Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Bu prosedürün genel amacı, Hemi dalak tekniği ile karaciğer metastazlarının klinik öncesi aynalama pankreas kanseri modelini oluşturmaktır. Bu, önce kültürlenmiş pan O2 tümör hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonunun oluşturulmasıyla gerçekleştirilir. İşlemin ikinci adımı, tamamen anestezi uygulanmış bir farenin dalağını eksprese etmek ve bölmektir.

Sonraki adımlar, tümör hücrelerini tek bir Hemi dalağına enjekte etmek ve enjekte edilen hemi dalağını çıkarmaktır. Son adım, karnı kapatmak ve fareyi anesteziden kurtarmaktır. Sonuç olarak, sağkalımı izleme, ardından karaciğer nekropsisi ve ek non-invaziv görüntüleme ile metastatik hastalık ilerlemesinde farklılıklar gösteren sonuçlar elde edilebilir.

Bu teknikler, metastatik süreçteki temel faktörlerin belirlenmesi, yeni terapötik ajanların test edilmesi ve tümör immünolojisi araştırmalarının yürütülmesi gibi kanser araştırma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin etkileri pankreas kanserinin tedavisine kadar uzanır, çünkü immünokompetan fareler aynı tümör aşılamasına tabi tutulur, ameliyata hazırlanmadan önce sürekli olarak tümör ve atik tutarlı bir zaman noktası geliştirir. Buz üzerinde depolanan mililitrede 20 milyon hücrede PBS'de iki hücre hazırlayın.

Daha sonra, sekiz ila 12 haftalık bir dişi C 57 siyah altı fareyi uyuşturun. Bölünmüş dozları kullanarak, reflekslerini test ederek farenin uyuşturulduğundan emin olun. Gerektiği kadar ek dozlar uygulayın, farenin gözlerine merhemle bakın ve ardından karnı tıraş etmeye devam edin.

Tıraş olduktan sonra, cildi alternatif %70 etanol ve iyot fırçalarıyla temizleyin. Ardından fareyi örtün. Bir neşter kullanarak cilt ve periton yoluyla sol kulak ile aynı hizada sol subkostal insizyon ile başlayın.

Ardından, insizyonun kraniyal ve coddle yönleri boyunca eşzamanlı dijital basınç uygulayarak dalağı insizyondan ifade edin. Dalak görünürken, alt ucundaki dalak kan damarlarını bulun. Sonra, dalağı bölün.

Ortasına iki adet ufuk orta boy bağlama klipsi yerleştirin. Dalak kutuplarındaki dalak kan damarlarına dikkat edin. Kolayca zarar görürler.

Şimdi, kontaminasyonu önlemek için dalağın üst kutbunu tekrar peritona yerleştirin. Önce 150 mikrolitre PBS'yi 26 gauge beş sekiz inçlik bir şırıngaya çekerek tümör enjeksiyonuna hazırlanın. Daha sonra hazırlanan Panko'nun 100 mikrolitrelik iki hücresini buz üzerinde aynı şırıngaya çekin.

Şırıngayı dik tutun, böylece katmanlar çok fazla karışmaz, enjeksiyonu yapmadan önce iğneyi% 70 etanol çözeltisine batırın. Daha sonra hücreleri, şırınga dik olarak açıkta kalan hemi dalağına yavaşça enjekte edin. Dalağın altındaki hücrelerin zarar görmediğinden emin olmak için şırınganın eğimini dalak kapsülünden gözlemleyin.

Dalak enjeksiyonla birlikte beyazlatılmalıdır. Şimdi dalağı yükseltin ve dalak kan damarlarını tıkamak için dalağın altına orta ufukta bir klips uygulayın. Daha sonra pankreasın en distal yönüne ve dalak damarlarına küçük bir ufuk klipsi uygulayın.

Klipsler yerindeyken, klipslerin üzerini keserek pankreas ve dalak damarlarını hemi dalağından ayırın. Ligasyondan sonra, fareyi yan yatırın ve kesiği damıtılmış suyla yıkayın. Peritonu dört oh koşu dikişi ile kapatarak ameliyatı bitirin.

Ardından, cilt kesiğini kapatmak için iki ila üç cilt klipsi uygulayın, ameliyat sonrası ağrıyı hafifletmek için deri altına kilogram başına dört miligram carprofen uygulayın. Fareyi hareket edene ve düzenli olarak nefes alana kadar bir ısıtma yastığına aktarın. Ameliyattan 30 ila 60 gün sonra, fareyi düzenli solunum gösterene ve normal şekilde hareket edene kadar diğer hayvanların şirketine geri döndürmeyin.

Hayvan yanıt vermediğinde, karnı ortaya çıkarmak için peritondan bir kesi yapmak için makas kullanın. Sonra forseps ve makasla, karaciğeri karından dikkatlice izole edin. Karaciğeri OCT bileşiğine aktarın, sıvı nitrojen kullanarak flaş dondurma yapın ve karaciğeri eksi 80 santigrat derecede saklayın.

Alternatif olarak, karaciğeri 24 saat boyunca oda sıcaklığında% 16 Nötr tampon Formin içinde sabitleyin, ardından parafin uygulayın. İşleme için gömme. Sunulan pankreas hepatik metastaz oluşturma tekniğidir.

Panco ile 100'den fazla uygun şekilde işlenmiş farenin %100'ünde iki tümör hücresi bulunan panco, hemi dalağına enjekte edilen iki tümör hücresi karaciğer metastazı oluşturdu. Ek olarak, şimdiye kadar yapılan tüm deneylerde akciğer ve periton metastazı gözlenmedi. Tedavi edilmeyen enjekte edilen iki fare olan Panko, 30 ila 60 gün arasında karaciğer metastazı ile öldü.

Nekropsilerde, KPC tümör hücreleri gibi benzer metastazlarla sonuçlanan diğer hücrelerin enjekte edilmesiyle her zaman çoklu karaciğer metastazı gözlenmiştir. KPC tümör hücreleri, dokuya özgü KRAS ve P 53 knockin mutasyonlarına sahip farelerden türetilen sinjeneik bir pankreas tümör hücre hattıdır. Bilinen terapötik tedavi ile metastaz oluşumunda bir inhibisyon veya gecikme meydana gelebilir.

Bu nedenle, bu yeni terapötik ajanları test etmek için etkili bir model olabilir. Kullanılacak başka bir araç, bu gelişmeden sonra gelişen metastazları görüntülemek için yeterli çözünürlükte karaciğerin in vivo analizine izin veren küçük hayvan ultrasonudur. Bu teknik, pankreas kanserinde yeni tedavi ajanlarının test edilmesinin yanı sıra metastatik süreci araştırmak için pate kanseri araştırmalarının yolunu açmıştır.

Bu videoyu izledikten sonra, Hemi dalak tekniği kullanılarak karaciğer metastazlarının klinik öncesi aynalayıcı pankreas kanseri modelinin nasıl oluşturulacağını iyi anlamış olmalısınız.