Yüksek Canlılık Doku Toplanması için Kemirgenlerde Minimal İnvaziv Beyin Tümörü Rezeksiyonunun Uygulanması

Bu, beyin tümörleri için terapötikler üzerine yapılan klinik öncesi araştırmalarda oldukça ihtiyaç duyulan bir beyin tümörü rezeksiyon paradigmasıdır. Minimal invaziv bir yaklaşımla standartlaştırılmış bir rezeksiyona izin verirken, aynı zamanda otomatik bir doku koruma sistemine de bağlanır. Bu protokol, hayvanın ameliyattan sonra hayatta kalmasını sağlar ve böylece aynı hayvanda tedaviden sonra hastalık durumundaki değişiklikleri anlamaya yardımcı olur.

Bu, sıralı ve hızlandırılmış terapötik uygulamalarda yardımcı olur. Bu tekniği kullanarak, hastalığın biyolojisini değerlendirebilir ve sonraki olası yönetimi planlayabiliriz. Bunun ilaç keşfi ve yeni terapötiklerde önemli etkileri ve fırsatları vardır.

Standartlaştırılmış rezeksiyon, minimal invaziv bir yaklaşım ve otomatik doku koruma kavramları, karaciğer tümörleri ve baş boyun kanserleri gibi farklı organ sistemlerindeki diğer tümör türlerine genişletilebilir. Protokol basittir ve sistem kullanıcı dostudur. Gerekli tüm adımları ve sorun gidermeyi içeren yayınlanmış protokolü okumak en iyisidir.

Ayak parmağını sıkıştırarak fareyi sedasyon açısından değerlendirerek deneye başlayın. Korneanın kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Ardından, fareyi stereotaktik bir çerçeveye yerleştirin.

Zımbayı önceki ameliyattan çıkarın ve klorheksidin veya betain bazlı bir ovma ve alkolün alternatif döngüleriyle cildi dezenfekte edin. Daha sonra steril bir neşter kullanarak önceki cerrahi yara izi boyunca bir santimetre uzunlamasına orta hat kesisi oluşturun. MIRS el parçasını sahne alanı adaptörü aracılığıyla stereotaktik kola takın.

MIRS makinesini kurmak için, arka panelde ayarlanan güç kablosunu güç kablosu prizine takın. Sıfır ile bir arasında geçiş yaparak sistemin gücünü açın veya kapatın. Azot hortumunun bir ucunu konsolun arka panelindeki erkek bağlantı parçasına yerleştirin.

Sıkmak için bağlantı somununu saat yönünde döndürün. Besleme basıncının 100 PSIG'yi geçmediğinden emin olun ve hortumu nitrojen beslemesine takın. Herhangi bir sızıntıyı önlemek için vakum portunun kapağını kapatın.

Konsolun önündeki aspirasyon düğmesinin 100 olarak ayarlandığını, aspirasyon sisteminde sızıntı olmadığını ve azot giriş besleme basıncının doğru olup olmadığını kontrol edin. Gri ayak pedalı konektörünü, tıklayana kadar gri haznesine takın. Aynı şekilde, mavi el aleti konektörünü mavi haznesine yerleştirin.

Her bir el parçasını, boru ve el aleti aracılığıyla diyafram açıklığına ve daha sonra tüpün ve el aletinin iç kısmının yağlandığından emin olmak için teneke kutuya aspire ederek hazırlayın. Konsolun ön panelinde aspirasyon modunu seçin ve ayak pedalını kullanarak başlayın. 23-G MIRS kanülünü çapak deliğine 2,5 milimetre derinliğe kadar yerleştirin.

Kanüle bağlı ayak pedalına basarak rezeksiyon işlemini başlatın. El parçasındaki kontrol düğmesini kullanarak rezeksiyonun tam döngülerini gerçekleştirin. Rezeksiyon işleminden sonra, 23 gauge MIRS kanülünü geri çekin ve boruyu yıkamak ve kalan kalıntıları yerinden çıkarmak için beş mililitre 1X PBS ekleyin.

