Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Serum immünoglobulinleri ve inflamatuar sitokinlerin modülasyonuyla 308-nm eksimer lazeri ile vitiligoda matrine kombinasyonunun terapötik etkinliği

368 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70371

⸱

10 Mart 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Dermatology, Xingtai People's Hospital

Bu makalede

Özet

308 nm eksimer lazeri ve oral matrinin birleşik kullanımı, melanosit yenilenmesini teşvik ederek ve bağışıklık dengesini yeniden sağlayarak vitiligoda repigmentasyonu belirgin şekilde artırmıştır. Bu çift modaliteli tedavi, pro-inflamatuar sitokinleri azalttı, immünoglobulinleri normalleştirdi, IL-10'u yükseltdi ve mükemmel güvenlik ile hasta toleransıyla üstün klinik etkinlik sağladı.

Özet

Vitiligo, fonksiyonel melanositlerin kaybı ve anormal bağışıklık aktivasyonu ile karakterize edilen kronik bir otoimmün depigmentasyon bozukluğudur. Fototerapideki gelişmelere rağmen, klinik yanıtlar sürekli inflamatuar aktivite ve yetersiz bağışıklık düzenlemesi nedeniyle tutarsız kalır. Bu çalışma, 308-nm eksimer lazer fototerapisini, anti-inflamatuar ve immünoregülatif özelliklere sahip doğal bir alkaloid olan oral matrine ile birleştirmenin terapötik etkinliği ve immünolojik mekanizmalarını incelemiştir. Toplam 232 segmental olmayan vitiligo hastası, 12 hafta boyunca eksimer lazer monoterapisi veya kombinasyon tedavisi almak üzere prospektif olarak atandı. Klinik iyileşme, Vitiligo Alan Puanlama İndeksi (VASI) kullanılarak değerlendirildi ve serum immünoglobulinleri ile sitokinler sistemik bağışıklık modülasyonu değerlendirilerek analiz edildi. Her iki rejim de önemli repigmentasyon sağladı, ancak kombinasyon tedavisi eksimer lazerin (9.68 ± 3.37'den 6.63'e ± 2.001 2.0 < 01'e kadar 2.34, başlangıçta 9.72 ±± 3.24'e kadar daha belirgin bir VASI azalması sağladı. Kombine rejimle mükemmel veya iyi repigmentasyon gösteren hasta oranı, monoterapiye (%58,7) kıyasla belirgin şekilde daha yüksekti. Paralel olarak, serum IgG seviyeleri belirgin şekilde azaldı (13,72 ± 2,64 g/L ile 11,85 ± 2,18 g/L, p 0,001 <), IgA seviyeleri ise mütevazı bir şekilde yükseldi (2,07 ± 0,68 g/L ile 2,23 ± 0,61 g/L, p = 0,041). IFN-γ ve IL-17 dahil pro-inflamatuar sitokinler önemli ölçüde azaldı (her ikisi de p < 0.001), anti-inflamatuar IL-10 ise 8.3 ± 3.2'den 12.9'a ± 3.5 pg/mL (p < 0.001) yükseldi. VASI iyileşmesi IFN-γ (r = –0.482, p < 0.05) ve IL-17 (r = –0.451, p < 0.001) değişiklikleriyle ters korelasyonlu, IL-10 yükselmesi ile pozitif olarak ise (r = 0.503, p < 0.001) ile korelasyon yapmaktadır. Bu bulgular, matrine'in melanosit yenilenmesini teşvik ederek ve bağışıklık dengesini yeniden tesis ederek eksimer lazer etkinliğini artırdığını ve vitiligo'nun hassas ve kalıcı yönetimi için biyomarker tabanlı çift modaliteli bir strateji oluşturduğunu göstermektedir.

Giriş

Vitiligo, epidermal melanositlerin seçici yok edilmesi veya işlev bozukluğu ile karakterize edilen, değişken boyut ve dağılımda iyi tanımlanmış beyaz maküllerin gelişimine yol açan kronik, edinilmiş bir depigmentasyon cilt hastalığıdır. Cinsiyet veya ırksal eğilim göstermeden yaklaşık %0,5–%2'sini etkiler ve genellikle 30 yaşındanönce ortaya çıkar 1,2. Hastalık hayati tehlike oluşturmasa da, önemli bir psikososyal ve duygusal yük oluşturur; özgüveni, sosyal işlevi ve yaşam kalitesini önemli ölçüdedüşürür 3. Vitiligo'nun patogenezi, genetik yatkınlık, oksidatif stres, otoimmün reaksiyonlar ve nörohumoral faktörleri içeren çok faktörlü ve tam olarakaçıklanmamıştır 4. Son kanıtlar, melanosit yok oluşunun başlangıcında ve kalıcılığında bağışıklık düzensizliğininkritik rolünü özellikle vurgulamıştır 5,6. Epidermiste, otoreaktif CD8⁺ sitotoksik T lenfositler, tirozinaz ve gp100 gibi melanosit antijenlerini tanır ve perforin ile granzim B'yi salgılayarakapoptozu 7'yi indükler olur. Aynı zamanda, interferon-γ (IFN-γ), tümör nekroz faktörü-α (TNF-α), interlökin-1β (IL-1β), IL-6 ve IL-17 dahil olmak üzere pro-inflamatuar sitokinler, inflamatuar zinciri artırır, melanositlerin hayatta kalmasını zayıflar ve pigment hücregöçünü 8. Düzenleyici T hücreleri (Tregler) ile efektör T hücreleri arasındaki dengesizlik, kalıcı bağışıklık aktivasyonuna ve melanosit kaybına da katkıdabulunur 9. Bu nedenle, hem melanosit yenilenmesini teşvik etmeye hem de bağışıklık homeostazını yeniden tesis etmeye yönelik terapötik stratejiler büyük klinik öneme sahiptir.

