmak üzere saklanacaksa, altı pediatrik EDTA mikrotüp hazırlayın. Daha kolay kullanmak için kapakları gevşet.
  4. 10,0 cm uzunluğunda bir PE-50 borusu hazırlayın; bir ucu kauçuk ayakkabı kelepçeyle sıkıştırılmış, diğer uçunda ise kör eğimli bir şekilde hazırlanır.
    1. Kauçuk ayakkabı kelepçe yapmak için, standart hemostatik bir kelepçeden bir kaset PE-100 borusuna yerleştirin ve sığacak şekilde trim yapın. Diğer tarafta tekrarlayın.
    2. PE-50'yi küt eğimli yapmak için önce ucu eğik açıyla kesin. Sonra dik noktanın en ucunu mikro makasla kesin.
      NOT: Yerleştirildikten sonra arterin arka duvarının delinmesini önlemek için noktanın alınması önemlidir, ancak uç çok fazla çıkarılırsa, eğimleme etkisinin kaybı kateterin intraluminal olarak yerleştirilmesini çok zorlaştırır.
  5. Femoral artere standart bir kesim yapın.
  6. Hayvanı hazırlayın (iç uyluk bölgesini tıraş edin), ameliyat masasında sırt yatağı pozisyonuna getirin. Cildi %70 etanol içeren 3 yıkama ve ardından 1 kez betadin veya başka bir antiseptik çözeltiyle sterilize edin.
  7. Arka bacakları yumuşak kelepçelerle açık şekilde sabitleyin.
  8. Iç uylukta, bacakla doğal kıvrım boyunca yaklaşık 1,5-2 cm uzunluğunda dikey bir kesi yapın. Bu kesi, femoral arterin beklenen anatomik seyrine dik olarak yapılacaktır.
  9. Küt diseksiyon kullanarak, dikkatlice femoral damarlara kadar kesin. Femoral arteri, aynı demeden geçen ven ve sinirden dikkatlice ayırın.
  10. Femoral arteri distal olarak 5-0 ipek ligatür ile kapatın ve dikişin kuyruklarını hemostatlarla distal olarak hafif gerginlik sağlamak için kullanın.
  11. Femoral arteri izin verilen en yakın mesafeye iskelet olarak yerleştirin, arteri retroperitoneal kökenine kadar takip edin. Femoral arterin etrafına gevşekçe 5-0 ipek bir halka yerleştirin ve kuyrukları tekrar kullanarak arterin proksimal ucunda hafif bir gerginlik sağlayın. Bu noktada ipek düğümü sıkmayın. Bu gerilim, arteriotomi yapıldıktan sonra hemostaz sağlar.
    NOT: Döngü, anevrizma kelepçesi ile proksimal olarak daha da hareket ettirilebilir.
  12. Proksimal dikiş döngüsünden yaklaşık üçte 2 mesafede, arterin altına bir parça ipek dikiş yerleştirin ve gevşek dikişin distalında mikro makas kullanarak küçük bir arteriotomi yapın. Gevşek dikiş, kanülasyon sonrası intraluminal kateteri sabitlemek için bağlanır.
  13. Keskin forseps kullanarak, arteriotominin üst açıklığını kaldırın ve kör eğimli kateteri açıklığa yerleştirin. Kateteri mümkün olduğunca yakın bir noktaya ilerlet.
    NOT: Kateter ile iç damar duvarı arasında sürtünme olabilir. Bu konuda iki şey yardımcı olabilir: 1) kateterin ucunun dışını, damara sokmadan hemen önce bacağın içinden seroz sıvıyla kaplamak ve 2) küt, oluklu forseps kullanarak, kateteri ilerletirken damarın dışını tutun. Bu, damarın kateterle birlikte ilerlemesini engeller.
  14. Kateterin ucu neredeyse proksimal halka noktasına kadar ilerletildikten sonra, o dikişin kuyruk kısmındaki gerilimi serbest bırakın. Kateterin damar içine sıkı oturması nedeniyle kanamayı önlemendir.
  15. Kateteri yeterince ilerletin ki gevşek halka sıkıldığında kateteri kapsayacak. Dikişi hafifçe sıkın, dikişin kateteri kapatacak kadar sıkılmadığından emin olun. Ayrıca, bu kateter segmentinin konik yapısı nedeniyle dikişin kateterin eğiğinde olmadığından emin olun.
  16. Lastik ayakkabıyla yapılan kelepçeyi bırakın. Kateter hemen kanla dolmalıdır.
  17. Açık santrifüj tüplerini veya pediatrik EDTA mikrotüplerini doldurun, toplama yuvalarından birine 500 μL'den fazla koymadan.
  18. Mikrotüpler dolduktan sonra, PE-50 kateterini femoral arterden çıkarın, proksimal ucu bağlanın ve kesik 5-0 prolene dikişiyle kesinti kapatın.
  19. Eğer kan daha sonra kullanılacaksa, kapsülleri dolu pediatrik EDTA tüplerine yerleştirin ve 4 °C'de saklayın.
  20. Trombüs aynı gün kullanıma hazırlanacaksa, yukarıdaki 1.2. adıma geçin.
  21. Kalan santrifüj tüpleriyle hemen tekrarlayın.
  22. Arteriyal kan donörleri, anesteziden iyileşmenin ardından tek taraflı kateterizasyon yapılmışsa vivaryuma geri dönebilir. Kontralateral femur arter daha sonra kateterize edilebilir, ancak iki taraflı femur arter kateterizasyonundan sonra donörler IACUC düzenlemelerine uygun olarak ötenazi yapılmalıdır.