Ardından, yarayı bir zımba ile kapatın ve fareyi stereotaktik çerçeveden çıkarın. Fareyi kafesine geri yerleştirmeden önce anesteziden kurtulmak için ısıtma yastığına geri getirin. Deneyden sonra, tüm rezeke edilmiş dokuyu toplama kabına geri itmek için kanülü soğutulmuş ortam ve hava ile temizleyin.

Toplama kabını sistemden çıkarın ve bir kapak yerleştirin. Daha sonra, kanülün distal ucunu% 3 hidrojen peroksit içine yerleştirin ve emme hattını emme toplama kabına geri doldurmak için emme uygulayın. 60 ila 90 saniye bekletin ve yıkamak için aralıklı olarak havayı ve ortamı darbelendirin.

Tümör örneğini oda sıcaklığında beş dakika boyunca RBC lizis ortamı içeren bir doku kültürü kabına batırın. Daha sonra 50 mililitrelik bir konik tüp üzerine 70 mikronluk bir filtre yerleştirin ve tümör örneğini filtreden geçirmek için bir şırınga pistonu kullanın. Transfer pipetiyle, hücreleri ve herhangi bir doku kütlesini filtreden geçirmek için RPMI 1640 ortamını kullanın.

Dört santigrat derecede beş dakika boyunca 428 kez G'de santrifüj. Süpernatantı atın ve her numuneyi beş mililitre hazırlanmış RPMI 1640 ortamında yeniden askıya alın. Numuneleri 37 santigrat derecede 200 RPM'de 20 dakika boyunca bir çalkalayıcı inkübatöre yerleştirin.

Kuluçkadan sonra, numuneleri dört santigrat derecede beş dakika boyunca 428 kez G'de santrifüj edin ve süpernatanı atın. Tek hücreleri 70 mikronluk bir hücre süzgecinden süzün ve dört santigrat derecede üç dakika boyunca 274 kez G'de santrifüj yapın. Tripan mavisi ve hemositometre ile hücre canlılığı analizi yapın.

MIRS kullanan farelerde cerrahi rezeksiyon, hem büyük hem de küçük tümör yükü olan gruplar için ortalama başlangıç biyolüminesan sinyalindeki azalma ile gösterildiği gibi, tümör yükünde önemli bir azalmaya neden olmuştur. Tümörlerin rezeksiyon öncesi MRG görüntüleri ile karşılaştırıldığında, rezeksiyon sonrası taramalarda rezeksiyon boşluğu, tümör aşılama bölgesinde büyük, yuvarlak bir hipointens alan olarak tanımlanabilir. H & E boyalı kesitlerde, kan ürünleri, inflamasyon ve artık tümör hücrelerinin bir kenarı ile açık bir dairesel rezeksiyon boşluğu gözlendi.

Kesit hacmi, kesme açıklığının iki dönüşü yapıldığında önemli ölçüde artmıştır, bu da tümör yüküne göre rezeksiyon hacminin optimizasyonuna izin vermiştir. Tedavi edilmeyen tümörlere sahip farelerde sağkalımın MIRS tarafından tümör rezeksiyonu yapılan farelere karşı karşılaştırılması, küçük tümör grubunda sağkalımda 16 ila 22 gün arasında bir artış olduğunu göstermiştir. Benzer şekilde, daha büyük bir tümör yüküne sahip grupta, medyan sağkalım 12 günden 19 güne yükselmiştir.

Doku koruma sisteminden alınan örneklerin ışık mikroskobu görüntüleri, sıfır gününde birkaç küçük doku parçasının varlığı ile tek hücre olarak ortaya çıktı. Yedi gün sonra, MIRS ile toplanan hücreler, süspansiyon kültürlerinde nörosfer oluşumu gösterdi ve bu da tümör başlatma potansiyellerini gösterdi. Sistemin tıkanmasını önlemek için işlemden hemen sonra boru sistemini temizlemek ve yıkamak önemlidir.

Bu prosedürü takiben, minimal invaziv rezeksiyon sistemi ile cerrahi rezeksiyon sonrası hayatta kalan hayvanlar üzerinde tedavi ve tanısal ve prognostik belirteçler üzerine yapılan çalışmalar etkinlik çalışmaları kullanılabilir.