Yerel bağışıklık anormalliklerinin ötesinde, artan kanıtlar vitiligo'nun sistemik bir otoimmün durumu temsil ettiğini göstermektedir. Hastalarda değişen immünoglobulin seviyeleri (IgG, IgA ve IgM) belgelenmiş olup, genelleştirilmiş B-hücre aktivasyonu ve anormal humoral bağışıklığıyansıtmaktadır 10,11. Düzensiz immünoglobulin üretimi, melanositlere özgü antijenlere karşı otoantikor oluşumunu kolaylaştırabilir ve doku hasarını kötüleştirebilir. Ayrıca, vitiligo hastalarında sitokin ortamında sıklıkla yüksek IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-17 ve IL-23 görülür; bu da lezyon derinin ötesinde sistemik bağışıklık aktivasyonunuönerir 12,13. Bu bağışıklık aracılar sadece patojenik sürücü olarak hizmet etmekle kalmaz, aynı zamanda hastalık aktivitesi ve terapötik yanıtla da korelasyon yapar ve tedavi izleme için potansiyel biyobelirteç olarakkonumlandırılır14. Bu nedenle, hem hücresel hem de humoral bağışıklık yanıtlarını modüle ederek bağışıklık dengesini yeniden kazanabilen müdahaleler, üstün ve kalıcı klinik sonuçlar sunabilir. Topikal kortikosteroidler, kalsinörin inhibitörleri, sistemik immünosupresantlar ve fototerapi mevcut olmasına rağmen, özellikle yaygın veya dirençli hastalığı olanlar için tedavi etkinliği tatmin edici değildir15. Sonuç olarak, çoklu patofizyolojik mekanizmaları hedef alan kombinasyon yaklaşımları son yıllarda popülerlik kazanmıştır.

Fototerapi, uzun zamandır vitiligo yönetiminde temel taşlardan biri olmuştur. Çeşitli modaliteler arasında, 308-nm eksimer lazeri (EL), lokalize vitiligo16,17 için en hedefli ve etkili seçeneklerden biri olarak ortaya çıkmıştır. 308 nm aralıkta monokromatik UVB radyasyonunu doğrudan depigmentli lezyonlara iletir; böylece melanosit çoğalmasını ve saç foliküllerinden göçü uyarırken, çevredeki sağlıklı dokununmaruziyetini en aza indirir. Geleneksel dar bantlı UVB ile karşılaştırıldığında, eksimer lazer hızlı repigmentasyon başlangıcı, daha kısa kümülatif maruz kalma süresi ve geliştirilmiş güvenlikprofili 19,20 gibi avantajlar sunar. Mekanik olarak, düşük dozlu 308 nm ışınlandırma, epidermal Langerhans hücre aktivitesini azaltarak, Treg infiltrasyonunu artırarak ve tirozinaz ile mikroftalmiya ilişkili transkripsiyon faktörünün (MITF) yukarı regulasyonu yoluyla melanogenezi artırarak yerel immünomodülasyonu indükler. Ancak, yanıtlar değişken olmaya devam eder ve birçok hasta tam repigmentasyon elde edemez. Aşırı veya uzun süreli radyasyon, paradoksal olarak IL-1β, IL-6 ve TNF-α gibi inflamatuar sitokin salınımını tetikleyebilir ve daha fazla melanosit hasarınayol açabilir 22,23. Bu nedenle, eksimer lazer tedavisi melanosit yenilenmesini etkili bir şekilde uyarsa da, etkinliği eşzamanlı inflamatuar aktivasyonla sınırlı olabilir. Bu ikilik, fototerapi sırasında iltihabı azaltabilen ve bağışıklık toleransını artırabilen yardımcı tedavilere olan ihtiyacı vurgular.

Matrine, Sophora flavescens (Ku Shen) parçasından çıkarılan doğal bir kinolizidin alkaloidi olup, son zamanlarda düşük toksisiteye sahip immünomodülatör ve anti-inflamatuar bir ajan olarak büyük ilgiçekmiştir (24,25). Deneysel çalışmalar, matrinin NF-κB ve JAK/STAT sinyal yollarını baskılayabileceğini, pro-inflamatuar sitokinlerin (IFN-γ, TNF-α ve IL-6 dahil) üretimini azaltabileceğini ve IL-1026 gibi anti-inflamatuar aracıların ifadesini teşvik edebileceğini göstermiştir. Bağışıklık kaynaklı hastalıklarda, matrine Th1/Th17 farklılaşmasını modüle etmede, düzenleyici T hücresi fonksiyonunu artırmada ve immünoglobulin profillerininormalleştirmede (27,28) etkinliği göstermiştir. Ayrıca, matrine antioksidan ve anti-apoptotik etkiler gösterir ve bu etkiler melanositleri oksidatif stresten kaynaklananyaralanmalardan koruyabilir. 29. Bu özellikler matrini otoimmün cilt hastalıkları için cazip bir aday yapsa da, vitiligodaki rolünü çok az sayıda araştırma araştırmıştır. Matrin ile fototerapinin birleşimi yeni bir terapötik yaklaşım sunar: matrine inflamatuar mikro ortamı zayıflatabilir, melanosit homeostazını stabilize edebilir ve lazerle indüklenen melanogenezi güçlendirebilir. Ayrıca, matrinin sistemik immünoregülasyon aktivitesi, eksimer lazerin yerel etkilerini tamamlayabilir ve bu da sinerjistik klinik fayda sağlar. Bildiğimiz kadarıyla, vitiligoda 308-nm eksimer lazer ve matrinin birleşik kullanımını kapsamlı bir şekilde inceleyen veya serum biyobelirteç profili ile immünolojik korelasyonlarını değerlendiren daha önceki hiçbir klinik çalışma olmamıştır.