5. TE-MCAo

NOT: TE-MCAo yaklaşımı, ortak karotis arterine yapılan standart kesimi kullanır. Anestezi ve azaltma yöntemi kullanıcıya kalmıştır. Buradaki protokol, cerrahın ortak karotis arteri (CCA), iç karotis arteri (ICA) ve dış karotis arteri (ECA) zaten izole ettiği noktada başlar.

  1. CCA'yı açığa çıkar ve 3-0 ipek bağ ile geri çek. ECA ve ICA için de aynı şeyi yapın.
  2. Bir bağ veya koter kullanarak oksipital arterini açığa çıkarıp kapatın.
  3. Pterygopalatine arterini (PPA) açığa çıkarıp geri çekin veya kapatın.
    NOT: Yeterli deneyimle bu adım atlanabilir. Prosedürü öğrenirken bu adımı her zaman yapmanızı öneririz.
  4. Nazik bir geri çekme yöntemi kullanarak ECA ve ICA'yı "T" konfigürasyonuna getirin.
  5. CCA bağını ancak yukarıdaki tüm adımlar tamamlandıktan sonra bağlayın.
  6. ECA'da (Zea Longa CCA açıkmetodolojisi 10) mikro makas kullanarak arteriotomi yapın.
  7. 4.4.2. adımda açıklanan kör bevel yöntemi kullanılarak, zaten yüklenmiş mikro kateterlerden birinin ucunu hazırlayın (iç çap: 0,2 mm, dış çap: 0,360 mm, uzunluk: 300 mm, dişi Luer kilidine bağlı).
  8. Önceden yüklenmiş trombüslü mikrokateteri dikkatlice ECA'ya yerleştirin. ICA kısıtlayıcı döngüsünü gevşetmek ve mikrokateteri doğrudan görselleştirme altında karotis bifurkasyonunda 16 mm'ye kadar intrakranial olarak ilerletmek için ekstrakraniyal PPA'nın istemeden kanülasyonu önlenmesini önleyin.
    NOT: Kateter CCA'ya girmeyi tercih ediyorsa, sivri pamuk uçlu aplikatör ile hafif bir baskı, ilerleyen kateteri ICA'ya yönlendirmeye yardımcı olabilir.
  9. İntraluminal mikrokateteri ICA ve CCA'ya 3-0 ipek kullanarak sabitleyin, aşırı sıkılmamaya dikkat edin.
  10. 1 mL şırıngaya motorlu bir şırınga pompasıyla 2 dakika boyunca 10 μL/dakika hızında 20 μL enjekte edin.
    NOT: Genellikle, şırınga pompası yeterli basınç oluşana kadar ilk başta ilerlemez.
  11. Aynı pompa ayarlarıyla ek 20 μL steril salin enjekte edin.
    NOT: Lazer benekli görüntüleme ile kan akışı çalışması sırasında, 20 μL yıkama ile %100 başarı elde ettik.
  12. Mikrokateteri çıkarın ve arteriotomi bölgesine yakın bir dikişle ECA'yı kalıcı olarak bağlayın. Tüm kısıtlayıcı halkaları kaldırın. Kan sızıntısı olup olmadığını dikkatlice gözlemleyin ve gerekirse ek bağlarla sabitleyin.
  13. Deri kesisini geçici olarak zımba veya 5-0 prolene dikiş ile kapatın.
  14. Hayvanı anesteziden çıkarıp sıcak bir iyileşme kafesine yerleştirin.
  15. Isteğe bağlı: Laboratuvarlar, başarılı MCA tıkanmasını doğrulamak için lazer Doppler akışmetrisi kullanabilir. Alternatif olarak, 24 veya 48 saatte manyetik rezonans görüntüleme yapılarak beyin enfarktüsü doğrulanabilir ve nicelendirilebilir.
    NOT: Birçok kullanıcı, ameliyatın sonunda 1,5 ml salin veya laktasyon Ringer solüsyonunu deri altı olarak uygulamayı tercih eder.

