Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Bu hedefe özgü in vivo görüntüleme yaklaşımının genel amacı, inflamatuar barsak hastalığında hastalık aktivitesinin moleküler belirteçlerini görselleştirmektir. Bu yöntem, inflamatuar barsak hastalığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına ve deneysel terapötiklerin veya spesifik hücresel olayların inflamasyon üzerindeki etkisi hakkında ilgili terapötik araştırmalara yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hastalık aktivitesinin uzunlamasına ve noninvaziv olarak izlenebilmesidir.

Bu yöntem enflamatuar bozukluklar hakkında fikir verebilse de, kanser veya bağışıklıkla ilgili hastalıklar gibi diğer hastalıkları incelemek için de uygulanabilir. Koliti indüklemek için, deneysel farelerin içme kaynağını, 100 mililitre otoklavlanmış içme suyunda çözülmüş iki gram dekstran sodyum sülfat veya DSS ile doldurun ve günde fare başına beş mililitre su tahmin edin. Taramadan 24 saat önce, ilgilenilen antikor kokteylini ışıktan korunan steril bir şırıngaya yükleyin ve antikorları deney hayvanlarının kuyruk damarlarına intravenöz olarak enjekte edin.

Deney günü, ışık yansımasını ve emilimini en aza indirmek için deney hayvanlarının karın bölgesindeki kürkü tıraş etmek için elektrikli bir tıraş bıçağı kullanın. Tanımlanmış kalınlık ve absorpsiyon özelliklerine sahip dokuyu taklit eden bir fantom kullanarak, fantomu ilgilenilen antikor çözeltisinin belirli bir hacmi ile doldurun ve FMT cihazındaki floresansı ölçün. Ardından, veteriner floresan aracılı tomografide veya küçük hayvanlar için FMT cihazında, Yeni Çalışma'ya tıklayın ve görüntüleme parametreleri ve dozları da dahil olmak üzere ilgili izleyicileri çalışma açıklamasına dahil edin.

Deney tasarımına göre çalışma grupları oluşturun, her grubu uygun sayıda hayvanla donatın. Sistem izleyici yapıları için kalibre edildiğinde, ilk anestezi uygulanmış fareyi sırtüstü pozisyonda 42 santigrat derece ısıtılabilir bir muayene kasetine yerleştirin. Kaseti görüntüleme sistemine yerleştirin ve ilgili çalışma grubundan uygun örneği seçin.

İzleyici konsantrasyonunun değerlerinin doğru bir şekilde hesaplandığından emin olmak için uygulanan izleyiciyi seçin ve tarama için uygun dalga boyunda floresan yansıtma görüntüsünü elde edin. Tarama alanının ana hatlarını çizmek için Görüntü Al'a tıklayın ve tarama alanının floresan yansıtma görüntüsünde bir kaplama olarak göründüğünü onaylayın. Tarama alanını, ilgili bölgeyi çevreleyene kadar ayarlayın, hatadan veya kalan kürk alanlarından kaçınmaya dikkat edin.

Görüntü hedefine bağlı olarak, tarama alanındaki görüntü veri noktalarının sayısını ayarlamak için bir tarama alanı çözünürlüğü seçin. Ardından, seçilen dalga boyunda görüntü alımına başlamak için Tara'ya tıklayın. Taramanın sonunda, hayvanın kafesine dönmeden önce izleme ile tamamen iyileşmesini sağlamak için hayvanı kasetten çıkarın.

FMT daha sonra deneysel olarak uygun olduğu şekilde çeşitli zaman noktalarında tekrarlanabilir. Elde edilen görüntüleri analiz etmek için uygun görüntüleme analiz yazılımını açın ve ilk tarama için ham verileri seçin. Yeniden yapılandırma aracını kullanarak, floresan dağılımının 3B haritalarını oluşturun.

Tüm taramalar uygun yeniden yapılandırma veri kümesine eklendiğinde, ilgilenilen ilk veri kümesini açın. Seçilen bireysel deney hayvanı için gerçekleştirilen tüm taramalar gösterilecektir. Uygun taramayı seçin ve Yükle'ye tıklayın.

İzleyici dağılımının bir 3D rekonstrüksiyonu, başlangıçta elde edilen floresan yansıtma görüntüsünün bir kaplaması olarak görünecektir. Ardından, yeniden yapılandırılmış 3B haritalarda belirsiz etiket birikimi odaklarını belirleyin ve ilgilenilen bölgeyi seçmek için ölçüm aracını kullanın. Yazılım daha sonra ilgilenilen bölge için bir floresan yoğunluğunun yanı sıra taramanın kalibre edildiği izleyicinin pikomolar miktar ölçümlerini üretecektir.

Bu deneyde, aktive edilmiş makrofajları doğrudan görselleştirmek için murin F4/80'e karşı floresan konjuge bir antikor kullanıldı. Kolitik farelerin kolonlarında kolitik olmayan kontrol hayvanlarına kıyasla floresan aracılı tomografi ile önemli ölçüde yüksek bir floresan izleyici birikimi ölçüldü, bu da kolitik hayvanlarda monosit infiltrasyonunda ve aktif makrofajlara farklılaşmada bir artış olduğunu gösterdi. Tersine, spesifik olmayan bir floresan konjuge IgG antikorunun uygulanması, kolitik veya kolitik olmayan kontrol grubunda karın veya bağırsakta saptanabilir bir floresan tepkisi vermedi ve bu da F4 / 80 antikorunun prob-hedef etkileşiminin özgüllüğünü gösterdi.

Ekilen kolonlarda F4/80 yönelimli izleyici birikiminin ex vivo ölçümleri, in vivo olarak tespit edilen F4/80 izleyici sinyal birikiminin kolonik kökenini daha da doğrular. Gerçekten de, hesaplanan bağlı antikor miktarları, histolojik olarak belirlenmiş sızan makrofaj sayıları ile iyi bir şekilde ilişkilidir ve bu da spesifik izleyicilerle in vivo görüntülemenin lokal hastalık aktivitesinin göstergesi olabileceğini doğrular. Bir kez ustalaştıktan sonra, düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse bu birkaç dakika içinde gerçekleştirilebilir ve analiz edilebilir.

Spesifik antikor bazlı izleyicilerin üretimi de dahil olmak üzere hazırlık adımları tipik olarak iki ila üç gün sürer. Bunun gibi deneysel bir prosedür planlarken, hem antikor hem de hayvan hastalığı modeli için uygun ve güvenilir kontrollerin dahil edilmesi önemlidir. Bu prosedürü takiben, ek soruları yanıtlamak ve verileri doğrulamak ve ölçmek için kolonoskopi veya akış sitometrisi gibi diğer yöntemler uygulanabilir.