Bu gerekçeye dayanarak, 308-nm eksimer lazer ve matrine kombinasyonunun, aynı anda melanosit yenilenmesini teşvik ederek ve anormal bağışıklık aktivasyonunu baskılayarak eksimer lazer monoterapisine kıyasla üstün terapötik etkinlik sağlayacağını varsaydık. Özellikle, yardımcı matrine uygulamasının klinik repigmentasyon oranlarını artıracağını, serum immünoglobulin seviyelerini (IgG, IgA ve IgM) fizyolojik dengeye doğru modüle edeceğini ve IFN-γ, TNF-α ve IL-17 gibi pro-inflamatuar sitokinleri azaltacağını ve anti-inflamatuar sitokinleri artıracağını varsaydık. Bu çalışmada, bu kombinasyon terapiyle tedavi edilen vitiligo hastalarında klinik sonuçları, immünolojik parametreleri ve korelasyonlarını sistematik olarak değerlendirdik. Bu araştırmanın yeniliği, çift mekanik odak—yerel fotobiyolojik uyarım ve sistemik bağışıklık modülasyonu—ile terapötik mekanizmaları açıklamak için nicel biyobelirteç analizinin entegrasyonunda yatmaktadır. Matrinin hedefli fototerapiyle birleştiğinde immünoregülasyon etkisini netleştirerek, çalışmalarımız vitiligo yönetiminde yeni bir terapötik paradigma için kanıta dayalı bir temel sağlamayı amaçlıyor. Sonuç olarak, bu bulgular, sadece repigmentasyonu değil, aynı zamanda uzun vadeli hastalık stabilizasyonu ve nüks önlemesini sağlayan kesin, bağışıklık rehberli fototerapi stratejilerine doğru alanı ilerletebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Helsinki Bildirgesi'nin etik ilkeleri ve insan araştırmalarını düzenleyen kurumsal düzenlemelere uygun olarak yürütülmüştür. Çalışma, Helsinki Bildirgesi'nin etik ilkelerine uygun olarak yürütüldü ve Xingtai Halk Hastanesi Dermatoloji Bölümü Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay ID: 2021[029]). Tüm katılımcılar katılımdan önce yazılı bilgilendirilmiş onay sundu.

Hasta seçimi
Ocak 2021'den Aralık 2023'e kadar 3 yıllık bir dönemde klinik olarak vitiligo teşhisi konmuş toplam 232 hasta kayıt altına alındı. Tüm katılımcılara segmental olmayan vitiligo (genelleştirilmiş veya lokal tip) teşhisi konmuş ve kayıttan önceki 3 ay içinde yeni lezyonların yokluğu veya varlığına göre stabil veya ilerleyici olarak sınıflandırılmıştır. Hastalık süresi ve lezyon dağılımı başlangıçta kaydedilmiştir. Kayıt kriterleri arasında, dermatologlar tarafından klinik muayene, Wood lambası aydınlatması ve dermoskopi ile stabilize veya ilerleyici vitiligo olan 18 ila 65 yaş arası kişiler yer alıyordu. Dışlama kriterleri arasında hamilelik, emzirme, fotoalerjik bozukluklar, sistemik otoimmün hastalık, şiddetli karaciğer veya böbrek disfonksiyonu ve 3 ay içinde sistemik kortikosteroidler, immünosupresanlar veya fototerapi önceden kullanılma vardı. Tüm işlemler sürekli etik denetim altında gerçekleştirildi ve tedavi süreci boyunca hasta konforu ve güvenliği sağlandı.

Çalışma genel bakışı ve tedavi akışı
Hasta kaydı, grup dağılışı, takip değerlendirmeleri ve biyomarker analizi dahil olmak üzere çalışmanın genel iş akışı Şekil 1'de gösterilmiştir. Uygun katılımcılar, iki paralel çalışma grubundan birine 1:1 oranında atandı: 308-nm eksimer lazer monoterapi grubu (sadece eksimer lazer; n = 116) ve kombinasyon terapi grubu (308-nm eksimer lazer artı oral matrine; n = 116). Grup tahsisi, sonuç değerlendirmesinde yer almayan bağımsız bir araştırma personeli tarafından hazırlanan bilgisayar tarafından oluşturulmuş rastgele bir dizis kullanılarak gerçekleştirildi; Atamalar, kayıt sonrası açılarak tedavi dağılımı belirlenmek için sıralı numaralandırılmış, mühürlenmiş zarflara yerleştirilir ve açılır. Terapötik iş akışı üç ana aşamadan oluşuyordu: (1) başlangıç değerlendirmesi ve dokümantasyonu, (2) atanan rejime göre 12 haftalık aktif tedavi ve (3) tedavi sonrası değerlendirme, serum immünoglobulinleri ve inflamatuar sitokinlerin laboratuvar testlerini içeriyordu. Her hasta standart bakım planı, aynı takip aralıkları ve tekiz laboratuvar analiz prosedürleri aldı. Klinik fotoğraflar ve VASI puanlamaları, tedavi tahsisiline kör dermatologlar tarafından yapıldı. Tüm işlemler Xingtai Halk Hastanesi'nin dermatoloji fototerapi bölümünde, kontrollü ortam koşulları altında (oda sıcaklığı 22–24 °C, bilgili nem %40–%60) gerçekleştirildi.

