Name: Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin Canlı Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Keşfedin, hasta kaynaklı tümör eksplantlarını kullanarak ilaç direncini tahmin etme yöntemini. Bu 3D preklinik platform, kanser tedavilerinde kişiselleştirilmiş biyobelirteç keşfi için klinik olarak güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Leicester NHS Trust Üniversite Hastaneleri'ndeki cerrahlara ve patologlara cerrahi resekre tümör dokusu sağladıkları için teşekkür ederiz. Ayrıca Core Biotechnology Services bünyesindeki Histoloji tesisine FFPE doku bloklarının doku işleme ve bölümleme konusundaki yardımları için ve Kees Straatman'a Vectra Polaris kullanımına destek için teşekkür ediyoruz. Bu araştırma, Leicester Üniversitesi, MRC Toksikoloji Birimi, Kanser Araştırmaları İngiltere Terapötik Keşif Laboratuvarları ve LifeArc olmak üzere dört ortaktan oluşan Explant Konsorsiyumu tarafından desteklendi ve finanse edildi. CRUK-NIHR Leicester Deneysel Kanser Tıbbı Merkezi (C10604/A25151) tarafından ek destek sağlanmıştır. GM, CD ve NA için fon, Pfizer'dan sağlanan finansmanla desteklenen Breast Cancer Now's Catalyst Programı (2017NOVPCC1066) tarafından sağlandı.

Açıklayacak bir şey yok

Bu makalede PDE'lerin üretimi, ilaç tedavisi ve analizine yönelik yöntemler açıklanmaktadır ve platformun preklinik bir model sistemi olarak avantajları vurgulanmaktadır. Yapısızlaştırmasını içermeyen yeni resected bir tümörün ex vivo kültürü, tümör mimarisi13,24'ün tutulmasını ve böylece TME'deki hücresel bileşenlerin mekansal etkileşimlerinin yanı sıra intratümoral heterojeniteye izin verir. Bu yöntem, tümöre özgü bir belirteç kullanarak tümör dokusunun stroma ...

