גליומה אורתוטופית ראשונית קסנוגרפטים recapitulate צמיחה הסתננות איזוציטראט דהידרוגנאז אני מוטציה

סיכום

גליומות ממאירות מהוות קבוצה הטרוגנית של ניאופלסמות גליה מסתננות מאוד עם תכונות קליניות ומולקולריות מובהקות. קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים מסכמים מחדש את התכונות ההיסטופתולוגיות והמולקולריות של תת-סוגים ממאירים של גליומה במודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים.

תקציר

גליומות ממאירות מהוות קבוצה הטרוגנית של ניאופלסמות גליה מסתננות מאוד עם תכונות קליניות ומולקולריות מובהקות. קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים מסכמים מחדש את התכונות ההיסטופתולוגיות והמולקולריות של תת-סוגים ממאירים של גליומה במודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים. כדי מודל WHO ציונים III ו IV גליומות ממאירות מבחני השתלה, תאים סרטניים אנושיים הם xenografted לתוך אתר אורתוטופי, המוח, של עכברים immunocompromised. בניגוד לשנאת זרים משנית המשתמשת בתאי גידול מתורבתים, תאי גליומה אנושיים מנותקים מדגימות שננשכו ומושתלים ללא מעבר קודם בתרבית הרקמות כדי ליצור קסנוגרפטים ראשוניים. ההליך בדו"ח זה מפרט הכנת מדגם הגידול, השתלה תוך נדרית לעכברים immunocompromised, ניטור תחריט הגידול וקציר הגידול למעבר הבא לתוך בעלי חיים המטופל או ניתוח. הכנת תאים סרטניים דורשת 2 שעות והליך כירורגי דורש 20 דקות / בעל חיים.

מבוא

גליומות ממאירות הן גידולי גליה ראשוניים של מערכת העצבים המרכזית המתרחשים במוח ולעיתים בחוט השדרה. Gliomas מסווגים על ידי ארגון הבריאות העולמי (WHO) על פי הדמיון היסטולוגי אסטרוציטים, אוליגודנדרוציטים או תאים ependymal ולאחר מכן מדורגים מספרית (אני עד IV) עבור תכונות פתולוגיות של ממאירות. תת-הסוגים ההיסטולוגיים הנפוצים ביותר הם אסטרוציטומות, אוליגודאנדרוגליומות ואוליגואסטרוציטומות מעורבות. גליומות ממאירות המקיפות את ציוני WHO II עד IV מאופיינים בצמיחה פולשנית ו recalcitrance לטיפולים הנוכחיים. בכל שנה בארצות הברית, כ 15,750 אנשים מאובחנים עם גליומה ממאירה וכ -12,740 חולים נכנעים למחלה זו. נתונים סטטיסטיים אלה מדגישים את האופי הקטלני במיוחד של גליומות ממאירות ואת הצורך החשוב ביעילות טיפולית משופרת.

מודלים של סרטן חיוניים לחקר ביולוגיה של גידולים וטיפולים. קווי תאים סרטניים אנושיים מייצגים צעד ראשון חשוב עבור מניפולציות במבחנה ומחקרים vivo xenografting (xenografts משני)¹. עם זאת, תרביות תאים סרטניים סטנדרטיים עוברים טרנספורמציה פנוטיפית וגנוטיפית^2-4 שלא ניתן לשחזר בקסנוגרפטים משניים⁵. יתר על כן, שינויים גנטיים כגון מוטציות isocitrate dehydrogenase(IDH)6 ,^{אוכלוסיות}תאי גזע שונות⁷ ותלות במסלולי איתות מרכזיים⁸ יכולים ללכת לאיבוד בתרביות תאים סרטן. פרופילים גנומיים ניתן לשמור במידה רבה יותר בתרבות כדור הסרטן, אם כי עדיין לא מצליחים לשקף באופן מלא את הגנוטיפ של גידולים ראשוניים^2,3. השתלה אורתוטופית ישירה שוללת את ההשפעות של תרבות במבחנה, מספקת מיקרו-ווירוניזציה נאותה, ושומרת על שלמותם של תאים יוזמים גידולים^9,10. לכן, קסנוגרפטים ראשוניים מייצגים מודל פרה-קליני רב עוצמה ורלוונטי לבדיקה קפדנית של סוכנים ממוקדים כדי לסייע בתכנון הרציונלי של ניסויים קליניים עתידיים^5,11,12.