Tedavi alanının hazırlanması
Her lazer seansından önce, hedef pigmentsizleştirilmiş bölgeler steril fizyolojik tuzlu su ile nazikçe temizlenip tüy içermeyen tıbbi gazlı bezle kurutuldu. Lezyon deri incelenerek enfeksiyon, ekkoriasyon veya kabuk yokluğu doğrulandı. Tek bir ziyarette birden fazla lezyon tedavi edildiğinde, her lezyon sıralı olarak hazırlanıp tedavi edilirdi. Tek bir ışın alanını aşan lezyonlar bitişik ışık alanlarına ayrıldı ve çevresindeki normal deri, gereksiz maruziyeti en aza indirmek için opak bir UV engelleyici tabaka ile örtüldü. Hastalara, tedaviden önce 24 saat boyunca topikal ajanlardan, fotosensitize edici kozmetiklerden veya parfümlerden uzak durmaları tavsiye edildi. İşlem boyunca hem hasta hem de operatör koruyucu gözlükler taktı.

308-nm eksimer lazer ışınlama prosedürü
Monokromatik 308 nm ksenonklorür (XeCl) eksimer lazer sistemi kullanıldı. Tüm lazer seansları, tutarlı enerji çıkışı, radyasyon mesafesi ve tekrarlanabilirlik sağlamak için iki eğitimli dermatoloji hekim tarafından standart bir protokol kapsamında gerçekleştirildi. Cihaz çıkışı, her tedavi gününden önce kalibre edilmiş bir UV güç ölçeriyle doğrulandı ve tüm sistemler, hata marjını %±5'in altında tutmak için sertifikalı bir teknisyen tarafından haftalık kalibrasyondan geçti. İlk ışınlamadan önce, her hasta için minimum eritem dozu (MED) iç ön koldaki küçük test alanlarına (100–400 mJ/cm2) kademeli dozlar uygulanarak ve 24 saat sonra eritem yanıtı değerlendirilerek belirlendi; Sonuçlar fotoğraflandı ve hasta kartlarına kaydedildi. Temsilci bir MED dokümantasyonu ve oturum seans doz ayarlama tablosu Ek Tablo 1'de sunulmaktadır. MED, 24 saatte net fark edilebilen, uniform bir eritem üreten en düşük test dozu olarak tanımlandı. Başlangıç dozu, bireysel MED'in %80–%90'ı olarak belirlendi ve sonraki doz değişiklikleri, önceki seans 24 saatlik eritem yanıtına dayanan önceden tanımlanmış bir algoritmayı takip etti (eksik veya hafif eritem için %10–%20 artış, orta dereceli eritem için aynı dozu korumak, kabarcıklı veya belirgin ağrı için %10–%20 azalmak). Başlangıç terapötik doz 150–250 mJ/cm2 olarak belirlendi (bireysel MED'in yaklaşık %80–%90'ı). Her seans, hastanın ayarlanabilir bir sandalyede rahatça oturmasıyla başlardı. Lazer el cihazı, cilde 10–15 cm mesafede dik (90°) tutuluyordu ve dairesel veya dikdörtgen ışınlanma alanları tamamen depigmentlenmiş alanları minimum örtüşmelerle kapatacak şekilde hizalanıyordu. Aşıtlama, akıcılığa bağlı olarak her bir pozlama alanı için 1–3 saniye sürerdi. Dozlar, önceki eritem yanıtına göre seans başına %10–%20 artış yaptı; Orta derecede eritem oluşursa, önceki doz korunurken, kabarcık veya ağrı %10–%20 azalma gerektiriyordu. Maksimum doz 2.000 mJ/cm 2'yi aşmamıştır. Her seans, tüm görünür lezyonları kapsıyor ve süreye göre 10–20 dakika sürüyordu. Tedaviler, haftada 2 kez, seanslar arasında en az 72 saat ile toplam 12 hafta (24 seans) uygulandı. Aşıtma sonrasında, yerel eritemi hafifletmek için ince bir steril aloe bazlı jel tabakası uygulandı. Hastalara 48 saat boyunca güneşe maruz kalmamaları ve tedavi boyunca geniş spektrumlu güneş kremi (SPF >30) kullanmaları tavsiye edildi. >%50 repigmentasyon gösteren lezyonlar aynı parametreler altında stabil pigmentasyon sağlanana kadar devam etti.

Ağızdan matrine uygulaması
Kombine grubunda, Sophora flavescens köklerinden oluşan steril sulu bir ekstrakt, Çin Farmakopeisi (2020 baskısı)30'a uygun olarak hazırlanmış ve yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) ile ≥doğrulanmış %98 saflıkla 5 mg/mL konsantrasyona standartlaştırılmıştır. Çözelti fotodegradasyonu önlemek için 4 °C sıcaklıkta amber cam şişelerde saklandı. Rastgele toplu testler, alkaloid konsantrasyonunu (5 ± 0,3 mg/mL) ve mikrobiyal sterilliği doğruladı. Her hasta, matrine çözeltisini 12 hafta boyunca günde iki kez 0,3 g (60 mL) dozda oral olarak aldı ve lazer tedavi programıyla senkronize edildi. Dozaj, kronik inflamatuar dermatozlarda avantajlı bir güvenlik profiliyle etkili immünomodülasyonu gösteren önceki farmakolojikverilere dayanarak seçildi 31,32. Hastalara, gastrointestinal rahatsızlığı en aza indirmek ve terapi sırasında alkol, sert çay ve baharatlı yiyeceklerden kaçınmak için öğünlerden 30 dakika sonra çözeltiyi almaları tavsiye edildi. Hafif mide bulantısı veya yorgunluk, az miktarda ılık su verilmesiyle yönetilirdi. Tedavi uyumu, her takip ziyaretinde ilaç günlüğü ve şişe dönüşü doğrulaması ile değerlendirildi. Her ziyarette güvenlik, gastrointestinal rahatsızlık, yorgunluk ve karaciğer intoleransı belirtileri gibi yan etkilerin dokumanlanması ve yapılandırılmış semptom sorgulaması ile değerlendirildi. Gözlem süresi boyunca karıştırıcı etkileri önlemek için ek sistemik ilaçlar, topikal kortikosteroidler veya immünosupresantlar kabul edilmedi.

