Summary
פרוטוקול לזהות trichothecenes (mycotoxins של דאגה לבריאות האדם) בשיטת ההקרנה החדשה שפותחה על בסיס שיטת immunochemical תחרותי זיהוי סופי אלקטרוכימיים מודגם.
Abstract
Immunoassays הם אלטרנטיבה חוקית ועד יקר יותר זמן רב כמותי HPLC או GC 1, 2 שיטות לאיתור הקרנת mycotoxins מסוכנים מצרכי מזון. בפרוטוקול זה אנו מראים כיצד לפברק ולחקור אנזים אלקטרוכימיים תחרותי assay immunomagnetic המקושרים המבוססים על שימוש של חרוזים מגנטיים תמיכה מוצקה עבור שרשרת immunochemical 3 ואלקטרודות מסך מודפס חישה פלטפורמה.
השיטה שלנו שואפת לקבוע את הסכום הכולל של HT-2 ו-T-2 רעלים, mycotoxins השייכת למשפחת trichothecenes ושל דאגה רבה לבריאות האדם 4. השימוש שיבוט נוגדן עם תגובתיות צלב של 100% כלפי HT-2 ו-T-2 מאפשרת לזהות בו זמנית הן רעלים עם רגישות דומה 5.
הצעד הראשון של assay שלנו היא הצעד ציפוי שבו אנו לשתק HT2-KLH רעלן המצומד על פני השטח של חרוזים מגנטיים. אחרי צעד חסימה, הכרחי כדי למנוע אי - קליטה ספציפיות, תוספת של נוגדנים חד שבטיים מאפשר תחרות בין משותקת HT-2 ו חינם HT-2 או T-2 להציג במדגם או מומס בתמיסה סטנדרטית.
בסוף שלב התחרות, כמות נוגדנים חד שבטיים קשור משותקת HT-2 יהיה ביחס הפוך לכמות רעלן בפתרון המדגם.
נוגדנים משני שכותרתו עם phosphatase אלקליין (AP) משמש כדי לחשוף את מחייב בין הנוגדן הספציפי משותקת HT-2. צעד המדידה הסופית מתבצעת על ידי הטלת aliquot ההשעיה חרוז מגנטי, המתאים פתרון מדגם מסוים / רגיל, על פני השטח של האלקטרודה המסך המודפס עבודה; חרוזים מגנטיים הם משותקים ומרוכז באמצעות מגנט ממוקם בדיוק מתחת מסך מודפס אלקטרודה. אחרי שתי דקות של דגירה בין חרוזים מגנטיים מצע עבור AP, המוצר האנזימטית הוא זוהה על ידי Voltammetry דיפרנציאלי Pulse (DPV) באמצעות מכשיר נייד (PalmSens) יכול גם ליזום באופן אוטומטי eight מדידות תוך הפסקה של כמה שניות.
Protocol
1) חסימה חרוזים מגנטיים מצופה:
המשך כמו בצע לחסום חרוזים מגנטי מצופה:
- הכן מערכת של 2 צינורות מ"ל Eppendorf;
- Homogenize (רועד אך לא vortexing) חרוזים מגנטיים מצופה (ראה נספח להכנת חרוזים מגנטיים מצופה) באמצעות מדגם מסתובבת מערבל;
- מיד לאחר homogenization, פיפטה 10 μl של חרוזים מגנטיים מצופה לתוך כל צינורות נפרדים Eppendorf;
- הוסף 1ml של חלב דל שומן חוסם פתרון לתוך הצינור כל Eppendorf של קבוצת;
- תנו חרוזים מגנטיים דגירה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר על מיקסר מדגם מסתובב;
- הסרת חסימה הפתרון: לעשות זאת במקום הצינורית concentrator החלקיקים המגנטיים עם החלק המגנטי לשים על 2 דקות (ראה חרוזים מגנטיים דבק על הקיר לרוחב של הצינור); בזהירות פיפטה את supernatant, עוזב חרוזים באין מפריע;
- הוסף 1 מ"ל של PBS חיץ NaN + 3 + BSA כפתרון אחסון עבור כל צינור;
- חנות חרוזים מגנטיים מצופה חסום ב 4 ° C (שים לב חרוזים מגנטיים מצופה יציבים לפחות 2 חודשים 4 ° C);
2) שרשרת החיסוני על חרוזים מגנטיים לבנייה של עקומת הכיול וניתוח מדגם
המשך כמו בצע יש חרוזים מגנטיים מוכן למדידה:
- קח אחד Eppendorf צינור (2 מ"ל) של פתרון מצופה חסומים לחלץ כל דגימה שאתה הולך לנתח;
- קחו צינור נוסף Eppendorf לפתרון כל calibrant עבודה;
