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December 01, 2023
DOI:
La nostra ricerca mira a dimostrare l’uso di un preparato di campione per l’intrappolamento delle sospensioni proteiche, noto come trappola S per la ricerca basata sulla spettrometria di massa. Questo protocollo impiega una preparazione rapida, riproducibile e standardizzata del campione di liquido lacrimale umano raccolto utilizzando il per la ricerca traslazionale in oftalmologia. Il liquido lacrimale umano è un fluido corporeo che può essere raccolto per test molecolari non invasivi in oftalmologia.
Esistono molti metodi standardizzati per la raccolta del liquido lacrimale e la preparazione dei campioni, che sono fondamentali per il successo della ricerca clinica su malattie e condizioni. I metodi non standardizzati sono difficili da confrontare e interpretare tra le metodologie e quindi influenzano i risultati chimici. Questo protocollo consente il campionamento e la conservazione dei fluidi lacrimale a temperatura ambiente.
Questo aiuta a facilitare la raccolta e la spedizione dei campioni. Fornisce estrazioni di peptidi rapide e robuste per l’analisi con spettrometro di massa, che migliora il recupero e l’identificazione dei peptidi. Questo protocollo prevede fasi minime di preparazione del campione per ridurre al minimo gli errori e le incertezze.
Le prestazioni rapide e superiori dell’identificazione e della quantificazione delle proteine mediante spettrometria di massa faciliteranno i medici e i ricercatori nello sviluppo di test molecolari non invasivi. Ottimizzare la preparazione del campione sarà sempre uno dei passaggi critici. Indipendentemente dal metodo di rilevamento, il valore clinico del liquido lacrimale umano deve ancora essere completamente studiato.
Si spera che il metodo di preparazione del campione proposto apra la porta a potenziali applicazioni cliniche nel prossimo futuro.
Questo protocollo descrive un metodo per la raccolta di campioni lacrimale utilizzando strisce di Schirmer e un flusso di lavoro quantitativo integrato per la scoperta di biomarcatori non invasivi delle proteine lacrimali. Il flusso di lavoro di preparazione dei campioni per intrappolamento in sospensione consente una preparazione rapida e robusta dei campioni di lacrime e l'analisi spettrometrica di massa, con conseguenti rese di recupero dei peptidi e identificazione delle proteine più elevate rispetto alle procedure standard in soluzione.
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Cite this Article
Tse, J. S., Sze, Y., Ka-Wai Cheung, J., Li, K., Lam, T. C. A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (202), e64617, doi:10.3791/64617 (2023).
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