Klinik yanıtın değerlendirilmesi
Pigmentasyon değişiklikleri, başlangıçta ve 4, 8 ve 12. haftalarda tedavi bilgilerini görmeden iki deneyimli dermatolog tarafından değerlendirildi. Standartlaştırılmış dijital fotoğraflar, aynı ışık ve kamera ayarlarında çekildi (mesafe 60 cm, pozlama 1/60 s, ISO 200). Repigmentasyon derecesi, Vitiligo Alan Puanlama İndeksi (VASI) kullanılarak nicel olarak belirlendi. Lezyonlar ayrıca dört kategoriye ayrıldı: Mükemmel (≥%75 repigmentasyon), İyi (%50–%74), Orta (%25–%49), Kötü (<%25). Hastalar ayrıca memnuniyet ve semptomların hafiflemesi için 10 puanlık Görsel Analog Ölçeği (VAS) tamamladılar. Her ziyarette eritema, yanma, kabarış, kabarma ve hiperpigmentasyon gibi yan etkiler belgelendi.

Serum örnek koleksiyonu
Biyobelirteç analizi için, her hastadan başlangıç noktasında ve 12. hafta sonunda serum ayırma tüpleri kullanılarak her hastadan oruçlu periferik kan (5 mL) alındı. Örnekler oda sıcaklığında 30 dakika pıhtı tutuldu ve 800 x g sıcaklığında 10 dakika boyunca 4 °C'de santrifüj edildi. Süpernatant serum, analiz edilene kadar 0,5 mL kriyoviallere alikotlenerek −80 °C'de depolandı. Tüm örnekler, sitokin bozulmasını en aza indirmek için toplandıktan sonra 2 saat içinde işlendi.

Serum immünoglobulinlerinin nicelendirilmesi
Serum IgG, IgA ve IgM konsantrasyonları, üreticinin talimatlarına uygun olarak otomatik immünonefelometri kullanılarak belirlendi. Kalibrasyon eğrileri, referans standartlarının seri seyreltmeleri kullanılarak hazırlandı. Her test, yüksek ve düşük konsantrasyonlarda kalite kontrol serumlarını içeriyordu. Ölçümler g/L cinsinden ifade edildi ve 2 kez tekrarlandı, böylece analiz içi varyasyon %5< sağlandı. Cihazın hassasiyeti ve kalibrasyonu, izlenebilir kontrol standartlarıyla günlük olarak doğrulanıyordu. Sonuçlar elektronik olarak kaydedildi ve hasta bilgilerine kör olan iki bağımsız teknisyen tarafından incelendi.

İltihap sitokinlerin ölçümü
Sitokin profilleme, çoklu enzim bağlantılı immünosorbent test (ELISA) platformu kullanılarak nicelendirilen IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17 ve IL-10'u içeriyordu. Reaktif hazırlanması, üreticinin standart protokolüne uyuldu. Kısa süreliğine, her antikor kaplı kuyuya 100 μL seyreltilmiş serum eklendi ve 37 °C'de 2 saat kuluçka edildi. %0,05 Tween-20 (PBST) içeren fosfatla tamponlanmış tuzlu suyla yıkandıktan sonra, 100 μL biyotinile tespit antikoru eklendi ve 1 saat kuluçka halinde bırakıldı. Kuyular daha sonra streptavidin-yaban turpu peroksidaz ile 30 dakika kuluçka altına alındı, ardından tetrametilbenzidin (TMB) substratı kullanılarak karanlıkta 10 dakika renk gelişimi yapıldı. Reaksiyon, 50 μL 2 mol/L sülfürik asit ile durduruldu ve mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm emilimi ölçüldü. Standart eğriler, rekombinant sitokinlerin seri seyreltilmesiyle oluşturuldu ve konsantrasyonlar pg/mL olarak ifade edildi. Tüm örnekler çift ölçülüydü. Tekrarlanabilirliği sağlamak için, analizler arası varyasyon katsayısı (CV) %10'un altında tutuldu. Boş kuyular serumsuz test tamponu içerirken, negatif kontrol kuyuları ise örneklerle aynı şekilde işlenmiş ve analiz özgüllüğünü doğrulamak için 0 pg/mL standardına eşdeğer sitokin içermeyen matris içeriyordu. Hemolizlenmiş veya lipemik örnekler nihai analizden çıkarıldı.