- Homogenize חרוזים מגנטיים עבור 2 דקות על מיקסר מדגם מסתובב לפני השימוש;
- הסרת נוזל אחסון באמצעות concentrator החלקיקים המגנטיים;
- לשטוף חרוזים מגנטיים שלוש פעמים עם פתרון PBS / BSA כביסה. הסר כביסה נוזלי;
- שלב התחרות: הוסף עבור כל שפופרת המכילה חרוזים שטף מגנטי, 200μl מדגם מוכן לחלץ; להשתמש באחד צינור חרוז מגנטי עבור כל דגימה. חזור על אותו תהליך עבור כל פתרון סטנדרטי. הוסף 200 μl של פתרון נוגדן חד שבטי כדי צינור כל חרוז מגנטי. תנו חרוזים מגנטיים דגירה במשך חצי שעה על מיקסר מדגם מסתובב בטמפרטורת החדר;
- הסר צינורות Eppendorf הפתרון משמש שלב התחרות;
- תיוג צעד: הוסף 400μl של נוגדנים משני שכותרתו כל צינור מגנטי Eppendorf חרוז. תנו חרוזים מגנטיים דגירה במשך חצי שעה על מיקסר מדגם מסתובב בטמפרטורת החדר;
- הסר תיוג פתרון משפופרות Eppendorf;
- לשטוף חרוזים מגנטיים שלוש פעמים עם PBS / tween ® 20 הפתרון כביסה. הסר את נוזלי;
- Resuspend עם 100μl של ה-DEA חיץ כל aliquot חרוזים מגנטיים. עכשיו חרוזים מגנטיים מוכנים לשלב מדידה אלקטרו;
3) האסיפה של PalmSens עם מרבב (MUX) אפשרויות
שימו לב: מוצר הידרוליזה אנזימטית של המצע עבירות על פני האלקטרודה, ומסיבה זו אלקטרודה חדשה נדרשת לכל מדידה.
- חיבור המחשב הנייד כדי PalmSens דרך כבל סדרתי;
- חבר את תקע 9-DIN של מרבב CH8 עם PalmSens.
- חיבור כבל טורי של קשר שמונה ערוץ Mux חשמלי עם מרבב CH8;
- אלקטרודה מקום רצועה ברחוב מגנט שמונה. שימו לב בכל מקום מגנט תחת כל אלקטרודות עבודה (לשים לב, את הצורך של מגנט יחיד עבור כל אלקטרודה הכרחי אחרת החלקיקים המגנטיים לא יהיה מרוכז באזור האלקטרודה עובד);
- חבר את רצועת אלקטרודות במגע eight ערוץ Mux חשמלי;
עבור המדידה DPV להשתמש בפרמטרים הבאים בתיבות המתאימות:
E להתחיל: 0 (V); בסוף E: 0.6 (V); צעד E: 0.016 (V); E הדופק: 0.0339 (V); E מיזוג: 0 (V); בתצהיר E: 0 (V); קצב סריקה : 0.1 (V / s); T הדופק: 0.06 (ים); מיזוג T: 0 (s); בתצהיר T: 0 (s); איזון T: 8 (ים).
4) התגובה האנזימטית אלקטרוכימי מדידה
- Homogenize ידי בעדינות רועד כל צינור Eppendorf המכילה חרוזים מגנטיים מוכן לשלב מדידה אלקטרו מנת לקבל השעיה מפוזר היטב של חרוזים מגנטיים;
- פיפטה מכל Eppendorf, מיד לאחר homogenization, aliquot של 20 μl של פיזור חרוז מגנטי על משטח אלקטרודה המקביל העבודה. עבור כל אלקטרודה של להשתמש באחד רצועה 20 μl של חרוזים מגנטיים שנלקחו שונים צינורות Eppendorf (למשל לשימוש eight eight אלקטרודה Eppendorf שונים);
- הוסף 80 μl של פתרון המצע אנזימטית על האלקטרודה הראשונה. התחל 2 דקות לספור למטה. לאחר 14 שניות, להוסיף 80 μl של פתרון המצע אנזימטית על האלקטרודה השנייה. אחרי עוד 14 שניות, להוסיף 80 μl של פתרון המצע אנזימטית על האלקטרודה השלישית. המשך ב int באותו זמןerval (14 שניות) עד אלקטרודה האחרון (כלומר: כל טיפה aliquot המצע במרווחים של 14 שניות). השעה מרווח של 14 שניות מחושב הזמן הנדרש על ידי potentiostat לבצע את המדידה, של לב, הפתרון 80 μl על חיישן זה אמור לכסות את האלקטרודה, עובד התייחסות נגדית. יתר על כן, פתרונות חיישן אחד לא צריך לבוא במגע עם פתרונות של אלקטרודות השכנות.