פרוטוקול

1. הכנת השעיית תאים סרטניים

שים לב: אישורים מוסדיים מתאימים לשימוש בחומר החולה ובעלי חיים נדרשים להקים ולתחזק גליומה אורתוטופית ראשונית xenografts. במרכז הרפואי של אוניברסיטת ונדרבילט, חומר גידול חתוך כי הוא מעבר לזה הנדרש למטרות אבחון נאסף בהסכמת המטופל למאגר רקמת מחקר. דגימות מסומנות במספר אקראי של מסד נתונים REDcap בן 5 ספרות וכל המזהים הספציפיים למטופל מוסרים. מסד הנתונים REDcap מכיל נתונים קליניים מזוהים עבור כל דגימה במאגר הרקמות הכולל מין, גיל (בשנים), גזע, מצב הישרדות, פתולוגיה, טיפולים בסרטן, שנת כריתה, וזמן להתקדם. כדי לשמור על סטריליות ולייעל את ההצלחה של שיטת xenograft העיקרית, כל ריאגנטים, מכשירים כירורגיים steam-autoclaved, ואת האתר הכירורגי צריך להיות מורכב או מוכן מראש.

שים לב: דגימות גליומה מכילות לעתים קרובות כמויות גדולות של מיאלין ופסולת. בהתאם לגודל הדגימה, ייתכן שיהיה צורך להשתמש ביותר מ 4 צינורות שיפוע רציפים להסרת נאותה של מיאלין ופסולת.

שים לב: התהליך הושלם כאשר אין, או מעט, נראה בבירור רקמה לא ממושמעת שנותרה. הימנע מהכנסת בועות במהלך תהליך הטריטורציה.

שים לב: הכדאיות של התא לאחר הניתוק היא בדרך כלל >90%. viabilities נמוך יותר עשוי לשקף משתנים רבים כולל טיפול ברקמות תת-אופטימליות או זמן הובלה מחדר הניתוח, שיטת cryopreservation, או טכניקת דיסוציאציה פפאין. viabilities הסלולר התחתון עדיין עשוי להיות מספיק, עם זאת, כל עוד מספר מספיק של קיימא עשוי להיות מושתל בנפח המתאים. עבור כל עכבר, 50,000-200,000 תאים בני קיימא מושתלים בנפח של 2 μl. בשל קצה משופע של מחט המזרק, תוספת של 5 μl של השעיית התא צריך להיכלל בנפח הסופי כדי להבטיח כי חומר הולם ניתן למשוך לתוך המזרק עבור כל זריקה. לדוגמה, כדי להזריק 2 μl / עכבר עבור 5 עכברים הנפח הסופי צריך להיות 15 μl (15 μl = (5 x 2 μl) + 5 μl).

1. מניחים את חומר החולה שזה עתה הוקדש למחילה במיכל סטרילי ומכוסה על קרח להובלה למעבדה. לעבד את הדגימה ישירות להשתלה או cryopreserve את הדגימה חנקן נוזלי (ראה להלן) לאחסון חנקן נוזלי ושימוש מאוחר יותר.
2. הכן את פתרונות דיסוציאציה פפאין (פתרון פפאין, פתרון מעכב לשטוף / פרוטאז פתרון הדרגתי רציפה) במכסה המנוע סטרילי עם רכיבי הערכה והוראות שסופקו על ידי היצרן. תווית סטרילית 15 מיליליטר פוליסטירן צינורות חרוטים ולהפיץ את הפתרונות כדלקמן:
   • צינור 1: 5 מ"ל של פתרון פפאין
   • צינור 2: 3 מ"ל של תמיסת מעכבי שטיפה/פרוטאז
   • צינורות 3-6: 5 מ"ל כל פתרון שיפוע לא רציף
3. מניחים את דגימת גליומה בצינור 1 עם 5 מ"ל של פתרון פפאין ו triturate עם פיפטה 5 מיליליטר על פני 10-20 דקות זמן.
4. פיפטה החומר למעלה ולמטה 10 פעמים ולאחר מכן להדגיר את החומר במשך 2-3 דקות בטמפרטורת החדר לפני ייזום המחזור הבא של trituration.
5. מקם את קצה פיפטה 5 מיליליטר קרוב יותר לתחתית הצינור חרוט עם כל מחזור של trituration כך הקצה נוגע בתחתית הצינור במשך 2 המחזורים האחרונים.
6. צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. הסר את supernatant ו pipette גלולה למעלה ולמטה 10x ב 3 מ"ל של הפתרון מעכב לשטוף / פרוטאז.
7. בזהירות שכבה נפח שווה של ההשעיה על כל אחד 5 מ"ל פתרונות הדרגתיים רציפים (צינורות 3-6), עם pipettor להגדיר במהירות "כוח הכבידה".
8. מניחים את הצינורות בצנטריפוגה המצוידת ברוטור מתנדנד, כאשר מהירות ההאצה מצטמצמת להגדרה הנמוכה ביותר והבלם כבוי. צנטריפוגה ב 76 x גרם במשך 12 דקות בטמפרטורת החדר. עם הבלם כבוי, צנטריפוגה הושלמה בדרך כלל לאחר 20 דקות.
9. הסר את supernatant, resuspend ולשלב כל גלולה ב 5 מ"ל של פתרון מלח מאוזן סטרילי ומניחים את התאים על קרח.
10. הסר חלק (10-100 μl) של השעיית התא ולקבוע את הצפיפות של תאים קיימא על ידי הדרה כחול trypan עם המוציטרומטר.
11. צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות. הסר את supernatant ו resuspend גלולת התא בצפיפות של 25,000-125,000 תאים קיימא לכל μl.
12. להעביר נפח הולם של השעיית התא לצינור microcentrifuge 200 μl (צינור PCR) ומניחים על קרח.