İstatistiksel analiz
Veriler, özel bir elektronik veritabanına girildi ve iki bağımsız veri yöneticisi tarafından doğruluk açısından çapraz kontrol edildi. Örneklem büyüklüğü, beklenen etki büyüklüğüne (Cohen'in d = 0.5) göre tahmin edildi; α = 0.05 ve güç (1–β) = 0.8 ile her grup başına en az 100 katılımcı elde edildi. Sitokinler arasında çoklu karşılaştırmaları kontrol etmek için, uygun olduğunda Bonferroni düzeltmesi uygulandı. Yaş, cinsiyet, hastalık süresi ve başlangıç lezyon alanı gibi olası karıştırıcı faktörleri ayarlamak için çok değişkenli lineer regresyon uygulandı. Sürekli değişkenlerin normal dağılımı Shapiro–Wilk testi kullanılarak doğrulandı. Betimleyici istatistikler, normal dağıtılmış veriler için ortalama ± standart sapma (SD) olarak, çarpık veriler için ise medyan (çeyreklerarası aralık, IQR) olarak sunuldu. Tedavi öncesi ve sonrası değişiklikler çift t-testleriyle analiz edilirken, gruplar arası karşılaştırmalar uygun şekilde bağımsız örnek t-testleri veya Mann–Whitney U testleriyle analiz edildi. Kategorik veriler chi-kare veya Fisher'ın tam testi ile karşılaştırıldı. Sitokin seviyeleri, immünoglobulinler ve pigmentasyon iyileşmesi arasındaki korelasyonlar Pearson korelasyon katsayısı kullanılarak değerlendirildi. Tüm analizler SPSS v26.0 (RRID: SCR_002865) ile yapıldı ve iki taraflı p < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Başlangıç klinik özellikleri, gruplar arasında karşılaştırılabilir demografik ve hastalık profillerini gösterdi
Toplamda 232 segmental olmayan vitiligo hastası kayıt altına alındı ve eksimer grubuna (n = 116) veya lazer ile oral matrine alan kombinasyon tedavi grubuna (n = 116) eşit şekilde dağıtıldı. Yaş (35,8 ± 6,0 vs . 35,4 ± 5,6 yıl), cinsiyet dağılımı (erkek/kadın: 59/57 vs. 59/57), hastalık süresi (4,8 ± 1,0 vs. 4,7 ± 0,8 yıl), lezyon ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, segmental olmayan vitiligo tedavisi için 308 nm eksimer lazeri ağız matrinine ile birleştirilen birleşik bir terapötik yaklaşım sunmaktadır. Temel öneri, çift modülasyonun—melanositlerin lokal fotobiyolojik uyarılması ve sistemik immünoregulasyonun—eksimer grubuna göre daha sağlam ve sürdürülebilir repigmentasyon sağlayabileceğidir. Bulgular bu hipotezi desteklemektedir: kombinasyon tedavi, eksimer lazerin tek başına kullanıldığı döneme göre daha erken perifoliküler pigmentas...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Açıklanacak finansal çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar, Dermatoloji Bölümü'nün tüm ekibini proje boyunca gösterdikleri sıkı çalışmalar için teşekkür etmek ister.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
308-nm XeCl Excimer Lazer SistemiSTRATA Cilt Bilimleri (XTRAC)Velocity 400 (Model)Vitiligo lezyonları için hedeflenen 308-nm UVB lazeri; Modeli sitenizde doğrulayın; veya eşdeğer cihaz
– 80 ve derece; C Ultra-Low DondurucuTermo BilimselForma 900 Serisi (Model 980)Uzun vadeli serum depolama
96-Well ELISA Plakaları (Yüksek Bağlı)Corning Costar9018Eğer kendi içi kaplama veya tek plexli iş akışları kullanıyorsanız
Ayarlanabilir Tıbbi SandalyeMidmark641 Prosedür BaşkanıHasta pozisyonu tutarlı radyasyon mesafesi için
Aloe bazlı Yatıştırıcı Jel3M9236Eritem rahatlaması için ince bir radyasyon sonrası katman; veya eşdeğer tıbbi jel
Amber Cam Şişe (500 mL)Fisherbrand02-897-2J4 derece ve derecede ışık korumalı depolama C için matrine çözeltisi
Analitik Denge (0.1 mg)METTLER TOLEDOME104EGravimetrik hazırlık ve kalite kontrol
Otomatik İmmünonefelometreSiemens HealthineersBN ProSpec SistemiÜretici başına IgG/IgA/IgM miktarını ölçüyor' s IFU