6. Sistemik Tromboliz

NOT: Tenektepaz (TNK, 1.5 mg/mL) sistemik tromboliz olarak kullanılmak üzere satın alınabilir. Kullanıcılar diğer litik ajanları tercih edebilir. Bireysel 50 mg'lik şişeler 50 mL damıtılmış su ile yeniden oluşturulur ve ardından 2,5 mL tam olarak 3,0 mL şişelere alikot edilir. Aliquotlar daha sonra kullanılmak üzere -20 °C'de dondurulabilir. Yeniden oluşturulmuş rekombinant doku plazminojen aktivatörünün -20 °C'de depolanan stabilitesi 60 gün11 gündür.

  1. Her denek için bir donmuş TNK aliquotu eritin. Oda sıcaklığında yaklaşık 15 dakika eritin.
  2. 1 cc bir şırınga kullanarak tam olarak 1.5 mg/kg çekin. Örneğin, 300 gramlık bir sıçan 0,45 mg gerektirir.
  3. Hayvanı tekrar anestezi yapın ve geçici deri kapanmasını çıkarın.
  4. Dış juguler venin herhangi bir dalını açığa çıkarın.
    NOT: Kuyruk damarı, laboratuvar bu yolda daha rahat ise kullanılabilir. Biz juguler ven kullanmayı tercih ettik çünkü SPAN cerrahları dış juguler ven mobilizasyonunda daha rahat oldukları ve filament modelimizde bu rutin olarak yapılıyor.
  5. 30 veya 32 G iğne kullanarak, TNK'yi doğrudan damara delinerek iletebilirsiniz.
    NOT: Başlangıçta, kullanıcılar damarı 3-0 ipek halka arasında izole etmek isteyebilirler. Pratikle bu gerekli olmayacak.
  6. Kesiyi kesilmiş 5-0 prolen veya başka bir emilmez dikişle kapatın.
  7. Hayvanı 5.14. adımdaki gibi kurtarma kafesine geri getirin.