2. הכנת אתר כירורגי ומכשירים

שים לב: כפפות כירורגיות סטריליות משוחק במהלך ההליך. בהתאם לדרישות של כל מוסד, שמלות כירורגיות, כובעים ושומרי פנים עשויים להידרש.

1. הכינו ספסל מחוטא לניתוח מכרסמים עם אזורים סמוכים מופרדים להכנת בעלי חיים, שדה הפעלה והתאוששות בעלי חיים.
2. לעקר מכשירים כירורגיים במובלעת קיטור. לאחר מכן, השתמש מעקר חרוז חם כדי להבהב-לעקר מכשירים בעת מעבר מבעל חיים אחד כפוף הבא.

3. אינדוקציה, הרדמה ומשככי כאבים

שים לב: ניתוחים העולים על 15 דקות מהרגע שהעכברים מורדמים דורשים מקור חום מגע. כדי למנוע היפותרמיה, העכברים מסופקים עם מקור חום (שמיכת מים חמים במחזור) בתקופות שלפני ואחרי הניתוח.

1. הכן קוקטייל קטמין /xylazine להרדמה אינדוקציה כך שכל עכבר מקבל קטמין 100 מ"ג / קילוגרם ו xylazine 10 מ"ג / קילוגרם על ידי הזרקת 10 μl של קוקטייל לכל גרם של משקל גוף.
2. שולחן 1. קוקטייל הרדמה.

   	ריכוז מלאי	אמצעי אחסון להתכונן אליו
   		עכבר אחד	חמישה עכברים	עשרה עכברים
   קטמין (קטמין)	100 מ"ג/מ"ל	25 מיקרול	125 מיקרול	250 מיקרול
   קסילאצין (1991)	100 מ"ג/מ"ל	2.5 מיקרול	12.5 מיקרול	25 מיקרול
   תמיסת מלח איזוטונית		223 מיקרול	1,113 מיקרול	2,225 מיקרול
   סך		250 אול	1,250 מיקרול	2,500 מיקרול

3. הכן פתרון ketoprofen עבור משככי כאבים על ידי דילול פתרון המניה (10 מ"ג / מיליליטר) 1:20 במים סטריליים, ללא פיוג'ן כך שכל עכבר מקבל מנה של 5 מ"ג / קילוגרם על ידי הזרקת 10 μl של הפתרון לכל גרם של משקל גוף.
4. לשקול ולתעד משקל טרום כירורגי. משקלי עכבר בודדים משתנים, אך בדרך כלל נעים בין 18-22 גרם.
5. להזריק 10 μl של קוקטייל קטמין / xylazine לכל גרם של משקל גוף העכבר לתוך החלל תוך-פריטוני עם מזרק אינסולין. לדוגמה, להזריק 200 μl עבור עכבר 20 גרם.
6. קבע אם העכבר מורדם לחלוטין על-ידי קמצוץ בוהן של הרגל האחורית. בדרך כלל לוקח 3-5 דקות עד שהעכבר כבר לא נסוג מהצביטה.
7. להזריק 10 μl של פתרון ketoprofen לכל גרם של משקל גוף העכבר תת עורית בעור רופף של האגף עם מזרק אינסולין. לדוגמה, להזריק 200 μl עבור עכבר 20 גרם.
8. לגלח את השיער על הגולגולת עם קוצץ, לשפשף את הקרקפת החשופה עם povidone-יוד באמצעות אפליקטור קצה כותנה ולאחר מכן לנגב כרית אלכוהול. חזור על צעדים אלה, לשפשף povidone-יוד ולנגב אלכוהול, פעמיים נוספות.
9. החל משחה עיניים על העיניים של העכבר.
10. הפוך חתך קו האמצע 1 ס"מ המשתרע מאחורי האוזניים רק מול העיניים עם להב אזמל סטרילי.
11. הנח את העכבר תחת טווח ניתוח וחשוף את הגולגולת כדי לזהות את קווי התפירה. באמצעות תנועות מעגליות עם מקדחה, מרכז חור בר 2.5 מ"מ לרוחב ל bregma ו 1 מ"מ אחורי לתפר קורנל.