Barkod Etiketleri (Kriyo-güvenli)Çeşitlendirilmiş BiyoteknolojiCRY-1000Örnek takibi ve kontrol zinciri
Biyotinillenmiş Tespit Antikor SetiMSDPanelle birlikteAntikor yakalamak için eşleştirilmiş
Geniş spektrumlu güneş kremi SPF ≥ 30Neutrogena070501017052 (Ultra Şeffaf SPF 50)Seans sonrası fotokoruma; Ayakta tedavi danışmanlığı maddesi
İmmünoglobulinler için kalibratörlerSiemens HealthineersN Protein Standardı SLNefelometri için izlenebilir kalibrasyon
IG testleri için kontrol serumu (yüksek/düşük)Siemens HealthineersN/T Protein KontrolleriNefelometrik koşuların günlük kalite kontrolü
Kriyojenik Şişeler, 0.5 mLTermo Bilimsel Nunc375418Serum aliquotları; dış diş parçası; DNaz/RNase-free
DermatoskopDermLiteDL4Lezyon incelemesi için polarize elde taşınan dermatoskop
Dermoskopi/Fotoğraf Ölçek Kartı3GenÖlçek/Renk Referans KartıZaman noktaları arasında renk tutarlılığını sağlar
Standart Görüntüler İçin Dijital KameraKanonEOS 80DSabit mesafe 60 cm; pozlama 1/60 saniye; ISO 200; Tripod tavsiye edilir
Sabit Açılı Soğutmalı SantrifüjEppendorf5810 R800 & Times; g, 10 dk, 4 ve derece; C serum ayrımı
HPLC Sütunu (C18, 4.6& kez; 250 mm, 5 & mikro; m)ÇevikZORBAX Tutulması Plus C18, 959990-902Rutin alkaloid ayrımı; veya eşdeğeri
HPLC SistemiÇevik1260 Infinity II (G7111B)Saflık doğrulaması ve matrinin parti standartlaştırılması
Görüntü Analizi / ÖlçümImageJ (NIH)1.54 (RRID:SCR_003070)Fotoğraflardan isteğe bağlı lezyon alanı niceliği
Tüy İçmeyen Tıbbi Gazlı Bez (Steril)Johnson & Johnson546112Kurutma işlemi alanı temizlik sonrası
Matrine (≥ %98, HPLC)MedChemExpressHY-N0156Ağızdan alınan çözelti hazırlığı; yerel tedarikçi ve farmakopi uyumunu doğrulamak
Mikroplaka Okuyucu (450 nm)BioTek (Agilent)Synergy H1450 nm'de soğukkanlık; yol boyu düzeltmesi
Mikroplaka YıkayıcıBioTek (Agilent)ELx405Otomatik yıkama döngüleri; değişkenliği azaltır
Çoklu İnsan Sitokin Paneli (Özel 6-plex)Mezo Ölçekli Keşif (MSD)U-PLEX Platform (K15067L)IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17A, IL-10 içerir; veya eşdeğeri
PBS TabletleriGibco18912-014Yıkama/tamponlar için PBS hazırlığı
Plaka Kaplama FilmleriBio-RadMSB1001İnkubasyon sırasında buharlaşmayı önler
Koruyucu UV gözlükler (operatör)Uvex (Honeywell)S0360X Ultra-Spec 2000Operatör göz koruması; Özel çift kullanın
Koruyucu UV gözlükleri (hasta)Uvex (Honeywell)S0360X Ultra-Spec 2000Hasta güvenliği için ışınlama sırasında UV engelleyici gözlükler
Serum Ayırma Tüpleri (SST II Advance)BD Vacutainer367955Başlangıçta ve 12. haftada açlık kan alımı
İstatistiksel YazılımIBMSPSS İstatistikleri v26.0 (RRID:SCR_002865)Protokol başına birincil veri analizi
Steril Fizyolojik Salin (%0,9)Baxter2B1324 (500 mL)Her lazer seansından önce lezyon temizliği
Stop Solution (2 M H2SO4)Sigma-Aldrich258105TMB reaksiyonunu durdurur
Streptavidin-HRPTermo BilimselN100Algılama reaktifi; kit uyumlu
TMB Substratı (ELISA)Termo Bilimsel34028Kromojenik gelişim; 10 dakika karanlıkta
Mesafe Göstergeli TripodManfrottoMKCOMPACTLT-BKKamera-konu mesafesini sabit tutar
Tween-20 (PBST için %0,05)Sigma-AldrichP1379Yıkama tamponu yüzey aktif maddesi
UV Radyometre / Güç ÖlçerUluslararası Işık TeknolojileriILT2400Günlük çıktı doğrulaması ve MED testi için; SED240/NS254 dedektör veya eşdeğeri ile
UV Engelleyen Opak Örtü/ÖrtüThorlabsBK5 Karartma Kumaşıİstmeyen maruz kalmamak için normal deriyi çevreleyen örtüler; veya eşdeğeri
VASI Puan Kağıtları (Basılı Olunmuş)Şirket içiNA-VASI-2025Standartlaştırılmış klinik puanlama formları; arşiv ve konu kimliği
Wood' s Lambası (UV-A, 365 nm)SpektrolinENF-260CKlinik tanı ve lezyon kenarı değerlendirmesi
Wood' Lamba Kalkanı BaşlığıDermLiteDL HoodUV-A muayenesinde kontrastı artırır