- לאחר 2 דקות לספור למטה בנוסף הראשון של פתרון המצע האנזימטית, להתחיל את המדידה אלקטרוכימי;
- השתמש Lite PalmSens תוכנה כדי להשיג פסגות הנוכחי (μA) עבור כל פתרון.
5) חישוב
הקמת עקומת כיול באמצעות משוואה לוגיסטית 4 פרמטרים ולחשב את ריכוז כמות HT-2/T-2 סך הרעלן ננוגרם למיליליטר עבור כל שפופרת המכילה Eppendorf מדגם לא ידוע.
נתוני הניסוי, גובה השיא (μA) נגד ריכוז calibrants (ng / ml), צריך להיות מצויד שימוש שאינו ליניארי ארבע פרמטר לוגיסטי (4-PL) העלילה המשוואה (1) (באמצעות מגרש סיגמא 8.0 או Kaleidagraph). המודל קוי 4-PL מאומץ בדרך כלל כדי לתאר את מבחני מחייב ליגנד (LBAs) 6.
(1)
a, b, x0, Y0 פרמטרים לוגיסטיים כמו שניתן על ידי תוכנית עקומת Sigma מגרש מתאים.
השתמש בנוסחה כדי לחשב ולהסביר את התוכן של הסכום הכולל HT-2/T-2 הרעלן הפתרון מדגם בדילול לחלץ 
(2)
x הוא ריכוז מסה של הסכום הכולל של HT-2/T-2 רעלים פתרון תמצית מדוללת, מחושב מן המשוואה 4 פרמטרים לוגיסטי Nanogram לכל milliltre (ng / ml)
y הוא הערך הנוכחי μA שהתקבלו במדגם לא ידוע
נספח
6) חרוזים מגנטיים מצופה
המשך כמו בצע יש חרוזים מגנטי מצופה:
כביסה נוהל
- Homogenize Dynabeads tosylactivated ® M-280 (פתרון המניה 2 x 109 חרוזים / ml) על ידי רועדת vortexing (מהירות מרבית) דקות 1 (למנוע הקצפה) (נא לציין את הריכוז של חרוזים מגנטיים צריך להיות תמיד זהה, כדי להבטיח שחזור ב המדידה);
- מיד פיפטה 1 מ"ל של חרוזים הומוגני לעיל לתוך צינור 2 Eppendorf מ"ל;
- מניחים את הצינורית concentrator החלקיקים המגנטיים עם החלק המגנטי לשים על 2 דקות (ראה חרוזים מגנטיים דבק על הקיר לרוחב של הצינור);
- בזהירות פיפטה את supernatant, עוזב חרוזים באין מפריע;
- הוצא את הצינור מתוך Eppendorf concentrator החלקיק המגנטי resuspend את החרוזים מ"ל 1 של ה-pH 0.1 borate חיץ M 9.5. מערבבים בעדינות במשך 2 דקות במיקסר המדגם סיבוב 2 דקות;
- פיפטה את supernatant;
- פיפטה 1 מ"ל של תמיסת חיץ borate לתוך הצינור Eppendorf. חרוזים מגנטיים נמצאים כעת מוכן לשלב ציפוי;
ציפוי נוהל
- מוסיפים 600 מ"ל של HT-2 מצומדות עם פתרון (Hemocyanin Keyhole צלחית) מניות KLH כדי מ"ל 1 של חרוזים מגנטיים) (סופי HT-2-KLH ריכוז של 375 מ"ג / מ"ל); חרוזים מגנטיים לדגור HT-2-KLH פתרון 20h ב 37 ° C * עם סיבוב איטי על הטיה וסיבוב מיקסר מדגם;
- אחרי מקום דגירה את הצינורית concentrator החלקיקים פיפטה מגנטי את supernatant;
לשטוף חרוזים מצופים פעמיים עם 1 מ"ל של תמיסת PBS / BSA חיץ. בין כביסה להסיר כל PBS / BSA פתרון. כל צעד כביסה בוצעו הגדרה חרוזים מגנטיים PBS / BSA על מערבל סיבוב 5 דקות; - לשטוף חרוזים מגנטיים פעם באמצעות 1 מ"ל של תמיסת טריס / BSA חיץ. הסר טריס / פתרון BSA. ביצוע שלב זה על ידי הגדרת חרוזים מגנטיים טריס / BSA חיץ על סיבוב מערבל עבור 4 שעות ב 37 ° C *;