7. İstatistiksel yöntemler

  1. Betimleyici istatistikler yapmak için, normal dağıtılmış sayısal veriler için ortalama ve standart sapma kullanın, normal dağılım olmayan veriler için ise medyan ve çeyreklerarası aralık kullanın. Kategorik verileri frekans dağılımları olarak sunun. Hipotez testi için, normalde dağıtılmış parametrik veriler için uygun şekilde t-testi veya ANOVA uygulanır; aksi takdirde, hipotez testi yapmayın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Donör hayvanlardan kan toplama ve tromb hazırlığı. Donör hayvandan kan, femoral arter kateterizasyonu yoluyla alındı ve EDTA (4 haftaya kadar saklanabilir) veya aynı gün kullanılmadan mikrosantrifüj tüpüne aktarıldı. Trombü hazırlamak için, depolanan kan tüplerine kalsiyum klorür solüsyesi eklendi ve hemen PE-50 kateterine aspirasyon sağlandı. Sarmal PE-50 borusu, 37°C'de önceden ısıtılmış fosfat-tamponlu tuzlu (PBS) bir masa üstü fırında 2 saat kuluçka edildi. 2 saat sonra, kan dolu PE-50 tüpleri hemen depolamak üzere 4°C'ye aktarıldı. Daha fazla bilgi için protokolün 1. bölümüne bakınız. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Enjeksiyon için trombüsün katetere yüklenmesi. (A) MCAo ameliyatı gününde, trombus PE-50 tüpünden PBS içeren bir petri kabına dışarı çıkarıldı. (B) Petri kabında, trombüs jilet bıçağıyla yaklaşık 6 cm uzunluğunda kesildi. (C) Trombus, PBS ile PE-50 tüpüne çekilerek 5 kez, ardından PE-10 tüpüne 15 kez atılarak yıkandı. (D) Trombus, konsantre Evan's Blue çözeltisi içeren bir petri kabına transfer edildi. (E) Trombus, seyreltilmiş Evan's Blue çözeltisi içeren bir petri kabına aktarıldı ve prefabrik bir mikrokatetere yüklendi. (F) Mikrokateter, farenin iç karotis arteri boyunca ilerletilerek kateterin ucundan 16 mm uzaklıkta, ortak karotis arterinin karotis ikiye ayrılmasından geçti ve motorlu bir şırınga pompası ile enjekte edildi. Daha fazla bilgi için protokolün 2. bölümüne bakınız. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın. 

Pilot bir fizibilite çalışmasında, 6 araştırma laboratuvarında 135 denek kaydedildi. Katılımcılar 8 tedaviden birine rastgele seçilse de, burada sadece modelin uygulanabilirliğini göstermek için toplu verilerle rapor yapıyoruz. 135 katılımcıdan 132'sinde (%98) doğru doz ve zamanda TNK verildi. TE-MCAo'dan 3 gün sonra 102 (%75) MRG, taramadan önce hayvan ölümü nedeniyle 33 (%24) alındı. 3. günden önceki hayvan kaybı, tüm 6 laboratuvarda tutarlıydı (Tablo 1), bu da modelin birden fazla noktada uygulanabileceğini gösteriyor. Lezyonların ortalama ± SD boyutu %13 ± %16 idi (lezyon alanı, ipsilateral yarımküre oranında iskemi ve ödemi içerir) ve laboratuvarlar arasında bazı değişkenlikler görülür (Tablo 2). Temsil MR görüntüleri ve otopsi sonrası embolileri Ek Şekil 1'de görülebilir.

Laboratuvar
DeğişkenAGDKIWMGSDYL
Örnek Büyüklüğü (N)233011282419
MR Yapıldı19249231413

Tablo 1: Laboratuvar Bazında Fizibilite. Çalışma laboratuvarları Augusta Üniversitesi (AG), Duke (DK), Iowa Üniversitesi (IW), Massachusetts Genel Hastanesi (MG), San Diego Üniversitesi (SD) ve Yale Üniversitesi (YL) idi. Kayıtlı hayvan sayısı (N) ve MRI taramasından sağ çıkanların sayısı inme sonrası 3. gün gösterilmiştir. Bu veriler modelin uygulanabilirliğini destekler.

SiteÖrnek Büyüklüğü (N)Lezyon Hacmi (%) Ortalama ± SDOrta Hat Shift Endeksi (%)
Mean ± SD
AG1911 ± 1411 ± 12
DK2418 ± 1719 ± 13
IW908 ± 1313 ± 12
MG2309 ± 1115 ± 17
SD1314 ± 2104 ± 19
YL1218 ± 2214 ± 15

Tablo 2: 3. gün MRI taramalarında görülen lezyon hacmi, site bazında. Modelin altı çalışma alanında tekrarlanabilirliğini belirlemek için, lezyon hacmi (iskemi ve ödem) ile orta hat kayması karşılaştırıldı. Lezyon hacmi, ipsilateral yarımkürenin alan yüzdesi olarak ifade edilir. Orta hat kayması, intrakraniyal uzayın maksimum genişliğinin doğrusal yüzdesi olarak ifade edilir. Veriler, laboratuvarlar arasında heterojenliği doğrulamaktadır.