Etkili ve güvenli antikanser ajanların geliştirilmesi, tahmine dayalı ve farmakodinamik biyobelirteçlerin tanımlanmasını kolaylaştırabilecek etki mekanizmaları hakkında da fikir verebilecek uygun preklinik modeller gerektirir. Inter- ve intratumor heterojenlik1,2,3,4,5 ve TME6,7,8,9,10,11,12'nin antikanser ilaç yanıtlarını etkilediği bilinmektedir ve hücre hatları, organoidler ve fare modelleri gibi mevcut birçok preklinik kanser modeli bu önemli özellikleri tam olarak karşılayamaz. Özellik. "İdeal" bir model, tümörlerdeki kötü huylu olmayan hücrelerle malignün karmaşık mekansal etkileşimlerini yeniden yakalayabilen ve tümörlerdeki bölgesel farklılıkları yansıtabilen modeldir. Bu makale, bu gereksinimlerin çoğunu yerine getirebilecek gelişmekte olan bir platform olarak PDE'lere odaklanır13.
Histokültür olarak da bilinen insan PDE'lerinin kullanımının ilk örneği, Hoffman ve arkadaşlarının yeni resected insan tümörlerinden oluşan dilimler oluşturduğu ve bunları kollajen matrisi14,15'tekültüre ettiği 1980'lerin sonlarına kadar uzanır. Bu, doku mimarisini koruyan, TME içindeki stromal bileşenlerin ve hücre etkileşimlerinin sürdürülmesini sağlayan bir 3D kültür sistemi kurmayı içeriyordu. Orijinal tümörün yapısızlaştırmadan, Hoffman ve ark.16 çevirisel araştırmanın yeni bir yaklaşımını müjdeledi ve bu zamandan beri, birçok grup doku bütünlüğünü korumak ve doğru ilaç yanıt verileri oluşturmak amacıyla farklı eksplant yöntemlerini optimize etti17 , 18,19,20,21,22,23,24 , protokoller arasındaki bazı farklılıklar belirgin olsa da. Butler ve ark. jelatin süngerlerindeki eksplantları,20 , 21,25örneği aracılığıyla besinlerin ve ilaçların yayılmasına yardımcı olmak için kültürlü, Majumder ve ark. ise aynı hastadan elde edilen otolog serumun varlığında tümör ve stromal proteinlerden oluşan bir matrisin üzerine eksplantlar oluşturarak bir tümör ekosistemi yarattı22, 23.
Daha yakın zamanda, grubumuz, tümörlerin 2 - 3 mm3boyutlu parçalara bölünerek eksplantların üretildiği ve daha sonra bir kültür sisteminin hava sıvısı arayüzünde geçirgen membranlara ek bileşenler olmadan yerleştirilen bir protokol kurdu24. Birlikte ele alındığında, bu çok sayıda çalışma, PDE'lerin orijinal tümörlerin mekansal mimarisini ve bölgesel heterojenliğini koruyan insan tümörlerinin sağlam, canlı parçalarının kültürüne izin verdiğini göstermiştir. Orijinal deneylerde eksplantlar veya histokültürler genellikle ilaç tedavisinden sonra homojenizasyona maruz kalmış, Bundan sonra histokültür ilaç yanıt tahlil 20,21 , MTT (3-(6)-2,5-difeniltetrazolium bromür) tahlil, laktat dehidrogenaz tahlil veya resazurin bazlı tahlil 26 ,27,28 gibi homojenize örneklere çeşitli canlılık tahlilleri uygulanmıştır. . Uç nokta analiz tekniklerinde, özellikle dijital patolojide son zamanlarda kaydedilen ilerleme, eksplantlar29,30üzerinde gerçekleştirilebilecek uç nokta testlerinin ve testlerinin repertuarını genişletti. Bu yeni teknolojileri uygulamak için, homojenizasyon yerine, eksplantlar formalin olarak sabitlenir, parafin (FFPE) içine gömülür ve daha sonra immünostaining teknikleri kullanılarak analiz edilir ve mekansal profilleme sağlar. Bu yaklaşımın örnekleri küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC), meme kanseri, kolorektal kanser ve mezotelioma eksplantları, çoğalma belirteci için immünohistokimyasal lekelenme, Ki67 ve apoptotik belirteç, fermuarlı poli-ADP riboz polimeraz (cPARP), hücre çoğalması ve hücre ölümündeki değişiklikleri izlemek için kullanılmıştır24,31,32,33,34.
Çoklayıcılı immünofluoresans, özellikle uç nokta35'tekieksplantlarda ilaç yanıtlarının mekansal profillenilmesi için elverişlidir. Örneğin, ilaç tedavisi 13 ,36,37,38ve terapötik bir ajanın "soğuk tümörden" "sıcak tümöre" geçişi destekleyip destekleyemeyeceği araştırılarak, makrofajlar veya T hücreleri gibi belirli bağışıklık hücreleri sınıflarının TME içinde relokalizasyonunu ve mekansal dağılımını ölçmek mümkündür39 . Son yıllarda, bu grup farklı tümör tiplerinden (NSCLC, renal kanser, meme kanseri, kolorektal kanser, melanom) PDE'lerin türetlenmesine ve kemoterapiler, küçük molekül inhibitörleri ve immün kontrol noktası inhibitörleri (ICI'ler) dahil olmak üzere bir dizi antikanser ajanın test edilmesine odaklanmıştır. Uç nokta analiz yöntemleri, canlılık için biyobelirteçlerin yanı sıra TME'nin farklı bileşenleri için biyobelirteçlerin mekansal profillemesine izin vermek için çok yönlü immünofluoresansı içerecek şekilde optimize edilmiştir.