- לשטוף חרוזים מגנטיים פעם באמצעות 1ml של רענון (נשמר במקרר ב 4 מעלות צלזיוס) PBS / פתרון BSA חיץ. הסר PBS / BSA פתרון. ביצוע שלב זה הגדרה חרוזים מגנטיים PBS / BSA חיץ על סיבוב מערבל עבור 5min בטמפרטורת החדר;
- אחרי כביסה צעד להסיר את כל נוזל כביסה להוסיף 1 מ"ל PBS חיץ NaN + 3 + BSA כנוזל האחסון;
- חנות חרוזים מגנטיים מצופה ב 4 ° C (שים לב חרוזים מגנטיים מצופה יציבים לפחות 2 חודשים 4 ° C);
* לצורך זה מערבל ממוקם בתנור מצויד עם חור המאפשר הכניסה של כבל אספקת החשמל. לחלופין המיקסר יכול להיות ממוקם בחדר thermostated על 37 ° C.
7) Sample הכנה מיצוי
25 גרם של דגימת טחון (אוכל ארוחת בוקר או דגנים לתינוק) אנחנוighed לצנצנת בלנדר והוציא עם 100 מ"ל של אצטוניטריל / פתרון המים (86/14) במשך 3 דקות במערבל במהירות גבוהה. לאחר צנטריפוגה ב 4000 סל"ד (3,000 גרם) במשך 5 דקות, 8 מ"ל של supernatant נלקחו מטוהרים עם טור Mycosep, 4 מ"ל של לחלץ את ניקו יובשו תחת זרם חנקן. דגימות יבשים יכולים להיות מאוחסנים ב -30 ° C עד מספר חודשים.
8) הכינון מחדש לדוגמא
ארוחת בוקר דגנים
מחדש את ארוחת הבוקר לחלץ דגנים יבשים (מזון דגנים מבוסס שהופנתה לצריכה מבוגר) עם 40 מ"ל של PBS pH 7.4. בדרך זו מדגם עם ריכוז של רעלן שווה להגביל המשפטי אמור (200 ng / g) ייתן בשלב המדידה אות נופלת באמצע טווח העבודה.
מזון לתינוקות
מחדש מזון יבש לחלץ תינוק (אוכל דגני בוקר המבוססים שהופנתה לצריכה התינוק) עם 4 מ"ל של PBS. בדרך זו מדגם עם ריכוז של רעלים שווה להגביל המשפטי אמור (20-25 ng / g) ייתן בשלב המדידה אות נופלת באמצע טווח העבודה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
השימוש נוגדנים כמו בדיקה הכרה biomolecular ראה השימוש הנרחב בטכנולוגיות חישה; מתודולוגיות גילוי immunochemical, כגון ELISAs ו MEIAs, נמצאים, כיום, בין פלטפורמות השתמשו ביותר מיושם במעבדות רבות 7.
בעוד הגישות הללו להשיג רגישות וספציפיות חריגים, המטרה העיקרית של קבוצות מחקר רבות בשנים האחרונות שיפור ואופטימיזציה של הופעות שלהם.
בפרוטוקול זה הראינו כיצד לפברק ולחקור immunosensor אלקטרוכימי לגילוי mycotoxin. אנו מאמינים כי השימוש אלקטרוכימיה לפתח חיסונית חיישנים מבוססי יתברר חשיבות גוברת בעתיד. זאת בשל היתרונות המובנים זיהוי אלקטרוכימי על אחד אופטי. אלקטרוכימיה היא למעשה נוטה פחות הפרעות ו הוכיחה חזקים להפליא נגד הלא ספציפית ספיחה ולבצע היטב גם כאשר קרא תיגר על מטריצות מדגם מורכבים כגון דגני בוקר babyfood. יתר על כן, אלקטרוכימיה מתאים יותר המזעור כדי הסתגלות מערך רב.
צימוד של גישה כזאת עם חלקיקים מגנטיים השתפרו גם הופעות אנליטיים הוכיחו להיות מתאים במיוחד לאיתור מזהמים דגימות מזון.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות ננסי דאונר וכל חברי מהמעבדה של כימיה אנליטית, אוניברסיטת רומא "טור Vergata" על שיתוף הפעולה שלהם ותמיכה לוגיסטית. עבודה זו נתמכה על ידי האיחוד האירופי את הפרויקט "BioCop".