4. השתלה תוך נדרית

שים לב: נפחי הזרקה העולים על 2.5 μl עלולים להיות קטלניים לעכברים.

1. מקם את העכבר על מסגרת סטראוטקטית על-ידי חיבור החותכות העליונות מעל מוט החותך והחלת מלחצי האף כך שהגולגולת מוחזקת היטב בתנוחה נייטרלית.
2. לצייר 5-10 μl של התאים בצינור microcentrifuge למעלה ולמטה מספר פעמים לתוך מזרק המילטון 10 μl מהודק במחזיק הבדיקה של מניפולטור סטריאוטקטי לערבב את ההשעיה ולחסל בועות. לדכא את הכוכנה, כך המזרק טעון עם 2 μl (נפח מספיק כדי להזריק בעל חיים אחד).
3. משוך את הקצה לרוחב של חתך העור כדי לחשוף את חור בר, עם micromanipulator, להציג את המחט לתוך חור בר, כך החלק משופע הוא ממש מתחת לפני השטח של הגולגולת.
   1. קדם את המחט 3 מ"מ ולאחר מכן למשוך את המחט 0.5 מ"מ כדי ליצור מקום להזרקה.
   2. לקדם את הכוען לאט מעל 30 שניות ולאחר מכן לאפשר את המחט להישאר במוח במשך 2 דקות נוספות. משוך את המחט בהדרגה על ידי עלייה של 0.5 מ"מ ומחכה 30 שניות נוספות לפני הסרת המחט מהמוח.
4. הסר את העכבר מהמסגרת הסטריאוטקטית וסגור את הפצע עם תמונה אוטומטית.
5. מניחים את העכבר על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ולפקח ברציפות על דפוס הנשימה והצבע של קרום רירי ורקמות חשופות (כפות הרגליים).
6. מניחים את העכבר בכלוב מיקרוסולטור סטרילי ברגע שהוא מתאושש באופן מלא מהרדמה (עצם החזה ואמבולטוריום), ולהחזיר אותו למתקן דיור בעלי חיים.

5. טיפול ותצפית בבעלי חיים לאחר ההשתלה

שים לב: האינדיקציה האמינה ביותר של תחריט הגידול וצמיחה הסתננות היא הדרגתית, ירידה במשקל מתמשכת מלווה בפיתוח של יציבה רכון ומעיל שיער מחוספס. במקרים נדירים, גירעונות נוירולוגיים מצוינים הכוללים אטקסיה, paresis, והתקפים. קסנוגרפטים ראשוניים אורתוטופיים הם פולשניים מאוד ומתפתחים לאורך תקופה ארוכה של זמן. עכברים בדרך כלל להתבטא סימפטומים של גידול 3-6 חודשים לאחר ההשתלה.

1. שימו לב לעכברים עם קסנוגרפטים אורתוטופיים מדי יום לצריכת מזון ומים, התנהגות, טיפוח וסימני זיהום באתר החתך.
2. יש לתת קטופרופן (5 מ"ג/ק"ג תת עורית, 1-2x ביום) במקרה של כאב או מצוקה לאחר הניתוח.
3. הסר autoclips 8-10 ימים לאחר הניתוח.
4. לשקול עכברים מדי שבוע.
5. לפקח על סימנים ותסמינים של תחריט הגידול.

