Устройства для осуществления миграции клеток / заживлении ран в 96-луночный планшет

Общая цель этого восьмиканального механического намотчика клеток заключается в количественной оценке влияния лечения на миграцию клеток с помощью анализа заживления ран быстрым и полувысокопроизводительным способом без использования дорогостоящего и сложного оборудования. Миграция клеток является важным клеточным процессом в различных физиологических и мощных физиологических условиях. Анализы заживления ран in vitro используются в различных исследованиях, включая онкологические, рескулярные и дерматологические исследования.

Основное преимущество этого метода заключается в том, что влияние на миграцию клеток можно отслеживать на странице с 96 направляющими, что позволяет одновременно наблюдать различные условия лечения. Демонстрировать процедуру будет Ка Чун Нг, аспирант нашей лаборатории. Чтобы начать эксперимент, подготовьте держатель булавки, зафиксировав ранящие штифты на равных расстояниях.

Удерживайте наконечники пипеток и перемещайте регулируемые намоточные штифты вверх и вниз, чтобы отрегулировать высоту наконечника. Затем установите регулируемую направляющую планку разных марок на 96-луночные планшеты для культуры и убедитесь, что область раны находится в фиксированном положении. Зафиксируйте регулируемый обмоточный штифт, затянув винт с шестигранной головкой.

Закрепите направляющую планку на месте, затянув крышки шестигранных головок с обоих концов. С помощью шестигранного ключа M5 ослабьте крышки шестигранных головок. Вставьте подходящее количество регулировочных колец с обеих сторон держателя штифта так, чтобы направляющие стержни идеально совпадали с шириной 96-луночного планшета для культуры.

Затем затяните крышки шестигранных головок, чтобы зафиксировать направляющую планку. Начните регулировку направляющих стержней, установив на ранительные штифты стерильные пластиковые наконечники пипеток объемом 10 микролитров. Затем ослабьте крышки шестигранных головок с помощью шестигранного ключа M5.

Удерживая намотчик, опустите ранящие штифты в одну колонну 96-луночного культурального планшета. Затем отрегулируйте высоту направляющих стержней до тех пор, пока все кончики едва касаются дна лунок. Затяните крышки шестигранных головок.

Убедитесь, что намотчик идеально прилегает к культуральной пластине и что штифты правильно расположены посередине лунок. Держите намотчик перпендикулярно плоской стерильной поверхности, такой как чашка Петри, и ослабьте все винты с шестигранной головкой с помощью шестигранного ключа M3. Постукивайте по намотчику до тех пор, пока все кончики равномерно соприкасаются с поверхностью.

После того как наконечники равномерно коснутся поверхности, снова затяните винты с шестигранной головкой, чтобы зафиксировать штифты на месте. Затем проверьте ровность каждого кончика, легкими постукивающими движениями по намотывателю по плоской стерильной поверхности. Засемените эндотелиальные клетки пупочных сосудов человека на 96-луночной культуральной пластине, покрытой желатином, покрытой желатином.

Культивальные клетки в среде 199 добавляли 20% инактивированную теплом фетальную бычью сыворотку, 1% пенициллин стрептомицин и 0,09 г гепарина на литр. Поддерживайте клетки во влажном инкубаторе с 5% углекислым газом при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи перед использованием. После того, как клетки получат 100% конфлюенцию, поместите ранящие наконечники с левой стороны каждой лунки в пределах одной и той же колонки культуральной пластины.

Сдвиньте намотчик на другую сторону колодца. Убедитесь, что наконечники ран касаются дна колодца. Чтобы убедиться, что рана в каждой лунке ячейки расположена по центру и одной волной, поверните рану, проходящую через лунку, на другой конец.

Повторите царапание для всех столбцов. После ранения выбросьте среду из каждой лунки и замените ее свежей средой, содержащей тестируемые соединения. Затем переходите к сбору данных и анализу изображений.

Репрезентативные изображения ряда и колонны лунок сразу после царапины позволяют количественно оценить ширину каждой раны. Изображения ран были получены из эндотелиальных клеток пупочной вены человека и бластов дермальных волокон человека. Пунктирной линией обозначена область раны, а сплошной линией — зона миграции клеток.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать это устройство для проведения анализа заживления ран на 96-луночной странице с полувысокой пропускной способностью и для обеспечения того, чтобы ранщик царапал каждую лунку.