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Potassium chloride | Sigma-Aldrich | P9333 | |
| Potassium dihydrogen phosphate | Sigma-Aldrich | P9791 | |
| Disodium hydrogen phosphate | Sigma-Aldrich | S3264 | |
| Sodium chloride | Sigma-Aldrich | S3014 | |
| MgCl2 anhydrous | Sigma-Aldrich | M8266 | |
| DEA (99.5%) | Sigma-Aldrich | 31589 | |
| HCl 37% | Sigma-Aldrich | 320331 | |
| H3BO3 | Sigma-Aldrich | B6768 | |
| Tris[hydroxymethyl]-aminomethane | Sigma-Aldrich | 252859 | |
| BSA (albumin bovine serum) | Sigma-Aldrich | A4503 | |
| NaOH | Sigma-Aldrich | S5881 | |
| TWEEN 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | |
| NaN3 | Aldrich | 71290 | |
| 1-Naphthyl phosphate disodium salt | Fluka | N7255 | |
| Skimmed milk blocking solution - non fat dry milk | Bio-Rad | 170-6404 | |
| HT-2 conjugated with KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin), stock solution (1 mg/ml in PBS): | Biopure | 004050 | The HT-2-KLH conjugate was obtained by CDI-method where the free OH-groups on position 3 and 4 at the HT-2 toxin were activated by N,N'-carbonyldiimidazole (CDI) and the activated HT-2 toxin was let to react with aminogroups of the protein (KLH) to generate a stable carbammate linkage. |
| Secondary labeled antibody: Anti-mouse IgG (H+L) from horse, conjugated with Alkaline Phosphatase, concentration 1 mg/ml. | Vector Laboratories | AP-2000 | |
| HT-2 toxin | Biopure | ||
| Magnetic beads: Dynabeads® | Invitrogen | M-280 Tosylactivated | Concentration 2 x 109 beads/ml. |
| Phosphate buffered saline (PBS), pH 7.4 | Dissolve 0.20 g of potassium chloride, 0.20 g of potassium dihydrogen phosphate, 1.16 g of disodium hydrogen phosphate and 8.00 g of sodium chloride in 900 ml of water | ||
| Diethanolamine buffer, DEA, 0.97 M + 1 mM MgCl2 + 0.15 M KCl, pH 9.8 | Dissolve 0.0476g of MgCl2 anhydrous and 7.3.59 g of KCl in ~ 300 ml of water. After dissolution add 51 ml of DEA (99.5%). Adjust pH to 9.8 with HCl (6 M). Dilute to 500 ml with water. | ||
| Borate buffer, 0.1 M, pH 9.5 | Dissolve 3.09 g of H3BO3 in ~ 300 ml of distilled water; adjust pH to 9.5 with NaOH and/or HCl (6 M or lower concentrations). Dilute to 500 ml with distilled water. | ||
| TRIS buffer, 0.2 M, pH 8.5 | Dissolve 3.85 g of Tris[hydroxymethyl]-aminomethane in 100 ml of water. Adjust to pH 8.5 with NaOH and/or HCl (6 M or lower concentrations). Dilute to 200 ml with water. | ||
| TRIS buffer + BSA solution (0.1%), pH 8.4 | Dissolve 0.050 g of BSA in 50 ml of TRIS buffer pH 8.4. This solution must be freshly prepared on the day of use. | ||
| PBS buffer + TWEEN® 0.05% | Dissolve 0.250 g of TWEEN 20 in 500 ml of the previously prepared PBS buffer, pH 7.4 | ||
| PBS buffer + BSA solution 0.1% | Dissolve 0.050 g of BSA in 50 ml of PBS buffer, pH 7.3. This solution must be freshly prepared on the day of use. | ||
| PBS buffer + BSA 0.1% + NaN3 0.02% | Dissolve 0.050 g of BSA and 0.010 of NaN3 in 50 ml of PBS buffer, pH 7.3. Storage solution | ||
| Enzymatic substrate | Dissolve 0.010 g of 1-Naphthyl phosphate sodium salt in 100 ml of DEA buffer pH 9.8. Wrap the flask tightly in aluminium foil. This solution must be freshly prepared on the day of use. | ||
| Skimmed milk blocking solution | Add 0.20 g of Blotting Grade Blocker Non-Fat Dry Milk (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) to 200 ml of PBS buffer pH 7.3. This solution must be freshly prepared on the day of use. | ||
| HT-2 stock solution | Dissolve 10 mg of trichothecene HT-2 toxin vial, in 10 ml of acetonitrile to give a solution with a concentration of 1 mg/ml. Split up this solution into single-use aliquots of 30 ml and store them at less than -30 °C. | ||
