Nuestra investigación se centra en el músculo esquelético, que está compuesto por células con propiedades metabólicas y contráctiles distintivas, caracterizadas como fibras de contracción lenta o rápida. Profundizamos en los factores que contribuyen a estas diferencias y exploramos sus implicaciones en el contexto del envejecimiento, el ejercicio y diversas enfermedades. La medición de las respuestas celulares en diferentes fibras del músculo esquelético a menudo se pasa por alto, o no es posible debido al examen de los homogeneizados musculares.
La técnica MyDoBID nos permite analizar repetidamente las diferencias de proteínas de tipo fibra que antes eran imposibles de medir. Este protocolo identifica de manera precisa y eficiente las fibras musculares tipo uno y tipo dos a partir de muestras de músculo esquelético humano liofilizado. Este método recientemente revisado proporciona un enfoque sencillo para que los investigadores investiguen las diferencias de proteínas en el músculo esquelético a nivel celular.
En particular, facilita la identificación de las fibras X de tipo dos, y estas históricamente han sido difíciles de distinguir. La técnica permite a los investigadores arrojar luz sobre todos los tipos de fibras, incluida la escurridiza fibra X de tipo dos. Con la técnica MyDoBID, ahora se pueden responder numerosas preguntas.
Por ejemplo, se pueden descubrir las propiedades de las fibras musculares de tipo dos X y determinar si hay evidencia que indique una atrofia preferencial de las fibras musculares de tipo dos X durante el envejecimiento o la enfermedad. También se puede observar cómo una intervención de ejercicio específica afecta a cada tipo de fibra.
Summary
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Este protocolo demuestra el aislamiento de una sola fibra del músculo esquelético humano liofilizado y la clasificación del tipo de fibra de acuerdo con la isoforma de la cadena pesada de miosina (MHC) utilizando la técnica de transferencia de puntos. Las muestras de fibra MHC I y II identificadas se pueden analizar más a fondo para detectar diferencias específicas del tipo de fibra en la expresión de proteínas mediante Western blot.
Latchman, H. K., Wette, S. G., Ellul, D. J., Murphy, R. M., Frankenberg, N. T. Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle. J. Vis. Exp. (199), e65750, doi:10.3791/65750 (2023).