Ek Şekil 1: Temsilci Görüntüler. (A-E) TE-MCAo'dan 48 saat sonra çekilen çeşitli çoklu yankı, çoklu tarama (MEMS) fare beyinleri görüntüleri. Kesitler bregma'nın yaklaşık 1 mm önündedir. (F-J) MCA kökeninde birkaç emboli örneği bulunmaktadır. Bu şekliği indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Iskemik inme tromboembolik kemirgen modelini, çok laboratuvarlı pre-klinik test ağı SPAN'da kullanmak üzere geliştirdik. Donör kanını daha sonra kullanmak üzere depolama yöntemi geliştirerek kullanılan hayvan sayısını büyük ölçüde azalttık. Ayrıca tromboemboli hazırlamayı ve cerrahi yaklaşımı basitleştirerek bir günde birkaç MCAo prosedürünün gerçekleştirilmesini kolaylaştırdık. Amacımız, TE-MCAo'nun yaygın kullanılan naylon filament versiyonuyla mümkün olan kullanıcı konforu ve cerrahi hacim seviyelerine ulaşmasıdır. Bu sonuca ulaşmak için iki yüz yüze cerrah eğitim atölyesi düzenledik ve bu çalışmaya katılan tüm cerrahlar daha standart filament modeliyle zaten birkaç ay, hatta yıllar deneyime sahipti. Altı farklı araştırma laboratuvarında fizibilite gösterdik ve protokole mükemmel uyum sağladık.

Bu protokolü uygulamaya karar verirken, bir araştırmacı protokol başarısını belirleyen aşağıdaki unsurları göz önünde bulundurmalıdır. Birincisi, kan toplamada titiz özen başarılı tromb oluşumunu etkiler. Erken pıhtılaşma önlemek için venoz değil, arterial kan alınmalıdır. İkincisi, gerekenden fazla kan toplamak önemlidir. Bazen bir örnek gece boyunca tromboz olamazken, diğerleri tromboz olur. Üçüncü olarak, kateter yüklemesinin optik büyütme ile yapılmasını şiddetle tavsiye ediyoruz; ya farlı cerrahi luuplar ya da aydınlatmalı büyütücüler gibi. Dördüncü olarak, CCA, ICA ve ECA'nın dikkatli ve dikkatli diseksiyonu, yırtılma ve intravasküler trombozu önlemek için gereklidir. Ayrıca, doğum kateterinin ICA'ya doğru şekilde girdiğinden emin olmak için PPA'yı görselleştirmek çok önemlidir. Beşincisi, trombolitik enjeksiyonu nedeniyle kemirgenlerde herhangi bir olumsuz etki görmek nadirdir. Çalışmalarımızda, TNK enjeksiyonu sonrası anjiyoödem veya periferik kanama gibi herhangi bir yan etki görmedik. Bu, mümkün olmadığı anlamına gelmez, ancak kemirgenlerde trombolitiklerin sistemik yan etkileriyle ilgili herhangi bir rapor yok. Bu protokolü ilk kez uygulamaya karar veren bir araştırmacıya, burada ortak yazar olarak adlandırılan araştırmacılardan biriyle görüşmesi tavsiye edilebilir; çünkü kişiselleştirilmiş talimatların çok faydalı olduğunu gördük.

Aday tedavileri test etmek için hayvan hastalığı modeli seçilirken, ilacın tedavi edilmesi amaçlanan hasta popülasyonunu doğru şekilde temsil etmek önemlidir. Fokal iskemik inme modelleri arasında Rose Bengal fototrombotik modeller, kortikal pial arter tıkanması ve stereotaktik endotelen-1enjeksiyonu 13,14,15 bulunmaktadır. Bu modeller, öngörülebilir korteks bölgelerinde yüksek tekrarlanabilir lezyonlar oluşturma avantajına sahiptir. Bu avantaj, onları hücresel mekanizmalar çalışmalarında veya lezyon konumunun davranışsal sonuçlarla ilişkilendirilmesinde tercih edilir. Ek maliyet, karmaşıklık ve reperfüzyon bileşeninin eksikliği, ilaç taraması için onları daha az kullanışlı hale getirir.

