İnme Preklinik Değerlendirme Ağı Tromboembolik İnme ve Trombolizli Çok Laboratuvarlı Modeli: TE-MCAo

Araştırmamızın kapsamı, titiz çok laboratuvarlı preklinik terapötik testlerde kullanılmak üzere kontrollü tromboembolik inme modeli geliştirmektir. Protokolümüz, klinik trombolizi taklit eden ve çok merkezli preklinik denemeleri destekleyen basit tekrarlanabilir tromboembolik inme modelinin eksikliğini ele almaktadır. Başlamak için, PE-50 borusunu köşe açıyla keserek küt hale getirin.

Eğim noktasının en ucunu mikro makasla kesin. Anestezi altındaki fareyi ameliyata hazırladıktan sonra, iç uylukta, bacakla doğal kıvrım boyunca yaklaşık 1,5 ila 2 santimetre uzunluğunda dikey bir kesi yapın. Kesi, femoral arterin beklenen anatomik seyrine dik olmalıdır.

Küt diseksiyon kullanarak, dikkatlice femoral damarlara kadar kesin. Sonra aynı demette geçen ven ve sinirden femoral arteri ayırın. Femoral arteri mümkün olduğunca proksimal olarak iskeletlendirin, arteri retroperitoneal kökenine kadar takip edin.

Femoral arterin etrafına gevşekçe 5-0 ipek bir halka yerleştirin ve kuyrukları kullanarak arterin proksimal ucuna hafif bir gerilim sağlayın. Sonra femoral arteri distal olarak 5-0 ipek ligaturla kapatın ve dikişin kuyruklarını hemostatik kelepçelerle distal olarak hafif gerginlik sağlamak için kullanın. Proksimal dikiş döngüsünden yaklaşık üçte ikisi mesafede, arterin altına bir parça ipek dikiş yerleştirilin ve gevşek dikişin distalında mikro makas kullanarak küçük bir arteriotomi yapın.

Keskin forseps kullanarak, arteriotominin üst açıklığını kaldırın ve kör eğimli PE-50 kateteri açıklığa yerleştirin. Kateteri mümkün olduğunca proksimal olarak ilerletin, böylece gevşek halka sıkıldığında kateteri kapsayacaktır. Dikişi hafifçe sıkın, kateteri kapatmadığından veya eğiğin üzerine oturmadığından emin olun.

Lastik ayakkabı kelepçesini bırakın. Kateter hemen kanla dolmalıdır. Üç adet 1,5 mililitrelik santrifüj tüpünü doldurun ve dört derece Celsius'ta saklayın.

Tüpler dolduktan sonra, PE-50 kateterini femoral arterden çıkarın, proksimal ucu bağlayın ve kesiyi kesintili 5-0 Prolene dikişleriyle kapatın. Trombü hazırlamak için, 500 mikrolitre yeni alınmış veya depolanmış donör kanını 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve antikoagülasyon tersine çevirmek için bir mililitre kalsiyum klorür ekleyin. Sonra mikrosantrifüj tüpünden kanı hemen 100 santimetre PE-50 tüpüne nazik emiş bir tüple aspire edin ve sarılmış tüpü önceden ısıtılmış PBS'de 37 derece Celsius'ta iki saat boyunca masa üstü fırında inkubasyon yapın.

Trombü PBS içeren bir Petri kabına attıktan sonra, jilet kullanılarak yaklaşık altı santimetre kesimlere kesin. Her trombü nazikçe bir PE-50 kateterine çekin ve yıkamak için beş kez tamamen dışarı çıkarın. Trombü tekrar yıkayıp, nazikçe bir PE-10 kateterine çekip 15 kez tamamen dışarı atın.

10 mililitre PBS içeren bir Petri kabına 200 mikrolitre 4% Evans mavisi ekleyerek 1 numaralı seyreltme oluşturulur. Daha sonra 400 mikrolitre Sulandırma numaralı 1'i ayrı bir Petri kabına pipetleyin; bu kapta 20 mililitre PBS bulunur ve böylece 2 numaralı seyreltme oluşturulur. Pıhtı daha yoğun Evans mavi Petri kabı çözeltisine bir saniye koyun, ardından seyreltilmiş Evans mavi Petri kabına aktarın.

Bir yıkanmış trombu, hava embolisi olmayan prefabrik mikrokateterlere ıslak-ıslak yöntemle yüklenin. Tromb tam olarak yüklendikten sonra, mikrokateterde tam olarak beş santimetre kalacak kadar trombüs ekstrüze edilsin. Fazlalığı jiletle kesin.

Mikrokateteri uçtan 16 milimetre işaretleyerek kateterin intraluminal olarak ilerletilmesi gereken ölçeğini belirleyin. Önceden yüklenen tromboemboliler, altı araştırma laboratuvarında 135 deneğin iç karotis arterine enjekte edildi ve tromboembolik orta beyin arter tıkanma modelinin uygulanabilirliğini test etti. Üç gün sonra 102 hayvanda manyetik rezonans görüntüleme yapıldı ve bu da tarama tamamlanma oranının %75'ini gösterdi.

Görüntüleme öncesi hayvan kaybı altı laboratuvarın tamamında tutarlıydı. Tüm bölgelerde ortalama lezyon hacmi ipsilateral yarımkürede %13 olup, altı laboratuvarda bazı farklılıklar bulunuyordu. Protokolümüz insan trombüs ve trombolizini taklit eder, hayvan kullanımını azaltır, cerrahiyi standartlaştırır ve güvenilir çok merkezli tekrarlanabilirlik sağlar.

Araştırmamızın önemli bir sonucu olarak, birden fazla laboratuvarda kullanılabilen, tutarlı sonuçlar ve yapılandırılmış kalite kontrolü olan ölçeklenebilir tekrarlanabilir bir TE-MCAo modeli oluşturduk. Bu model, hem tek hem de çok laboratuvarlı inme çalışmalarında tutarlı şekilde kullanılabilir, terapötik taramayı iyileştirir ve aday beyin koruyucu tedavilerin geçişini hızlandırır.