Kaynaklar

  1. Brunner, P. M., et al. Transcriptomic profiling of vitiligo patients shows polar immune dysregulation in involved and uninvolved skin. J Allergy Clin Immunol. 156 (4), 993-1007 (2025).
  2. Carbone, M. L., et al. Insight into immune profile associated with vitiligo onset and anti-tumoral response in melanoma patients receiving anti-PD-1 immunotherapy. Front Immunol. 14, 1197630(2023).
  3. Lerner, G., et al. Regulatory T cell dysregulation in vitiligo: A meta-analysis and systematic review of immune mechanisms and therapeutic perspectives. Int J Dermatol. 64 (12), 2247-2256 (2025).
  4. Lu, J., et al. Identification of shared biomarkers and immune infiltration signatures between vitiligo and Hashimoto's thyroiditis. Clin Cosmet Investig Dermatol. 17, 311-327 (2024).
  5. Ma, B., Wang, X. Unravelling the molecular mechanisms and immune landscape of vitiligo: A comprehensive bioinformatics study on melanogenesis-related genes. Ann Hum Biol. 52 (1), 2468692(2025).
  6. Okamura, K., Suzuki, T. Genetics and epigenetics in vitiligo. J Dermatol Sci. 117 (3), 45-51 (2025).
  7. Yang, M., Wang, H., Zhang, R. Bioinformatics analysis of oxidative stress-related genes and immune infiltration patterns in vitiligo. Clin Cosmet Investig Dermatol. 18, 475-489 (2025).
  8. Al Abadie, M. S., Chaiyabutr, C., Patel, K. X., Gawkrodger, D. J. Vitiligo and psychological stress: A hypothesis integrating the neuroendocrine and immune systems in melanocyte destruction. Int J Dermatol. 63 (7), 841-843 (2024).
  9. Hu, Y., Wang, S. B., Wang, K., He, M. J. From phenotype to molecules: Unveiling the genetic and immunological bridges between autoimmune diseases and vitiligo. Clin Cosmet Investig Dermatol. 17, 2475-2486 (2024).
  10. Jin, S., et al. The role of regulatory T cells in vitiligo and therapeutic advances: A mini-review. Inflamm Res. 73 (8), 1311-1332 (2024).
  11. Li, J., et al. The relationship between psoriasis and vitiligo: From a comprehensive study. Skin Res Technol. 30 (7), e13868(2024).
  12. Patel, R., et al. Prevalence of vitiligo among children and adolescents in the United States. Dermatology. 239 (2), 227-234 (2023).
  13. Rao, H., et al. Case report: Immune checkpoint inhibitor-related vitiligo-like depigmentation in non-melanoma advanced cancer: A report of three cases and a pooled analysis of individual patient data. Front Oncol. 12, 1099108(2022).
  14. Sun, C., Ding, H., Zhang, L., Wang, J., Su, M. Co-regulatory mechanisms and potential markers of oxidative stress-related genes in vitiligo and alopecia areata. Skin Res Technol. 30 (8), e70001(2024).
  15. Wang, X., et al. Circulating memory T cells and TCF1 (+) T cells aid in diagnosis and monitor disease activity in vitiligo. J Pharm Anal. 14 (11), 100998(2024).
  16. Wu, L., Han, T., Wang, Y., Li, S., Li, C. Epigenetic regulation in vitiligo: Mechanisms, challenges, and therapeutic opportunities. Curr Opin Immunol. 95, 102580(2025).
  17. Xie, B., Zhu, Y., Shen, Y., Xu, W., Song, X. Treatment update for vitiligo based on autoimmune inhibition and melanocyte protection. Expert Opin Ther Targets. 27 (3), 189-206 (2023).
  18. Chen, J., et al. Mif inhibition alleviates vitiligo progression by suppressing CD8 (+) T cell activation and proliferation. J Pathol. 260 (1), 84-96 (2023).
  19. Kano, S., et al. Differences in the immune microenvironment between improved and non-improved cases of vitiligo after halo nevus excision. J Dermatol Sci. 109 (3), 136-142 (2023).
  20. Liu, H., Wang, Y., Le, Q., Tong, J., Wang, H. The ifn-γ-cxcl9/CXCL10-CXCR3 axis in vitiligo: Pathological mechanism and treatment. Eur J Immunol. 54 (4), e2250281(2024).
  21. Lo, J., Hanania, H. L., Keiser, M. F., Patel, A. B. Immune checkpoint inhibitor-induced vitiligo in cancer patients: Characterization and management. Arch Dermatol Res. 315 (6), 1697-1703 (2023).
  22. Lu, L., et al. Vitiligo associated with type 2 immune inhibitors: Faers analysis and literature review. J Dermatol. 52 (6), 1008-1014 (2025).
  23. Mazzetto, R., et al. Anti-tumor immunity and vitiligo: From immune-related adverse reactions to protection from cancer. Immunotherapy. 16 (13), 841-843 (2024).
  24. Starace, M., et al. Immune checkpoint inhibitor-induced vitiligo-like depigmentation. JAMA Dermatol. 161 (2), 216-218 (2025).
  25. Xin, Y., Yuan, T., Wang, J. Circulating immune cells and vitiligo: A bidirectional two-sample mendelian randomization study. Front Immunol. 15, 1391186(2024).
  26. Yang, P., et al. Single-cell transcriptomics reveals peripheral immune responses in non-segmental vitiligo. Front Immunol. 14, 1221260(2023).
  27. Ezzedine, K., et al. Efficacy and safety of oral ritlecitinib for the treatment of active nonsegmental vitiligo: A randomized phase 2b clinical trial. J Am Acad Dermatol. 88 (2), 395-403 (2023).
  28. Gay-Mimbrera, J., et al. Comprehensive single-cell chromatin and transcriptomic profiling of peripheral immune cells in nonsegmental vitiligo. Br J Dermatol. 193 (1), 115-124 (2025).
  29. Liu, K., et al. Jak inhibitors in immune regulation and treatment of vitiligo. Cytokine Growth Factor Rev. 80, 87-96 (2024).
  30. National Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. Volume I, 2020 Edition, China Medical Science Press. Beijing. (2020).
  31. Huang, P., et al. Matrine regulates Th1/Th2 inflammatory responses by inhibiting the Hsp90/nf-κb signaling axis to alleviate atopic dermatitis. Kaohsiung J Med Sci. 39 (5), 501-510 (2023).
  32. Shi, H. J., et al. Oxymatrine therapy inhibited epidermal cell proliferation and apoptosis in severe plaque psoriasis. Br J Dermatol. 181 (5), 1028-1037 (2019).
  33. Seneschal, J., et al. Worldwide expert recommendations for the diagnosis and management of vitiligo: Position statement from the international vitiligo task force-part 2: Specific treatment recommendations. J Eur Acad Dermatol Venereol. 37 (11), 2185-2195 (2023).
  34. Seong, S. H., Oh, S. H. Up-and-coming drugs for the treatment of vitiligo. Ann Dermatol. 36 (4), 197-208 (2024).
  35. Upadhya, S., Andrade, M. J., Shukla, V., Rao, R., Satyamoorthy, K. Genetic and immune dysregulation in vitiligo: Insights into autoimmune mechanisms and disease pathogenesis. Autoimmun Rev. 24 (8), 103841(2025).
  36. Wang, Y., et al. Innate immune activation in vitiligo: Mechanisms and pathophysiological implications. Front Immunol. 16, 1631074(2025).
  37. Zhang, M., et al. Vitiligo: An immune disease and its emerging mesenchymal stem cell therapy paradigm. Transpl Immunol. 76, 101766(2023).
  38. Luo, L., Zhu, J., Guo, Y., Li, C. Mitophagy and immune infiltration in vitiligo: Evidence from bioinformatics analysis. Front Immunol. 14, 1164124(2023).
  39. Sant'anna-Silva, A. C. B., et al. Vitiligo auto-immune response upon oxidative stress-related mitochondrial DNA release opens up new therapeutic strategies. Clin Transl Med. 14 (8), e1810(2024).
  40. Sibbald, C. Alopecia areata: An updated review for 2023. J Cutan Med Surg. 27 (3), 241-259 (2023).
  41. Wang, L., et al. Advances in psoriasis research: Decoding immune circuits and developing novel therapies. Int J Mol Sci. 26 (18), 9233(2025).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Vitiligo TedavisiMatrin Tedavisiİmmün ModülasyonMelanosit RejenerasyonuFototerapiVASI SkoruSitokin Analizi

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.