İntraluminal monofilament veya tromboembolizmli MCAo, büyük damar tıkanması (LVO) için tercih edilen yerleşik modellerdir10,16,17. Silikon kaplamalı monofilament modeli uygulanması kolaydır ve yaygın olarak kullanılır. Lezyonun konumu ve boyutu daha az öngörülebilir olsa da, büyük ölçekli ilaç testlerinde bu heterojenlik bir avantaj olarak görülür çünkü insan felçleri de oldukçaheterojendir 18,19. Monofilament yönteminin dezavantajı, tıkanmanın biyolojik olarak etkisiz olmasıdır. Hastalarda trombi ve tromboliz, trombin, plazminojen ve diğer trombus elementlerinin salınımıyla ilişkili inflamatuar bir kaskadoluşturur 20,21,22. Bu sınırlamayı aşmak için, birçok kişi tavşan, domuz, köpek ve insan dışı primat çalışmalarında tromboembolizm modelleriönermiştir 23,24,25,26,27. Bu çalışmalar karmaşıktır ve genel olarak uzmanlık gerektirir. Buna rağmen, tromboembolik modeli çok laboratuvarlı, klinik öncesi test ağımızda kullanmak üzere uyarlamaya çalıştık. Bu, tromboemboli preparatını basitleştirmemizi, cerrahi yaklaşımı kolaylaştırmamızı ve ihtiyaç duyulan hayvan sayısını önemli ölçüde azaltmamızı gerektirdi. Mükemmel protokol uyumu (Tablo 1) ve makul tutarlı lezyon boyutu (Tablo 2) ile altı farklı laboratuvarda başarıyla uygulanabilecek TE-MCAo adlı tromboembolik bir model geliştirdik. Verimlilik yeterliydi, haftada ortalama 6 derek vardı.

Faydalı olabilecek birkaç sorun giderme adımı vardır. Kanın tromboza geçmemesi, protokol arızasının en yaygın kaynağıdır ve genellikle ameliyat masasına konursa preparat kateterinin EDTA veya heparin ile kontaminasyonundan kaynaklanır. Titiz bir toplama tekniği öneriyoruz. Ayrıca EDTA'yı inaktive etmek için kullanılan kalsiyum klorür çözeltiyi her hafta veya iki haftada bir taze olarak hazırlanmasını öneririz. Trombü hazırlık kateterinden elüasyon ettikten sonra, trombü gerekli 5 cm parçalara ayırmak zor olabilir. Bazı trombuslar kırılgan ve kolayca kırılabiliyor. Pıhtıkların optik büyütme ile hazırlanmasını ve aşırı durumlarda başka bir donör trombüse geçmesini öneriyoruz. Aspirasyon ve elüasyon trombusları orta düzeyde beceri gerektirir; Bu yüzden oldukça uzun bir eğitim süresi öneriyoruz. Aspirasyon kateteri ucunun tıkanmasız olduğundan optik büyütme ile emin olun. Trombiler implantasyon kateterine sıkıştırılabilir - aspirasyon ve elüsyon arasında nazikçe 'ileri geri dönüş' yapılmasını öneriyoruz. Tipik MCAo filament modeliyle deneyimli cerrahlar için PPA'nın tanımlanması yeni bir adım olabilir. Thrombus'un Evan'ın mavisiyle etiketlenmesini şiddetle tavsiye ederiz, böylece kateter ICA'dan yukarı çıkarken izlenebilir ve takip edilebilir. ICA/PPA'nın ikiye ayrılması, ICA'yı takip eden dikkatli ve derin diseksiyonla kolayca tespit edilebilir ve iç karotis sinirinin ince bir dalına güvenilir şekilde yerleştirilir.

Bu protokolün bazı sınırlamaları vardır. Kemirgen karotis arterlerinin kanülasyonu için cerrahi beceri unsuru gereklidir. Ancak filament modeli için de aynı şekilde geçerlidir. Kan trombüsünün işlenmesi de cerrahi beceri gerektirir. Tüm tromboembolik modellerde olduğu gibi, filament modeline kıyasla başarılı enfarktüsün oranı daha düşüktür. Soruşturmanın amacı daha sık enfarktüs olayları ise, filament modeli tercih edilir. Öte yandan, amaç trombus ve trombolizin bir çoğaltısıysa bu model arzu edilir.