<table><tbody><tr><td>< güçlü > Asetik asit < / güçlü ></td> <td>Sigma</td><td>320099</td><td>Boyama reaktifi</td></tr><tr><td>< güçlü > Antikor Seyreltici / Blok, 1x< / güçlü ></td><td>Perkin Elmer</td><td>ARD1001EA</td><td>Antikor seyreltici / bloke edici tampon</td></tr> <tr><td>< güçlü > Barnstead NANOpure Diamond< / güçlü ></td> <td>Barnstead</td><td></td><td>Ultra Saf (UP) H < alt > 2 < / alt >O makinesi</td></tr> <tr><td><güçlü> Sitrik Asit Monohidrat< / güçlü ></td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C7129</td><td>Sitrat tamponu için Reaktif</td></tr><tr><td><güçlü>Costar Çoklu Kuyu Hücre Kültürü Plakaları< / güçlü ></td> <td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td>6 çok kuyulu plaka</td></tr> <tr><td>< güçlü >DAPI Dilaktat< / güçlü ></td> <td>Yaşam Teknolojileri</td><td>D3571</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü> 100 x 17 mm Çanak, Nunclon Delta< / güçlü></td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>150350</td><td>100 mm çaplı doku kültürü çanak</td></tr><tr><td><güçlü>DMEM (1x) Dubelcco'nun Modifiye Eagle Ortamı + 4,5 g/L D-Glikoz + 110 mg/mL Sodyum Piruvat</güçlü</td><td>>Gibco (Yaşam Teknolojileri)</td><td>10569-010</td><td>Doku kültürü ortamı (500 mL)</td></tr><tr><td><güçlü>DPX montajlı</güçlü></td><td>VWR</td><td>360294H</td><td>Montaj ortamı</td></tr><tr><td><güçlü>DPX montajlı</ güçlü ></td> <td>Merck</td><td>6522</td><td>Montaj ortamı</td></tr> <tr><td>< güçlü > Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) < / güçlü ></td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>3609</td><td>TE tamponu için reaktif</td></tr> <tr><td><güçlü > Eozin < / güçlü > CellPath</td><td></td> <td>RBC-0100-00A</td><td>Boyama reaktifi</td></tr><tr><td><güçlü > Fetal Sığır Serumu< / güçlü ></td> <td>Gibco</td><td>10500-064</td><td>Doku kültüründe kullanım için orta</td></tr><tr><td><güçlü>%37 Formaldehit</güçlü></td><td>Fisher (Acros)</td><td>119690010</td> %<td>10 Formalin</td></tr><tr><td><güçlü>iGenix, mikrodalga fırın IG2095</güçlü></td><td>iGenix</td><td>IG2095</td><td>Antijen geri kazanımı için kullanılan mikrodalga</td></tr><tr><td><güçlü>Endüstriyel metillenmiş ruh (IMS)</güçlü></td><td>Genta Medical</td><td>199050</td><td>%99 Endüstriyel Denatüre Alkol (IDA)</td></tr><tr><td>InForm Gelişmiş Görüntü Analiz Yazılımı</td><td>Akoya Biosciences</td><td>InForm</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP3000 Doku İşlemcisi</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Otomatik Vakum Doku</td></tr> <tr><td>İşlemcisiLeica Arcadia H ve C</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Gömülü balmumu banyosu</td></tr><tr><td>Leica RM2125RT</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Döner mikrotom</td></tr><tr><td><güçlü>Leica ST4040 Lineer Boyayıcı</güçlü></td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>H & E boyayıcı</td></tr><tr><td><güçlü>Mayer'in Hematoksilen</güçlü</td><td>>Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>Boyama reaktifi</td></tr><tr><td><güçlü>Milicell Hücre Kültürü Ekleri, 30 mm, hidrofilik PTFE, 0.4 ve mikro; m</td><td>Merck Milipore</td><td>PICMORG50</td><td>Organotipik kültür ekleme</td></tr> <tr><td>diskiNovolink Polimer Algılama Sistemi</güçlü></td><td>Leica Biosystems</td><td>RE7150-K</td><td>DAB boyama kiti</td></tr><tr><td><güçlü>OPAL 480</güçlü></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1500001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyrelticili</td></tr><tr><td><güçlü>OPAL 