O prosencéfalo dos peixes hospeda áreas suspeitas de serem homólogas a regiões cerebrais de mamíferos envolvidas em comportamentos complexos. Estes incluem o hipocampo, o córtex, e a amígdala. Atualmente, estamos tentando entender o efeito da informação sensorial sobre a atividade dessas regiões cerebrais.
A pesquisa atual em neurociência de peixes-zebra usa imagens de dois fótons de cálcio de larvas imobilizadas. Combinado com ensaios de comportamento baseados em realidade virtual, para estudar o processamento sensório-motor no cérebro. A maioria das pesquisas sobre o cérebro do peixe-zebra é feita em larvas, no entanto, alguns comportamentos complexos em peixes não se desenvolvem completamente até a idade adulta.
Nosso protocolo permite o estudo da atividade cerebral no adulto durante o comportamento. Este protocolo reduziu o tempo cirúrgico em cinquenta por cento em relação ao método anterior. É uma abordagem mais eficiente para conter a cabeça de peixes-zebra adultos para uma melhor imagem.
Este protocolo de apoio de cabeça abriu uma oportunidade para realizar um experimento in vivo no cérebro de peixes-zebra adultos. Além da imagem de cálcio de dois fótons, o apoio de cabeça potencialmente permite a manipulação optogenética, eletrofisiologia e até mesmo imagens de ultrassom de peixes vivos.
Summary
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Aqui, apresentamos um protocolo para realizar imagens de cálcio de dois fótons no prosencéfalo dorsal de zebrafish adultos.
Bandonil, J. S., Liao, Y., Fathi, A., Huang, K. Two-Photon Calcium Imaging of Forebrain Activity in Behaving Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (197), e65526, doi:10.3791/65526 (2023).