Bu model, trombus ve trombolizi sadakatle kullanan bir model kullanarak aday beyin koruyucularını test etmek için tasarlanmıştır. Gelecekteki yönler arasında reflow olmayan fenomene yönelik adjuvan tedavi çalışmaları da yer alabilir. Birçok kişi bu amaçla antikoagülanlar ve antiplatelet ajanlar önermiştir.

Sonuç olarak, burada sunulan TE-MCAo protokolü birden fazla laboratuvarda kullanıma izin verecek şekilde uyarlanmıştır. Trombülerin hazırlanmasını basitleştirdik ve cerrahi yaklaşımı daha sade hale getirdik. Donör kanını depolamak için bir yöntem geliştirdik, böylece ihtiyaç duyulan hayvan sayısını önemli ölçüde azalttık.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PL, danışmanlık için Apex Innovations'tan gelir bildiriyor. CA, BioAxane Biosciences ve Berlin Charite Hospital ile danışmanlık anlaşmaları yapmış ve Neurelis ile Bilimsel Danışma Kurulu üyesidir. EL, Freeox Biotech'in Ürik Asit bazlı ürünü OX1'i test eden bir NINDS klinik deneme uygulama uygulamasında bir PI'dir. Başka hiçbir yazarın açıklaması yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hibeleriyle desteklendi: U24 NS113452 ve U24 NS130600 (PL); U01NS113388 (AKC ve ECL); UE5 RPPR 5UE5NS099008 (ML); U01NS130588 (CA); U01NS130590, (DH, MK, KD); U01NS130598 (Lise); 1U01NS130557 (BH); U01NS130585 (LS).

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 ml şırıngaBD309628
10x lupe
1cc şırıngaTerumoSS-01T
23g küt iğneGrainger5FVK7
3.0 cc şırıngaBD309656
3-0 ipek ligatür
30g iğneBD305128
5-0 prolene dikişiEtikon8698Deri kesimini kapatmak için
5-0 ipek ligatürEtikonA182
Anevrizma kelepçesi
Atropin sülfatVeteriner BirNDC86136-006-10Bronş salgılarını azaltın
Küt oluklu forseps
BupivakainXelia İlaçNDC70594-118-01Lokal anestezikler
Kalsiyum klorürSigmaC7902
KarprofenZoetis IncNADA #141-199Analjezik
Santrifüj tüpleriEppendorf22364111Kan toplama için
EtanolKoptecUN1170
Evan' s BlueSigmaE2129
Isıtma pediHarvard AparatıK021-435
Hemostatik kelepçe
İzofluranVeteriner BirNDC13985-528-60
Made By Me Ultimate Weaving LoopsHorizon GruplarıGeçerli değilYumuşak kelepçeler
Mikro makasF.S.T.15000-00
MikrokateterlerDoccol ŞirketiPE-FL-360-200-300Prefabrik enjeksiyon kateterleri
PE-10 kateteriBD427401
PE-100 boruIntramedic7426
PE-50 boruBD427410
Pediatrik EDTA tüpleriBD MicrotainerK2E-363706Donör kanını depolayın
Petri kabıEppendorf30702115
Fosfat tamponlu tuzlu suFisherB2438
PrevanticsPDI Inc.NDC10189-1080-1Antiseptik
Q-ucuVWR89031-288
Jilet bıçağıAccuTec Pro71960
SalinHospira, Inc.NDC 0409-4888-02
MakasF.S.T.14958-11
Keskin forseps
Şırınga pompasıYeni Dönem Pompaları, Inc.BS-300
Masa üstü fırınBoekel132000
Tenecteplase (TNK)Genentech, San FranciscoNDC50242-120-47Tromboliz
Kulak etiketiRapID Lab, San Francisco, CA RapID Etiketleri