6. קצירת גידולים

שים לב: בשיטה זו, פרוסת הקורונל הראשונה (#1) מכילה את ההיבט האחורי של נורות הריח ואת ההיבט הקדמי של האונות הקדמיות. גידול חרוט הוא הנפוץ ביותר בחצי הכדור הימני של 3 פרוסות קורנל הבאות (פרוסות #2, #3 #4) ומראה ההזרקה כלול באופן שגרתי בפרוסת קורנל #3. בהתאם לצרכים ניסיוניים, החומר עשוי לשמש למעבר גידולים, מקטעי רקמות קפואות, מקטעי רקמות משובצות פרפין קבועות פורמלין, ציטומטריית זרימה של רקמה מנותקת, תרבית תאים או ליסטים לניתוח DNA, RNA או חלבון. חלקים של הגידול עשוי להיות cryopreserved לצרכים עתידיים עם הכדאיות התא החל 80-95%.

1. המתת חסד עכברים על ידי חשיפה ממושכת לפחמן דו חמצני ואחריו נקע בצוואר הרחם.
2. ערפו את ראשם של עכברים מורדמים בבסיס המוח (רמת מגנום קדמי) עם זוג גדול יותר של מספריים כירורגיים, ומשוך את העור מחתך קדימה כדי לחשוף את הגולגולת במלואה.
3. הסר את המוח.
   1. הכנס קצה אחד של זוג מספריים כירורגיים עדינים להיבט הצדדי של מגנום הפורמן לרמה של בשר השמיעה החיצוני השמאלי כדי לחתוך את עצם העורף לאורך הצד השמאלי של הגולגולת. בצע את אותו חתך בצד ימין.
   2. חותכים את עצם העורף לאורך מישור קורנל מבשר שמיעתי חיצוני אחד לשני ומסירים את העצם כדי לחשוף את המוח הקטן.
   3. חותכים את צלחות עצם האף בין העיניים.
   4. חותכים את התפר הסגיטלי על ידי חיתוך אחורי לאורך התפר הסגיטלי מצלחות עצם האף אל bregma. להשלים את החתך קו האמצע לאורך תפר קשת על ידי חיתוך לפני הלמבדה אל bregma.
   5. בזהירות להכניס את הקצה של זוג דק של מלקחיים לאורך פתח sagittal מכל צד לקרוע כל הידבקות dural של הגולגולת למוח ולאחר מכן לקלף את שני חצאי הגולגולת לרוחב כדי לחשוף את המוח ואת נורות חוש הריח dorsally.
   6. החלק את המלקחיים בין ההיבט הגחוני של נורות הריח והגולגולת כדי לשחרר את כל ההידבקויות.
   7. הטה את הגולגולת לאחור כדי לאפשר למוח לחזור בו, כך עצבי הראייה ועצבי גולגולת אחרים נחשפים. לנתק את עצבי הגולגולת כדי לשחרר את המוח לתוך צלחת המכילה PBS סטרילי.
4. מעבירים את המוח עם מרית במשקל לפרוסת מטריצה ויוצרים פרוסות קורנל 2 מ"מ עם סכיני גילוח.
5. מסדרים את פרוסות הקורונל בצלחת המכילה PBS סטרילי לבדיקה ויזואלית נוספת ועיבוד רקמות נוסף.

7. הקפאה של גידולים

1. הכן פתרון מלאי של מדיום cryopreservation.
   1. הוסף 50 מ"ל של תוסף התפשטות, 5 מ"ל של 100x פניצילין ותמיסת סטרפטומיצין, ו 450 μl של 0.2% הפרין ל 450 מ"ל של בינוני בסיסי.
   2. יש לאחסן את הפתרון במלאי ב-4°C מוגן מפני אור.
2. הכן פתרון עבודה של מדיום cryopreservation.
   1. ערבבו 47.5 מ"ל של מדיום קריו-שימור ו-2.5 מ"ל של DMSO סטרילי בצינור חרוט פוליפרופילן של 50 מ"ל ומערבבים היטב.
   2. Aliquot 1.0 מ"ל של פתרון עבודה לכל cryovial ולאחסן ב 4 מעלות צלזיוס מוגן מפני אור.
3. מניחים פרוסת קורונל אחת 2 מ"מ של מוח קסנוגרפט לתוך cryovial המכיל מדיום cryopreservation על קרח.
4. מכסים בחוזקה את הבקבוקון ומניחים אותו במיכל מקפיא ב -80 מעלות צלזיוס. מעבירים את ההקפאה למחרת למיכל חנקן נוזלי לאחסון ארוך יותר.