520</güçlü></td> <td>FloroforDimetil Sülfoksit</td><td></td><td>(DMSO) seyrelticili</td></tr><tr><td><güçlü >OPAL 570</güçlü</td> <td>Akoya Biosciences FP1487001KT Florofor >Akoya Biosciences</td><td>FP1488001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyrelticili</td></tr><tr><td><güçlü >OPAL 620< / güçlü ></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1495001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyrelticili</td></tr><tr><td><güçlü >OPAL 650< / güçlü Florofor> </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1496001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyrelticili</td></tr><tr><td><güçlü>OPAL 690</güçlü</td> Florofor><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1497001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyrelticili<güçlü Florofor ile Florofor</td></tr> / <tr><td>OPAL > / OPAL TSA-DIG Reaktif</güçlü></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1501001KT</td><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) seyreltici ve TSA-DIG reaktifi ile Florofor</td></tr><tr><td><>Opal Polimer HRP Ms Plus Rb, 1x</güçlü></td><td>Perkin Elmer</td><td>ARH1001EA</td><td>HRP</td></tr> <tr><td>polimeri<güçlü>penisilin / streptomisin çözeltisi</td><td>Fisher Scientific</td><td>11548876</td><td>Doku kültürü ortamında kullanım için</td></tr><tr><td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td><td>Akoya Biosciences</td><td>PhenoChart</td><td>Viewer yazılımı taranan görüntüler için</td></tr><tr><td>< güçlü > Fosfat Tamponlu Tuzlu Tabletler< / güçlü ></td> <td>Thermo Scientific Oxoid</td><td>BR0014G</td><td>PBS</td></tr> <tr><td>< güçlü > 1x Plus Amplifikasyon Seyreltici< / güçlü ></td><td>Perkin Elmer</td><td>FP1498</td><td>Florofor seyreltici</td></tr> <tr><td>< güçlü > Elmas Antifade Mountant< / güçlü ></td><td></td> Yenilikçi <td>P36961</td><td>Montaj ortamı</td></tr> <tr><td>< güçlü > Sürgülü Taşıyıcı</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Vectra Polaris ile taramak üzere slaytları Slide Carrier Hotel'e yüklemek için</td></tr><tr><td><güçlü>Sodyum Klorür</güçlü></td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3160/63</td><td>%10 Formalin</td></tr><tr><td><güçlü>Sodyum Hidroksit peletleri</güçlü></td><td>Fisher Scientific</td><td>S/4920/53</td><td>Sitrat tamponu için reaktif</td></tr><tr><td><güçlü>Tenatex Sertleştirilmiş Balmumu - Pembe (500 g)</td><td>KEMDENT</td><td>1-601</td><td>Dental balmumu yüzeyi</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; İmmünoboyama Merkezi için Shandon Sequenza Sürgülü Raf< / güçlü></td><td>Slaytlar ve slayt klipleri için</td> <td>Fisher Scientific</td><td>10098889</td> Tutucu</tr> <tr><td>< güçlü > Thermo Scientific Shandon Plastik Kapak Plakaları< / güçlü ></td> <td>Fisher Scientific</td><td>11927774</td><td>Slayt klipleri</td></tr> <tr><td>< güçlü > Tris (hidroksimetil) aminometan (Tris) < / güçlü ></td> <td>TE tamponu için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>252859</td> Reaktif</tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vecta Laboratories</td><td>H-1000-10</td><td>Montaj ortamı</td></tr><tr><td><güçlü>Vectra Polaris Slayt Tarayıcı</güçlü></td><td>Perkin Elmer</td><td>Vectra Polaris</td><td>Slayt tarayıcı</td></tr><tr><td><güçlü>Ksilen</güçlü></td><td>Genta Medical</td><td>XYL050</td><td>Mum giderici ajan</td></tr></tbody></table>

