Cerrahi Yaralar yılında Yara Eksuda Biyokimyasal Arabulucular Toplama ve Ölçme

Summary

Bu makalede, sezaryen doğumu takiben cerrahi yara yerinde biyokimyasal inflamatuar ve nosiseptif mediatörler toplanması ve ölçülmesi için bir metodolojinin detaylı ve görsel açıklama sağlar. Bu insan bioassay yara ve serum sitokin konsantrasyonları ve yara sitokin, kemokin ve neuropetides ilaç-aracılı değişiklikler arasındaki ilişkiyi belirlemek için kullanılır olmuştur.

Abstract

Biz cerrahi yara yerinde biyokimyasal inflamatuar ve nosiseptif mediatörler toplamak ve ölçmek mümkün olan bir metodoloji açıklanmaktadır. Siteye özgü biyokimyasal belirteçler Toplama serum ve cerrahi yara düzeyleri arasındaki ilişkiyi anlamak için önemlidir, mediatör salınımı, ağrı, analjezik kullanımı ve diğer ilgi çekici sonuçları arasında herhangi bir ilişkiyi belirlemektir ve cerrahi yara üzerine sistemik ve periferal ilaç uygulamasının etkisini değerlendirmek biyokimya. Bu metodoloji spinal anestezi ile elektif sezaryen geçiren sağlıklı kadınlara uygulanmıştır. Biz hastanın ağrı skorları ve 48 saat sonrası sezaryen için analjezik tüketimi aynı zaman aralıklarında yara eksuda ve serum mediatörler ölçtük. Bu metodoloji kullanılarak bu sinir büyüme faktörü (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2), P maddesi, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, dahil olmak üzere çeşitli biyokimyasal aracılar tespit etmek mümkün olmuştur IL-8,IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 ve MIP-1β. Bu insan cerrahi yara biyoassay uygulayarak Çalışmaları yara ve serum sitokin konsantrasyonları veya onların zaman serbest profili arasında anlamlı ilişki bulduk (J Ağrı 2008;. 9 (7) :650-7) ¹ Biz de tanımlamak için tekniğin programı belgelenmiştir. Yara sitokin içeriği uyuşturucu aracılı değişiklikler (Anseth analg 2010; 111:1452-9). ²

Introduction

Bir cerrahi kesi sonra, ikamet ve inflamatuar hücreler göç yanlısı ve anti-inflamatuar sitokinler, prostanoidler, nöropeptid ve ağrı başlatılması ve sürdürülmesi için önemli olan kemokinlerin bırakın. Siteye özgü biyokimyasal belirteçler toplamak için ^3,4 yeteneği belirlemek için önemlidir serum ve cerrahi yara düzeyleri arasındaki ilişki, mediatör salınımı ve cerrahi ağrı arasındaki karmaşık ilişkiyi anlamak ve cerrahi yara biyokimya üzerine sistemik ve periferal İlaç idaresi hem etkisini değerlendirmek mümkün. Çalışmalar biyokimyasal mediatörlerin sistemik ölçümleri üzerinde yoğunlaşmıştır ve mekâna özgü sürüm dikkate almadım. Sitokin ve kemokin ^5,6 serum ölçümleri yerel cerrahi yara biyokimyasal olayların yansıtıcı olmalı ve sadece cerrahi yaralanma küresel sistemik yanıt göstermeyebilir. Bu makalede, köknar bu metodolojinin detaylı ve eşsiz görsel açıklama sağlarst Ağrı Dergisi 2008 yılında başvurulan. Bu Jove maddenin ^1. amacı yöntemlerinin eşsiz ve görsel açıdan geliştirilmiş açıklama sağlamaktır.

Protocol

1. Çalışma Protokolü

• Kurumsal İnceleme Kurulu onayı ve yazılı onam edinin.
• Çalışmanın yürütülmesi için uygun bir cerrahi nüfus seçin. Bu metodoloji sadece sezaryen yaraları uygulanmış ancak çoğu cerrahi yaralar uygun olacaktır.
• Sizin çalışma katılımı için içerme ve dışlama kriterleri göz önünde bulundurun. Cerrahi yara enfeksiyonu oranı yüksek olan hastalar ve prosedürlere uygun olmayabilir.
• Potansiyel zorlukları önlemek için tüm hastalar için anestezi ve postoperatif yönetimin standartlaştırın.