| HT-2 Working standard solution | Pipette 20 ml of HT-2 toxin stock solution into a 2 ml calibrated volumetric flask and dilute with acetonitrile to obtain a HT-2 working solution containing 10 μg /ml of trichothecene toxin. This solution should be freshly prepared on the day of use. | ||
| HT-2 Working calibrant solutions | Dilute the HT-2 working standard solution (10 μg/ml) to prepare working calibrant solution 100 ng/ml. Dilute HT-2 working calibrant solution 100 ng/ml to prepare working calibrant solutions of the following concentrations 0 (blank), 0.5, 1, 2, 4, 10 ng/ml. These solutions must be prepared fresh on the day of use. | ||
| HT-2 conjugated with KLH | Split up HT-2 conjugated with KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) stock solution (1 mg/ml in PBS) into single-use aliquots of 350 μl. Store aliquots at -30 °C. | ||
| Specific Monoclonal Antibody | Dilute 1:350 (v:v) the stock concentration (1.383 mg/ml) of monoclonal antibody in PBS to use in competition step. This solution must be prepared fresh at the moment of use. 10 ml antibody stock solution in PBS for a final volume of 3.5 ml, are enough to analyze 17 standards and /or samples. | ||
| Secondary Labeled Antibody | Anti-mouse IgG (H+L) conjugated with Alkaline Phosphatase is diluted 1:100 (v:v) in PBS to use in competition step. 100 μl antibody stock solution in PBS for a final volume of 10 ml, are enough to analyze 25 standards and /or samples. This solution must be prepared fresh at the moment of use. | ||
| Magnetic Particle Concentrator: MPC®-S | Invitrogen | ||
| PalmSens instrument | PalmSens | Provided with PalmSens Lite, Serial cable connecting PC laptop and Mux options software | |
| CH8 PalmSens Multiplexer | PalmSens | ||
| Eight channel Mux electric contact | hand made | ||
| Strip with eight screen printed electrodes (SPEs) | hand made | ||
| Specially designed support for electrodes strip | hand made. Includes 8 neodymium magnets each of which is placed below each working electrode surface of the SPE | ||
| Calibrated microliter pipettes | Gilson, Inc. | ||
| Magnetic stirrer and stir bars. | |||
| Glass beakers (100, 50, 20 ml). | |||
| Volumetric flasks (2ml). | |||
| 0.2 and 2ml Eppendorf tubes. | Eppendorf | ||
| Falcon tubes of 5ml and 15ml. | Falcon BD | ||
| Laboratory Vortex Mixer | Do not use vortex mixer to resuspend magnetic beads coated with HT2-KLH or linked with immunological chain to avoid denaturing of proteic parts | ||
| Laboratory oven or thermostated room | Choose a oven able to keep a temperature of 37±3 °C. |
References
- Koch, P.
- Krska, R., Baumgartner, S., Josephs, R. State of the art in the analysis of type-A and-B trichothecene mycotoxins in cereals. Fresenius J. Anal. Chem. 371, 285-299 (2001).
- Morozova, T. Y., Morozov, V. N. Force differentiation in recognition of cross-reactive antigens by magnetic beads. Anal. Biochem. , 263-271 (2008).
- FAO Food and Nutrition Paper 74. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES Fifty-sixth meeting. 2001 Feb 6-15, Geneva, , Food & Agricultural Organization of the United Nations. 115 (2001).
- Piermarini, S., Volpe, G., Ricci, F., Micheli, L., Moscone, D., Palleschi, G., Fuhrer, M., Krska, R., Baumgartner, S. Rapid Screening Electrochemical Methods for Aflatoxin B1 and Type-A Trichothecenes: a preliminary study. Anal. Lett. 40, 1333-1346 (2007).
- Findlay, J. W. A., Dillard, R. F. Appropriate calibration curve fitting in ligand binding assays. AAPS J. 9 (2), E260-E267 (2007).
- Ricci, F., Volpe, G., Micheli, l, Palleschi, G. A review on novel developments and applications of immunosensors in food analysis. Anal. Chim. Acta. 605 (2), 111-129 (2007).