hasta kaynaklı tümör, hastalarda İlaç direncini tahmin etmek İçin "canlı" preklinik bir platform olarak eksplantlar

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

İlaç direncinin anlaşılması ve yüksek dirençli kanserleri duyarlı hale getirmek için yeni stratejilerin geliştirilmesi, hasta yanıtlarını doğru bir şekilde tahmin edebilen uygun preklinik modellerin mevcudiyetine bağlıdır. Mevcut preklinik modellerin dezavantajlarından biri, insan tümör mikroçevrimini (TME) bağlamsal olarak koruyamaması ve intratümoral heterojenliği doğru bir şekilde temsil edememesi ve böylece verilerin klinik çevirisini sınırlamasıdır. Buna karşılık, insan tümörlerinin canlı parçalarının kültürünü temsil ederek, hasta kaynaklı eksplant (PDE) platformu, ilaç yanıtlarının orijinal tümörlerin patolojik ve mimari özelliklerini mümkün olduğunca yakından yansıtan üç boyutlu (3D) bir bağlamda incelenmesini sağlar. PDE'lerle yapılan önceki raporlar, platformun kemosentetifi chemore dirençli tümörlerden ayırt etme yeteneğini belgelemiş ve bu ayrımın aynı kemoterapilere verilen hasta yanıtlarını öngördüğü gösterilmiştir. Aynı zamanda, PDE'ler ilaç yanıtlarını tahmin eden tümörlerin moleküler, genetik ve histolojik özelliklerini sorgulama fırsatı verir, böylece hasta tabakalaşması için biyobelirteçlerin yanı sıra dirençli tümörleri duyarlı hale getirmek için yeni girişimsel yaklaşımlar tanımlanır. Bu makalede, hasta örneklerinin toplanmasından uç nokta analizine kadar PDE metodolojisi ayrıntılı olarak raporlandırilmektedir. Uygun olduğunda belirli tümörler için ısmarlama durumları vurgulayarak eksplant derivasyon ve kültür yöntemlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. Uç nokta analizi için, hem tümöral hem de stromal bölgelerdeki anahtar biyobelirteçlerin mekansal profillerinin uzamsal profillemesi için çok katlı immünofluoresans ve multispektral görüntülemeye odaklanmaktadır. Bu yöntemleri birleştirerek, çeşitli klinikopatolojik parametrelerle ilişkili olabilecek ve böylece biyobelirteç tanımlaması için potansiyel olarak kullanılabilecek nicel ve nitel ilaç yanıt verileri üretmek mümkündür.

MIF lekeli histolojik bölümlerin multispektral görüntülemesi, tek tek hücre popülasyonlarının tanımlanmasına ve fenotipilmesine ve eksizyon TME'deki tümör ve stromal bileşenlerin tanımlanmasına izin eder (Şekil 2). Multispektral görüntüleme, otofluoresans sinyalinin diğer sinyallerden arındırılmasına ve sonraki analizlerden dışlandırılmasına izin verdiği için kollajen içeriği yüksek dokular gibi içsel otoflüoresansı yüksek dokuların analizi için özellikle yararlıdır. Daha sonra siliko doku v...

Bu makalede, canlı, hastaya bağlı, preklinik bir model sisteminde tümör ilaç yanıtlarının değerlendirilmesi için hasta kaynaklı eksplantların üretimi, ilaç tedavisi ve analizi için yöntemler açıklanmaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin "Canlı" Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