2. Nosiseptif ve İnflamatuar Biyokimyasal Arabulucu Koleksiyonu

• Kapatılması (diğer doku katmanları düşünülebilir) yara hemen öncesinde subkutan tabaka haline ON-Q SilverSoaker (I-Flow, Lake Forest, CA) ile ON-Q PainBuster yerleştirin. ON-Q PainBuster Ağrı Kesici Sistem sürekli olarak 2 ml / saat hızında normal salin sunar. Taşıyıcı tarak olabilirile ined ya da bu gibi bir lokal anestetik ve non-steroid anti-enflamatuar olarak ilgi ilaçlarla karşılaştırıldığında,.
• Belirtilen zaman noktalarında yara eksuda aspirasyonu sağlamak için bu sistem içine standart bir üç yollu musluk birleştirme. Sürekli infüzyon pıhtılaşma kateter önler ve eksuda örnekleri üretmek için sistem güvenilirliğini artırır. Eksuda aspirasyon zor ise (olguların yaklaşık% 5), yara üstünde hafifçe iterek (örneğin, hastanın oturarak ya da düz yalan) öznenin konumunu değiştirerek, bir 0.5-1 ml serum fizyolojik floş kullanarak veya kaldırması kateter 1-2 cm.
• Protokolü (örneğin, 1, 4, 6, 24 ve sezaryen doğumdan sonra 48 saat) ile belirtilen zaman noktalarında, aspirat ve yara eksuda 1 ml çekilebilir. Proteinaz inhibitörü 30 ul içeren bir polietilen kap içine eksuda aktarın. Biz amaçlı komple Proteinaz İnhibitörü (Bioscience Roche, Palo Alto, CA) kullandık.
• Toplama, 1 saat içinde, 10 dakika süreyle 3000 rpm'de santrifüj ve buz üzerinde örnekleri koydu.
• -20 ° C'de standart bir mikrosantrifüj tüp ve mağaza serum ve yara supernate ve yer çıkarın

3. Test Analiz

• Bir kez tüm çalışma eksüda ve serum numuneleri eritin ve aynı zamanda örneğin analizi, toplanmış ve saklanır.
• Biz sitokinler ve multiplex immünoassay kullanarak kemokin ölçüldü. Multipleks immuno-assay tekniği bize küçük (50 ul) ses örneklerinin tahlil sayıda analitlerin sağlar. Multipleks ELISA ile elde edilenler ile karşılaştırılabilir sonuçlar üretebilir. Biz 17-plex Bio-PlexTM sistemi (BioRad, Herc kullanmışBizim analizi için Modüller, CA). Bu tahlil, tümör nekroz faktör α (TNFa), interferon α (INFα), interlökin 1β (IL-1β), interlökin 2 (IL-2), interlökin 4 (IL-4), interlökin-5 (IL-5 ölçebilen ), interlökin 6 (IL-6), interlökin-7 (IL-7), interlökin-8 (IL-8) ve interlökin (IL-10), interlökin 12 (IL-12), interlökin 13 (IL-13), interlökin 17 (IL-17), granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit-makrofaj koloni stimüle edici faktör (GM-CSF), monosit kemoatraktan protein 1 (MCP-1) ve makrofaj inflamatuar protein 1 (MIP-1β). Sinir büyüme faktörü Bio-Plex amin kaplin kiti ile 17-plex plaka ekleyerek NGF DY256 antikoru ile ölçüldü.
• İyi kaliteli analiz temin etmek için, her bir ölçüm kopya halinde yapılmalıdır. Her analit için standart eğriler (0.20 konsantrasyonlarda, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml artı imalatçı tarafından sağlanan referans analit kullanılarak oluşturulurnormal salin için sıfır standardı). Standart eğriler Her çalıştırma dahil edilir ve örnek konsantrasyonları Bio-Plex Manager yazılımı ile hesaplanmıştır.
• P maddesi ve prostaglandin E2 yüksek hassasiyet ELISA Kitleri kullanılarak ölçüldü. Bu analiz için Assay Designs, Inc (Ann Arbor, Michigan) kullanılmıştır. Üreticinin özelliklerine göre iki nüsha analizi gerçekleştirin.

Representative Results

Bu yöntem kullanılarak da yara eksuda ve plazma IL-5 hariç yukarıda belirtilen tüm biyokimyasal mediyatörler tespit etmek mümkün olmuştur. ^1,2 Bazı ek sitokinler (TNFa, IL-4, IL-17, plazmada tespit edilememiştir INFγ , GM-CSF). bildirilen çalışmalarda ölçülen sitokin ve kemokin ¹ zamanlı kurs 24 saatlik gözlem süresi boyunca devam edildi ilk birkaç saat içinde bir plato .. ^1,2 Ancak NGF giderek artış ulaşan tutarlı PGE2 1 saat içinde zirve yaptı ve daha sonra giderek azaldı. 24 saat toplama süresi, ¹ Özellikle kayda değer sonuçlar belirgin IL-10 seviyeleri azaldı ve uyumlu lokal anestezik bupivakain ile telkin yaralarda substans P düzeyleri artmış genel bir pro- İlacın enflamatuar etkisi (Şekil 1). ² farklı çalışmada sezaryen de bundan sonra analjezik tüketimi gösterdiüniforma cerrahi olumsuz yara eksuda IL-6, IL-1 β, ve G-CSF konsantrasyonları (Şekil 2) ile korele idi. ¹

Şekil 1. İnterlökin-10 (IL-10) ve madde P 1 ile ölçülür eksüda seviyesini seviyeleri (pg / ml), 3, 5, 7 ve 24 saat sonrası sezaryen yara. Normal salin grubunda gri elmas gösterilir ve bupivakain grubunda siyah kareler ile gösterilir. * = Gruplar arasında önemli derecede farklı (P <0.005).

