Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle

Heidy K. Latchman; Stefan G. Wette; Dion J. Ellul; Robyn M. Murphy; Noni T. Frankenberg

doi:10.3791/65750

Journal

/

Biochemistry

/

זיהוי סוג סיבים של שרירי השלד האנושיים

Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle

זיהוי סוג סיבים של שרירי השלד האנושיים

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

2,393 Views

•

07:04 min

•

September 22, 2023

DOI:

10.3791/65750-v

DOI:

10.3791/65750-v

•

07:04 min

September 22, 2023

•

31 Views

Heidy K. Latchman*¹, Stefan G. Wette*¹, Dion J. Ellul¹, Robyn M. Murphy¹, Noni T. Frankenberg¹

¹Department of Biochemistry and Chemistry, La Trobe Institute for Molecular Science, School of Agriculture, Biomedicine and Environment,La Trobe University

Transcript

המחקר שלנו מתמקד בשרירי השלד, המורכבים מתאים בעלי תכונות מטבוליות והתכווצות ייחודיות, המאופיינים כסיבי עוויתות איטיים או מהירים. אנו מתעמקים בגורמים התורמים להבדלים אלה ובוחנים את השלכותיהם בהקשר של הזדקנות, פעילות גופנית ומחלות שונות. לעתים קרובות מתעלמים ממדידת תגובות תאיות בסיבי שריר שלד שונים, או שאינם אפשריים עקב בדיקת הומוגנאטים של שרירים.

טכניקת MyDoBID מאפשרת לנו לנתח שוב ושוב הבדלים בחלבון מסוג סיבים שבעבר לא ניתן היה למדוד. פרוטוקול זה מזהה באופן מדויק ויעיל סיבי שריר מסוג 1 וסוג 2 מדגימות שריר שלד אנושיות מיובשות בהקפאה. שיטה מתוקנת זו מספקת גישה פשוטה לחוקרים לחקור את הבדלי החלבונים בשרירי השלד ברמה התאית.

יש לציין כי הוא מאפשר זיהוי של סיבים מסוג X מסוג שני, ואלה היו מאתגרים מבחינה היסטורית להבדיל. הטכניקה מאפשרת לחוקרים לשפוך אור על כל סוגי הסיבים, כולל סיב X חמקמק מסוג 2. בעזרת טכניקת MyDoBID ניתן כעת לענות על שאלות רבות.

לדוגמה, ניתן לגלות את התכונות של סיבי שריר מסוג X מסוג 2, ולקבוע אם יש ראיות המצביעות על ניוון מועדף של סיבי שריר מסוג X במהלך הזדקנות או מחלה. ניתן גם לראות כיצד התערבות ספציפית בפעילות גופנית משפיעה על כל סוג סיבים.

Summary

פרוטוקול זה מדגים בידוד של סיב יחיד משרירי השלד האנושיים המיובשים בהקפאה וסיווג סוג סיבים על פי איזופורם שרשרת כבדה מיוסין (MHC) באמצעות טכניקת כתמת הנקודות. לאחר מכן ניתן לנתח דגימות סיבים MHC I ו-II מזוהות עבור הבדלים ספציפיים לסוג הסיבים בביטוי חלבונים באמצעות כתמים מערביים.