Hasta kaynaklı eksplantlar, hasta sonuçlarını doğru bir şekilde tahmin edebilen anında ilaç yanıt verileri sağlayan kısa vadeli bir yöntemdir. PD platformları, ilaç yanıtlarının bölgesel tümörlerin patolojik ve mimari özelliklerini mümkün olduğunca yakından yansıtan 3D bağlamda incelenmesini sağlar. Eksplantlar, bir ilacın metabolizması ve etki mekanizması hakkında yeni içgörüler sunma ve yeni farmakodinamik biyobelirteçlerin tanımlanmasını kolaylaştırma potansiyeline sahiptir.Deneye başlamadan önce, tüm cerrahi ekipmanları% 70 endüstriyel metillenmiş ruh çözeltisi ile temizleyin. 10 santimetrelik bir kültür yemeğini buz üzerinde 25 mililitre taze ortamla doldurun. Cımbız kullanarak, numuneyi bir diş cilası yüzeyine aktarın ve dokuyu yaklaşık iki ila üç milimetreküp parçalar halinde dilimlemek için iki deri greft bıçağı kullanın.Eksplantları 10 santimetrelik bir tabağa aktarın ve oda sıcaklığında 24 saatlik bir inkübasyon için% 10 tamponlanmamış formalin çözeltisi içeren bir mililitre tüpüne altı ila dokuz parça yerleştirin. Altı kuyu plakasının istenen kuyu sayısını kuyu başına 1,5 mililitre taze orta ile doldurun. Ve organotipik bir kültürün her kuyuya bir tabak yerleştirin, böylece ortamın üzerine yüzer.Her bir kesici uç diskine altı ila dokuz eksplant yerleştirin ve geri kazanıma izin vermek için% 5 karbondioksit inkübatörde 16 saatlik bir inkübasyon için saklayın. Ertesi gün, yeni bir tabağın her kuyusuna taze orta ve ilaç ekleyin. Araç kontrolü için bir kuyu ekleyin.Tüm ilaç tedavileri hazırlandığında, karbondioksit inkübatöründe 24 ila 48 saatlik bir inkübasyon için yeni altı kuyu plakasının her kuyusuna bir kesici uç aktarmak için cımbız kullanın. İlaç tedavisinden sonra, diskleri% 10 formalin içeren yeni altı kuyu plakasına aktarın. Ve oda sıcaklığında 24 saatlik inkübasyon için fiksatif ile tam kapsama sağlamak için her explant'ın üstüne birkaç damla% 10 formalin ekleyin.Ertesi gün, uygun sayıda küçük histoloji süngerini% 70 endüstriyel metillenmiş çözeltiye batırın. Süngerleri histoloji kasetlerinin içine yerleştirin. Tüm süngerler yerleştirildiğinde, aynı ilaç tedavi durumundaki tüm eksplantları, takılan diske temas eden her eksplantın ilaçla tedavi edilen tarafıyla tek bir süngere aktarın.Her eksplantın üzerine başka bir önceden yerleştirilmiş sünger yerleştirin ve kasetin içine eksplantları sabitlemek için kaseti kapatın. Daha sonra histolojik işleme devam etmeden önce kasetleri% 70 endüstriyel metillenmiş çözeltiye batırın. Taramadan sonra, bir eğitim analizi yapın ve eğitim için pulları içeren taramaları uygun analiz yazılımına yükleyin.Tek modlu görünümde, görüntülerde gezinin ve analiz etmek için taramaları ve iç floresan ile taramayı seçin. tek bir görünümde iç floresan taraması ile, alaşağı edilmemiş doku alanına bir segment çizmek için otomatik mağaza seçiciyi tıklatın. İşaretçileri ve renkleri düzenle'yi tıklatın ve her floroforla ilişkili kutuya işaret adlarını girin.Yazılımın yüklenen tüm görüntülerden iç floresan yoğunluğunu çıkarmasını sağlamak için görüntüleri hazırla'yı tıklayın. Doku segmentasyon eğitim penceresini açmak için ekranın üstündeki segment dokusu adımını tıklatın. Doku kategorileri paneline, segmentlere ayırılacak her doku kategorisinin adını girin.