Şekil 2. Interlökin-6 (pg / ml) ve sezaryen doğumdan sonra ilk 24 saat içinde morfin tüketimi arasındaki ilişki.

Discussion

Yukarıda belirtildiği Bu metodoloji, yara Eksüda içinde biyokimyasal ve nosiseptif inflamatuar aracıların saptamak için yeterli olduğu tespit edilmiştir. Çeşitli zaman noktalarında Örnekleme da bize zamanla bu mediyatörlerin değişiklikler. ^1,2 Biz seri cerrahi yara eksuda enflamatuar ve nosiseptif mediatörlerin salınımını profili ölçebilirsiniz herhangi bir diğer insan cerrahi yara tahlil farkında değildir gözlemlemek için izin verdi. Cerrahi insizyon sitesinden yara eksuda birikimi bizim metodolojisi alınan sonuçlar, ciltaltı yara mediatör salınımını biyokimyasal mediatör salınımını intraartiküler veya diğer vücut boşluklarında farklı olabileceğini düşündürmektedir kalça eklemi, ^7,8 boşalım kullanan çalışmalardan farklıdır. Ayrıca, kanalizasyon elde edilen sonuçlar yara içine kan kaybı, karmakarışık olabilir, ve bu yüzden doğru yerel biyokimyasal mediatör salınımını yansıtmayabilir.

Arasındaki zayıf bir korelasyonyara ve serum düzeyleri cerrahi yaralar çalışılırken siteye özgü sürüm belirlenmesi önemini ortaya koymaktadır. Yerel değişiklikler nedeniyle cerrahi travma ve strese yanıt olarak diferansiyel sistemik ve yerel üretim de dahil olmak üzere birçok faktöre sistemik yansıtılmamış olabilir. Biz belirli bir pro-ve anti-inflamatuvar sitokin ve kemokin seçimi yanı sıra NGF, SP ve PG-E2 sezaryen yara eksuda, ^1,2 bu yöntemin diğer diğer cerrahi modellerine uygulanan ve birçok edilebilir ölçmek için seçmiş olsa biyokimyasal mediyatörler.

Cerrahi yara lokal anestezik damlatıldıktan postoperatif ağrı artırmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. ⁹ metodolojisi uygulayarak, biz yara biyokimya etkiler cerrahi yaraların içine lokal anestezik damlatıldıktan göstermek mümkün olmuştur. ² A IL-10 azalma ve substans P artış bupivakain instillasyon yara eksuda bir bozulma o önerirf anti-inflamatuar modülasyon. Periferal uygulanan lokal anestezik böylece kısmen cerrahi sonrası eklemlerde lokal anestezik bağlı chondrolysis sorumlu olabilir inflamatuvar süreçler, ^10,11 etkileyebilir. ^12.

ON-Q PainBuster Ağrı Kesici Sistem Dairesi (FDA) ameliyat sonrası ağrıyı azaltmak için cerrahi yara siteye lokal anestezik teslimatı için kullanılan 1998 yılından bu yana cihaz onaylanan ABD Gıda ve İlaç olduğunu. Bu ve diğer kateterler kullanılarak Sürekli yara instilasyon artmış yara yeri enfeksiyonu ile ilişkili olmamıştır. ON-Q SilverSoaker ile ^9,13 ON-Q PainBuster ilaçlar demleyin ve defalarca yara eksuda örneklemek için tasarlanmıştır. Bu tekniğin hiçbir yara enfeksiyonları var olduğu halde bu sistem yara eksuda tadarken, biz bir aseptik teknik stres. Numune alımını kolaylaştırmak için Bizim önerilen değişiklik araştırma amaçları için saklanmalıdır değil rutin klinik use. Biz de kateter yerinde kalır süresi 48-72 saat ile sınırlı öneririz.

Bu cerrahi alan biyoassay teknik postoperatif ağrı inflamatuvar ve nosiseptif biyokimyasal mediatörler arasındaki ilişkiyi anlamak için iyi bir model sunar. Biz yerel olarak yönetilen bir non-steroid anti-inflamatuar ilaçlar ve opioidlerin etkilerini araştırmak için gelecekte yapılacak çalışmalarda metodolojisini kullanır. Tekniği de yara iyileşmesi, aşırı yara ve cerrahi yara enfeksiyonu inceleyerek araştırmalar kendisine ödünç verebilir.