תוצאות

תאי גליומה מנותקים מושתלים ישירות במוחם של עכברים חיסוניים כדי להשיג קווי קסנוגרפט אורתוטופיים ראשוניים. כל דגימת גידול מוקצית מספר אקראי לפני ההשתלה, כחלק מתהליך deidentification כדי להסיר מידע בריאותי מוגן. אנו משתמשים במספר מסד נתונים REDcap בן 5 ספרות למטרה זו. איור 1 ממחיש את התהליך ואת המינוח ליצירת קו קסנוגרפט מגליבלסטומה (GBM 17182) עם מוטציה isocitrate dehydrogenase 1 (IDH1) מוטציה ארגינין 132 להיסטידין (R132H). לאחר ההשתלה נוסף "X" למספר זיהוי הגידול כדי לציין גידול xenografted, ואחריו "P" כדי ...

דיון

קווי תאים מתורבתים, קסנוגרפטים ועכברים מהונדסים גנטית הם השיטות הנפוצות ביותר למידול גליומות, ויש יתרונות ומגבלות ברורים עבור כל מערכת מודל^3,13,14. היתרונות הרלוונטיים של גליומה אורתוטופית ראשונית xenografts כוללים צמיחה חדירה המאפיין גליומות מפוזרות ושמירה על שינויים גנטיים ומנגנוני איתות חשובים שיכולים להיות קשים מאוד לתחזוקה בתאי גליומה מתורבתים. לדוגמה, אניsocitrate דהידרוגנאז מוטציות וייצור ליגנד קיפוד סוניק ניתן לשמור על קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים^15,16 אבל רק לעתים רחוקות בתאי גל...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
פוספט חוצץ	מלח Life Technologies	14040-133
מערכת דיסוציאציה פפאין	Worthington Biochemical Corp.
תמיסה כחולה טריפאן 0.4%	Life Technologies	15250061
קטמין הידרוכלוריד	מתקבל מבית מרקחת מוסדי או מחברת
קסילזין HCl
קטופרופן
משחת עיניים
Povidone-iodine	Fisher Scientific	190061617
מדיום לשימור בהקפאה ותוסף התפשטות	StemCell Technologies	05751
0.2% מלח נתרן הפרין ב-PBS	StemCell Technologies	07980 <	p>
פניצילין-סטרפטומיצין	Life Technologies	15140-122
dimethyl sulfoxide	Sigma-Aldrich	D6250-5X10ML
NOD. Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice	מעבדת ג'קסון	005557	NSG mice
נוגדן וימנטין אנטי-אנושי	Dako	M7020	השתמש ב-1:200 עד 1:800
< p>נוגדן IDH1 R132H אנטי אנושי	Dianova	DIA-H09	השתמש ב-1:100 עד 1:400
צנטריפוגה עם רוטור דלי מתנדנד
<> p>
המוציטומטר חד פעמי	פישר סיינטיפיק	22-600-100
כפפות כירורגיות סטריליות	Fisher Scientific	11-388128
חלוק חד פעמי	Fisher Scientific	18-567<>
Surgical מסכה	פישר סיינטיפיק	19-120-1256
מזרק טוברקולין	BD	p>305620<>
רפידות אלכוהול	פישר סיינטיפיק	22-246-073
משקל אלקטרוני נייד	פישר Scientific	01-919-33
סטריאומיקרוסקופ זום
קוצץ כירורגי	Stoelting	51465	p>
ידית אזמל	Fine Science Tools	10003-12
להבי אזמל, #10
מכשיר סטריאוטקסי	Stoelting	51730	>
מקדחה במהירות גבוהה	Stoelting	51449
מקדחה, 0.6 מ"מ	סטולטינג	514552
מזרק המילטון	המילטון	80336
אוטוקליפ, 9 מ"מ	BD	427630
משטח חימום מים במחזור	קנט סיינטיפיק	TP-700 TP-1215EA
מעקר יבש חרוזים חמים	Kent Scientific	INS300850
מספריים כירורגיים	Fine Science Tools	14101-14
מספריים עדינים	Fine Science Tools	14094-11
מספריים קפיציים	כלי מדע עדין	15018-10	>
Dumont מלקחיים	Fine Science Tools	11251-30	>
מרית סמי-מיקרו	Fisher Scientific	14374
מטריצת פורס מוח של עכבר	Zivic Instruments	BSMAS002-1
בקבוקוני אחסון קריוגניים	Fisher Scientific	12-567-501

LK003150אספקה וטרינרית מקומית<