İlgi alanı doku kategorisindeki hücre gruplarının etrafına bölgeler çizmek için çiz'i tıklatın. Ardından bir sonraki doku kategorisine geçin ve yeni bölgeler çizin. Tüm eğitim bölgeleri tanımlandığında, tren dokusu segmenterini kullanın ve eğitim doğruluğunun oturmasını bekleyin.Muhtemelen %100'e yakın bir değere dokuları segmentlere ayırın. Doku segmentasyonunun kalitesini doğruladıktan sonra, hücre segmentasyonunu tıklayın ve segmentlere ayıracak hücresel bölmeleri seçin. Nükleer bileşeni yapılandırmak için, nükleer pikselleri algılamak için kullanılan eşiği ayarlamak için tipik yoğunluk kaydırıcısını kullanın.Canlı geri bildirim önizleme penceresi tarafından sağlanır. Nükleer piksel kümelerini bölmek için, nükleer bileşenlerin bölünen panelinde, çekirdeğin boyama kalitesini en iyi açıklayan düğmeyi seçin ve bölme hassasiyetini ayarlamak için kaydırıcı çubuğunu kullanın. Ardından, tüm görüntüleri segmentlere ayır'ı tıklatın.Tüm görüntüler bölümlere ayırıldığında, fenotipler panelinde, algılanacak fenotiplerin listesini ekleyin ve fenotiplerin adını ilgili metin kutusuna girin. Belirli bir hücreyi seçmek ve açılır menüden karşılık gelen fenotipi seçmek için fenotipleri düzenle'yi tıklatın. Eğitim seçimini tamamladıktan sonra, her fenotipin sonucunu değerlendirmek için tren sınıflandırıcısını tıklatın.Fenotip tümü ile devam edin, projeyi kaydedin ve dışa aktar'ı tıklatın. Toplu iş çözümleme sekmesini seçin ve projeyi toplu iş algoritmasına veya proje kutusuna yükleyin. Görüntüleri ve tabloları dışa aktarmak için dışa aktarma seçeneklerindeki tüm kutuları seçin, slayt ekle'yi tıklatın ve daha önce hazırlanmış toplu işlerle ilgili pulları içeren tüm görüntüleri yükleyin.Ardından, bir damganın toplu iş çözümlemesine başlamak için çalıştır'ı tıklatın ve elde edildiğinde ilgili verileri dışarı aktar. Hücre canlılığı belirteçleri için boyanmış NSCLC eksplant dokusunun çoklu spektral görüntülemesi, bireysel hücre popülasyonlarının tanımlanmasına ve fenotiplemesinin yanı sıra eksiz tümör mikro ortamında tümör ve stromal bileşenlerin tanımlanmasına izin vermektedir. Hücre canlılık belirteci lekelerinin doku ve hücre segmentasyonu, gösterildiği gibi multi-spektral görüntüleri lekeler, ilgi çekici ilaçlarla tedavi edilen hasta türevli eksplantlarda hücre ölümünü ve çoğalmasını ölçmek için kullanılabilir.Örneğin, bu analizde Nivolumab ile tedavi edilen tümörlerden alınan doku örneklerinde, tedavi edilen tümör örneklerine kıyasla daha yüksek sayıda ölmekte olan hücre tespit edilmiştir. Ek olarak, gösterildiği gibi, lekeli diseksiyonlardan mekansal bilgi çıkarma yeteneği, hücreler arası mesafelerin hesaplanmasına izin verir. Eksplantlar, numunenin 3D yapısını korurken yüzlerce biyobelirtecinin yan çözünürlükte aynı anda profillenebilmesini sağlayan kapsamlı uzamsal profilleme veya kütle sitometrisi için de kullanılabilir.PD'ler immünoterapinin etkinliğini tahmin edebilir. Örneğin, hassas veya dirençli vakaları immün kontrol noktası inhibitörlerine ayırt etmek ve bu ayrımı destekleyen mekanizmaları araştırmak mümkün olabilir.

