الفأر الجنينية الثقافة الرئة ، وهو نظام لتقييم الآليات الجزيئية من التفرع

في هذا الفيديو ، يتم عرض طريقة لتشريح واستزراع رئتي الفئران الجنينية. يبدأ الإجراء بحصاد الأجنة عند E 11.5 أو E 12.5. بعد ذلك ، يتم فتح الأجنة واستخراج الرئتين.

ثم يتم طلاء الرئتين في واجهة هواء سائل وتحضينهما بعد المزرعة. يمكن ملاحظة التغيرات في نمو وتفرع الميزن تشي والظهارة في الرئة الجنينية استجابة لعلاجات محددة باستخدام مجهر مجسم. مرحبا ، أنا ديفيد وار بيرتون.

أدير برنامج علم الأحياء التنموي والطب التجديدي في مستشفى الأطفال التابع لمعهد بان للأبحاث ، لوس أنجلوس. وأنا جان كارو ، باحث ما بعد الدكتوراه الأول في مختبر الدكتور وار بيرتون. سنعرض لك اليوم تقنية لعزل رئة الفأر الجنينية ووضعها في مزرعة الأعضاء.

تطورت هذه التقنية من الوصف الأصلي لتينا جاكو هالكين وبابلو في كلية طب الأسنان بجامعة جنوب كاليفورنيا منذ حوالي 20 عاما. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة مورفي الضأن المتفرع. لذلك دعونا نبدأ.

في اليوم البريدي 11.5 أو 12.5 ، ضع فأرة حامل موقوتة بثاني أكسيد الكربون تحت غطاء التدفق الصفحي على ظهرها. رش مع 70٪ إيثانول. قم بعمل شق في البطن.

ثم أثناء الإمساك بالساقين الخلفيتين للحيوان ، قم بإزالة الجلد عن طريق السحب لأعلى. افتح التجويف البريتوني وقم بإزالة الرحم. ضع الرحم في أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر مملوء بمحلول ملح متوازن بارد أو HBSS ويهز برفق لمدة دقيقتين لشطف الدم.

بعد ذلك ، لنقل الرحم إلى طبق بتري تحت مجهر تشريح مجسم. باستخدام مقص زنبركي ، قم بقص جدار الرحم لتحرير الأجنة. ثم باستخدام ملعقة مثقبة ، احصد الأجنة وضعها في طبق بتري يحتوي على HBSS وضعها على الثلج.

استمر في العمل تحت مجهر التشريح المجسم وابدأ في تشريح الرئتين الجنينية. ابدأ بوضع الجنين على جانبه الأيسر. باستخدام الملقط ، قم بإزالة الملقط الأمامي الأيمن في اليد اليسرى.

قطع الجنين بدءا من فتحة الطرف وإزالة الجلد. ستسمح لك هذه الخطوة برؤية الأعضاء الداخلية وتوطين القلب والرئتين للخطوة التالية. إزالة القلب.

الرئتان الجنينيان خلف القلب وأمام العمود الفقري. بعد ذلك ، افصل الرئة السليمة عن الجنين. ثم قم بقص الأنسجة الدخيلة والمريء.

بمجرد إزالة الرئتين ، استخدم ماصة نقل معقمة لنقلها إلى طبق بتري يحتوي على HBSS بارد على الجليد. لكل بئر من طبق البوليسترين دلتا غير المستنسخ عند 0.5 إلى ملليلتر واحد من D-M-E-M-F 12 مكملا ب 50 وحدة لكل مليلتر من البنسلين الستربتومايسين. بعد ذلك ، ضع غشاء حفر مسار بولي كربونات النواة أعلى الوسائط ، بحيث يكون الجانب اللامع لأسفل والجانب الخشن لأعلى.

باستخدام ماصة نقل معقمة ، ضع رئة جنينية مشرحة فوق غشاء حفر مسار البولي كربونات النووية. باستخدام المجهر المجسم ، اضبط موضع الرئة الجنينية. يجب أن يكون للرئة الجنينية قصبة هوائية سليمة موضوعة في وضع مستقيم كما هو موضح هنا.

هذا يضمن أن جميع الرئتين لهما نفس الضغط الداخلي ، ونقل الطبق إلى حاضنة الخلايا والثقافة للوقت المطلوب. هنا ، نمت رئتي E 12.5 في وجود أو عدم وجود FGF تسعة. FGF nine هو عضو في عائلة عامل نمو الخلايا الليفية التي تحفز تمدد الظهارة وتمدد الظهارة في الرئتين المزروعة في المختبر بعد 48 ساعة.

في حالة عدم وجود تسعة FGF ، لوحظ زيادة التفرع. هذه الصور عبارة عن صور للرئة الجنينية تم التقاطها تحت مجهر مجسم. في المقابل ، فإن الرئتين اللتين نمت 48 ساعة في وجود FGF تسعة لها ظهارة متوسعة وميكي.

بعد 24 ساعة من الثقافة. بعد 48 ساعة ، يكون التأثير على الظهارة أكثر وضوحا. لذلك أوضحنا لك للتو كيفية تحضير مزارع الأعضاء من رئة الفأر الجنينية.

عند القيام بهذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إزالة الرئة من الجنين في أسرع وقت ممكن للحد من تدهور الأنسجة. لذا شكرا على المشاهدة. نأمل أن تجد هذه تقنية مفيدة.

حظا سعيدا في تجاربك.