Visualização da degeneração da articulação do joelho após lesão não invasiva do LCA em ratos

Lesão ACL não invasiva

1. Use equipamentos de proteção pessoal adequados. Você pode usar uma máscara respiratória, mas não é obrigatório para este protocolo.
2. Anestesiar os ratos usando uma câmara de indução com 5% de isoflurano e 1 L/min de oxigênio. Mantenha o fluxo de anestesia usando através de um cone de nariz com 1 - 3% isoflurane e 500 mL/min de oxigênio. Se o aparelho não estiver configurado em uma tabela de recuo ou de rascunho, certifique-se de que o gás residuado seja retirado usando um sistema de mesa e filtros de carvão.
3. Realize uma beliscão dos dedos dos dedos para garantir que uma profundidade adequada de anestésico tenha sido atingida. Note que não é necessário aplicar lubrificante ocular o protocolo é realizado rapidamente (< 3 min) e há risco mínimo de secura da córnea.
4. Posicione o recuo direito em 30° de dorsiflexão e 100° de flexão do joelho, proporcionando espaço para subluxação anterior da tíbia em relação ao fêmur.
5. Montar rigidamente o estágio superior do joelho para um atuador linear.
6. Posicione o joelho flexionado no estágio inferior, que é montado diretamente acima de uma célula de carga.
7. Induzir lesão de LCA usando uma única carga de compressão tibial a uma velocidade de 8 mm/s.
8. A lesão da LCA é notada por uma liberação de força compressiva. Isso é monitorado através de um programa personalizado.
9. Após a lesão, enquanto o animal ainda está sob o plano de anestesia, faça um teste de Lachman para confirmar clinicamente que ocorreu uma ruptura da LCA. Um teste de Lachman é um teste clínico usado para avaliar a integridade da LCA avaliando a estabilidade do plano sagital. Ao estabilizar o fêmur, puxe a tíbia para a frente (em uma direção anterior) para avaliar a quantidade de movimento. Uma ACL intacta produzirá uma "sensação final firme" onde o pesquisador não será capaz de traduzir a tíbia para a frente. Uma ACL lesionada produzirá uma "sensação final macia ou mole", indicativo de uma LCA rasgada.
10. Palpar o fêmur e a tíbia para detectar qualquer dano ósseo grosseiro. Se não forem identificadas contraindicações, transfira o animal para sua gaiola e permita que ele se recupere. Durante esse tempo, monitore o animal para garantir que ele não exiba sinais de dor, como relutância em se mover, vocalização ou postura anormal.

μCT imagem de degeneração articular

As imagens 2D são obtidas utilizando-se configurações de scanner de 70 kV, corrente de 85,5 μA(Figura 2B). Os dados são coletados a cada etapa de rotação de 0,6° em uma resolução de 11,5 μm através de um total de 180°. As imagens transversais são reconstruídas usando um algoritmo de projeção traseira suavizada e na pilha de imagens reconstruídas(Figura 2C). A estrutura trabecular é então analisada por segmentação em software, pelo qual uma esfera de 1,53 mm está centrada na placa epífise dos platôs tibiais medial e lateral e fêmur para determinar a espessura trabecular (μm), separação trabecular (μm) e número trabecular (1/mm). ^5,6

1. Com 4 semanas de lesão pós-ACL, eutanize o rato com exposição prolongada ao CO₂ na câmara de indução.
2. Estender e proteger a cetro lesionado da ACL em um dispositivo impresso em 3D personalizado(Figura 2A).
3. Adquira imagens usando μCT.
4. Obtenha radiografias do plano frontal para determinar o espaço articular. estreitamento (entre o condíle femoral e o planalto tibial [medido em mm]) em comparação com o membro não ferido.
5. Obtenha imagens 2D usando as seguintes configurações do scanner: 70 kV e corrente de 85,5 μA.
6. Colete os dados a cada passo de rotação de 0,6° em um tamanho de pixel de 11,5 μm através de um total de 180°.
7. Reconstrua imagens transversais usando um algoritmo de projeção traseira suavizada na pilha de imagens reconstruídas.
8. Para garantir que uma região de interesse consistente seja medida, coloque uma esfera de 1,53 mm na placa epífise dos platôs tibiais medial e lateral e fêmur para determinar a espessura trabecular (μm), separação trabecular (μm) e número trabecular (1/mm).

Figura 2: A) Dispositivo impresso personalizado para segurar o cetão traseiro durante as imagens μCT, B) 2D e C) 3-D μCT.