patient-derived-tumor-explants-as-live-preclinical-platform-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Burada, beyin tümörlerinin cerrahi örnekleri, olarak adlandırılan "tümör eksplant yöntemi" ile ilaç etkinliğini test etmek için bir yöntem kurmuştur. Bu yöntemde, katı tümörlerin mikroçevresinin bozmadan ilaç etkinliğini değerlendirmek. Bu yöntemin güvenilirliğini doğrulamak için, ilk basamak kemoterapötik ajan, temozolomide tedavi glioma örnek temsili verileri açıklanmaktadır.

Cerrahi Örneklerinin tümör eksplantlarındaki Roman Anti-Kanser İlaç Geliştirme Yöntemi

Kurulmuş kanser hücre hatları ve ksenogratflardır son birkaç yıldır kanser araştırma dayanak noktası olmuştur. Bununla birlikte, son bulgular terapötik tepki özellikle, tümör hücre mikro-ortamı tarafından etkilendiğini göstermektedir. Bu nedenle, ilaç geliştirme amaçları için primer tümör numunelerinin bir ex vivo analiz geliştirdik.

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

deri altı klinik öncesi modelde hasta kaynaklı tümörler kullanarak yeni tedavilerin, öngörü biyomarker keşif ve ilaca dirençli yolların etkinliğini incelemek için mükemmel bir yoldur. Bu model, ilaç geliştirme sürecinde, klinik araştırma önce birçok yeni anti-kanser terapisi kaderini belirlemede önemlidir.

Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı

Biz son derece hassas yayılmasından insan kolorektal kanseri tespiti (CRC) hücre dokuları kolonileşmesi izin vermek için burada PDX kaynaklı CRC organoid hücrelere yeşil flüoresan protein (GFP) lentiviral parçacıkların verimli iletim için bir protokol göster stereo-floresan mikroskobik gözlem ile alıcı fareler içine onların enjeksiyon önce.

Bir hasta kaynaklı kolon tümöründen kültürlü GFP Lentivirus transduced Organoids tarafından oluşturulan Micrometastases yüksek-duyarlı tespiti

Hasta-türevi xenograft (PDX) modelleri daha sağlam özetlemek Melanom moleküler ve biyolojik özellikleri ve geleneksel plastik doku kültürü tabanlı asder karşılaştırıldığında tedavi tepkisi daha öngörü vardır. Burada, yeni PDX modellerinin kurulması ve mevcut PDX modellerinin karakterizasyonu/denemeleri için standart çalışma protokollerimizi tarif ediyoruz.

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Organotipik tümör doku dilimlerinde gerçek zamanlı ilaç yanıtını ölçmek için bir protokol uyguluyoruz. Burada özetlenen deneysel strateji, ekstrem koşullarda klinik veya fare tümörlerinden elde edilen doku dilimlerinde orta-yüksek iş yapma ilaç ekranları yürütmek için bir platform sağlar.

Organotipik Tümör Doku Dilimlerinde Gerçek Zamanlı İlaç Yanıtının Ölçülmesi

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

İn vitro tarama için hasta kaynaklı ksinograftlar (PDX) kullanılarak organoidler oluşturmak için bir yöntem açıklanmıştır, bu da eşleşen in vivo/in vitro model çiftleri ile sonuçlanır. PDX tümörleri mekanik veya enzmatik olarak küçük parçalara ayrıldı/işlendi, ardından Clevers'in orijinal PDX'e karşı pas geçen, kriyoprezerserve edilen ve karakterize edilen tümör organoidlerini yetiştirme yöntemi izlendi.

Kanser Farmakolojisi Araştırmaları için PDX ve PDX Türevli Organoidlerin Eşleştirilmiş In vivo/In vitro Hasta Kaynaklı Model Çiftlerinin Oluşturulması

Kanser dokularına benzer ancak 96 kuyulu ve 384 kuyu plakalı in vitro yüksek verimli tahlil sistemleri için uygun olmayan, hasta kaynaklı tümör organoidleri (PDO) kullanan antikanser ilaçları değerlendirmek için son derece hassas bir in vitro yüksek verimli tahlil sistemi geliştirilmiştir.

Hasta Kaynaklı Tümör Organoidleri Kullanılarak Yüksek Verimli In Vitro Tahlil

Bu protokol, NSCLC hasta kaynaklı organoid modellerde hedeflenen sinyal inhibitörlerine karşı ilaç duyarlılıklarının standartlaştırılmış bir değerlendirmesini açıklamaktadır.

EGFR-Mutant NSCLC Hasta Kaynaklı Organoidlerde Hedefe Yönelik Tedavilere Duyarlılığın Profillenmesi

Keşfedin, hasta kaynaklı tümör eksplantlarını kullanarak ilaç direncini tahmin etme yöntemini. Bu 3D preklinik platform, kanser tedavilerinde kişiselleştirilmiş biyobelirteç keşfi için klinik olarak güvenilir sonuçlar sağlar.

Hasta Kaynaklı Tümör, Hastalarda İlaç Direncini Tahmin Etmek İçin "Canlı" Preklinik Bir Platform Olarak Eksplantlar

Daha fazla video keşfet