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GBD 2021 Causes of Death Collaborators. Global burden of 288 causes of death and life expectancy decomposition in 204 countries and territories and 811 subnational locations, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet. 403 (10440), 2100-2132 (2024).
  2. Saini, V., Guada, L., Yavagal, D. R. Global epidemiology of stroke and access to acute ischemic stroke interventions. Neurology. 97 (20 Suppl 2), S6-S16 (2021).
  3. Adams, H. P. Jr Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment. Stroke. 24 (1), 35-41 (1993).
  4. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp Transl Stroke Med. 1 (1), 8(2009).
  5. Zhang, Z., Chopp, M., Zhang, R. L., Goussev, A. A mouse model of embolic focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 17 (10), 1081-1088 (1997).
  6. Sokolowski, J. D., et al. Preclinical models of middle cerebral artery occlusion: new imaging approaches to a classic technique. Front Neurol. 14, 1170675(2023).
  7. National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke. N Engl J Med. 333 (24), 1581-1587 (1995).
  8. Lyden, P. D., et al. The Stroke Preclinical Assessment Network: rationale, design, feasibility, and stage 1 results. Stroke. 53 (5), 1802-1812 (2022).
  9. Lyden, P. D., et al. A multi-laboratory preclinical trial in rodents to assess treatment candidates for acute ischemic stroke. Sci Transl Med. 15 (714), eadg8656(2023).
  10. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  11. Davis, S. N., Vermeulen, L., Banton, J., Schwartz, B. S., Williams, E. C. Activity and dosage of alteplase dilution for clearing occlusions of venous-access devices. Am J Health Syst Pharm. 57 (11), 1039-1045 (2000).
  12. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  13. Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7 (5), 398-406 (2012).
  14. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Ann Neurol. 17 (5), 497-504 (1985).
  15. Ansari, S., et al. Endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser Doppler flowmetry guidance in rat. J Vis Exp. (72), e50014(2013).
  16. Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A rat model of focal embolic cerebral ischemia. Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).
  17. Koizumi, J. Experimental studies of ischemic brain edema. 1. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
  18. Morais, A., et al. Embracing heterogeneity in the multicenter Stroke Preclinical Assessment Network (SPAN) trial. Stroke. 54 (2), 620-631 (2023).
  19. Voelkl, B., Vogt, L., Sena, E. S., Wurbel, H. Reproducibility of preclinical animal research improves with heterogeneity of study samples. PLoS Biol. 16 (2), e2003693(2018).
  20. Ye, F., Garton, H. J. L., Hua, Y., Keep, R. F., Xi, G. The role of thrombin in brain injury after hemorrhagic and ischemic stroke. Transl Stroke Res. 12 (3), 496-511 (2021).
  21. Lee, S. R., Wang, X., Tsuji, K., Lo, E. H. Extracellular proteolytic pathophysiology in the neurovascular unit after stroke. Neurol Res. 26 (8), 854-861 (2004).
  22. Lo, E. H., Wang, X., Cuzner, M. L. Extracellular proteolysis in brain injury and inflammation: role for plasminogen activators and matrix metalloproteinases. J Neurosci Res. 69 (1), 1-9 (2002).
  23. Kaufman, H. H., Anderson, J. H., Huchton, J. D., Woo, J. A new canine model of proximal internal carotid embolism. Stroke. 10 (4), 415-418 (1979).
  24. Gralla, J., et al. A dedicated animal model for mechanical thrombectomy in acute stroke. AJNR Am J Neuroradiol. 27 (6), 1357-1361 (2006).
  25. Thomas, G. R., et al. Optimized thrombolysis of cerebral clots with tissue-type plasminogen activator in a rabbit model of embolic stroke. J Pharmacol Exp Ther. 264 (1), 67-73 (1993).
  26. Wu, D., et al. A clinically relevant model of focal embolic cerebral ischemia by thrombus and thrombolysis in rhesus monkeys. Nat Protoc. 17 (9), 2054-2084 (2022).
  27. Kuge, Y., et al. Serial changes in cerebral blood flow and flow-metabolism uncoupling in primates with acute thromboembolic stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 21 (3), 202-210 (2001).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Tromboembolik nme ModeliOrta Serebral Arter Okl zyonuTromboliz ProtokolKemirgen nme Modeliok Laboratuvarl nmentraven z TenekteplazMikrokateter Trombus EnjeksiyonuKan P ht s Haz rlamaManyetik Rezonans G r nt lemeDavran sal De erlendirme

İlgili makaleler