Introduction
Выяснение событий, лежащих в основе сердечной ответ на оба ишемии и реперфузии имеют важное значение в улучшении лечения инфаркта миокарда и сердечной 1 хирургических процедур, которые требуют пережатия аорты 2. В то время как модели в естественных условиях ишемии реперфузионного повреждения позволяют очень полезный анализ конечной точки, они не столь эффективны для изучения функциональных последствий ишемии реперфузионного повреждения остро в режиме реального времени. Кроме того, в естественных условиях модели ишемии реперфузии обычно производят значительное изменчивость размера инфаркта, и прямые поставки препарата к сердцу во время реперфузии является сложной задачей. Использование сердечного системы Лангендорфа изолированы для изучения ишемии реперфузии позволяет в реальном времени функциональной оценки фармакологической терапии, равномерной площади инфаркта ткани и мгновенной доставки лекарственного средства непосредственно к миокарду.
Впервые описан бу Оскара Лангендорфа в 1895 3, Лангендорфа изолированные сердце надежный моделью для изучения ишемии реперфузии, что оно использовалось в ишемии реперфузии исследований за последние 40 лет 4,5. Вот некоторые изменения сделаны для оптимизации изолированного сердца для функционального анализа. В месте пункции аорты, а сердце бьется гарантирует, что сердце не испытывать ишемический предварительной подготовки, которая бы изменить результаты ишемии реперфузии испытаний 6. Чтобы облегчить это, трахеотомия выполняется, позволяя вентиляции и обеспечения физиологической стабильности крысы во время операции. Сердце затем прикрепляется к водяной рубашкой спиральной стеклянную колонку, через которую Кребса Хенселейта буфер доставляется по ретроградной перфузии непосредственно в аорту. Солевой раствор на баллон, заполненный вставлен в левый желудочек и прикреплен к датчику давления, который позволяет в режиме реального времени измерения давления внутри желудочка ANд расчет нескольких функциональных параметров. По завершении эксперимента, сердца промывают холодной солевой раствор, чтобы задержать сжатие и мгновенно замораживали в жидком азоте, чтобы позволить потоку анализ ДНК, РНК и белка уровней. Таким образом изменен, Лангендорфа перфузии сердца служит эффективной системы прямого мониторинга физиологического эффекта фармакологических вмешательств в любое время остро во время ишемии реперфузии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры, перечисленные здесь были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных в институциональная в Медицинском университете Южной Каролины. Эксперименты, описанные здесь, являются острые, эксперименты, не выживания. Таким образом, нет никакой пользы глазной мази и стерильные операционные люкс не требуется. Эвтаназии достигается путем обескровливания при уборке сердца.
1. Экспериментальная Подготовка
- Установите или постоянное давление или постоянная потока Лангендорфа перфузии устройства 4.
- Подготовьте 4 л модифицированного Krebs Хенселейта буфера (в мм: 112 NaCl, 5 KCl, 1,2 MgSO 4, 1 K 2 HPO 4, 1,25 CaCl 2, 25 NaHCO 3, 11 D-глюкозы, 0,2 октановой кислоты, рН = 7,4).
- Сделать 10x акции буферов.
- Растворите NaCl, KCl, MgSO4 и K 2 HPO 4 в 3 л воды высшей степени очистки.
- Растворите CaCl 2 в 500 мл сверхчистой воды Wiго по 40 мл 1 н HCl.
- Медленно добавить раствор CaCl 2 в буфер, сделанные в 1.2.1.1. Добавьте достаточно сверхчистой воды с всего 4 L. Разрешить перемешивают в течение 1 ч перед фильтрацией через фильтр 0,8 мкм. Хранить при 4 ° С.
- Растворите NaHCO 3 в 4 л воды высшей степени очистки. Разрешить перемешивают в течение 1 ч перед фильтрацией через 0,8 мкм фильтр. Хранить при 4 ° С
- Комбинат 400 мл 10x Кребса Henseleit буфер 400 мл 10x NaHCO 3 буфера. Добавьте достаточно воды, чтобы сверхчистого Всего 4 L. Растворите глюкозу и кислоты октановую при перемешивании. Фильтр по 0,8 мкм фильтр.
- Сделать 10x акции буферов.
- Подготовка системы к сердцу.
- Добавить 2 л фильтрованной буфером до 4 л бутылки помещают в 38 над запорным краном, прикрепленной к аорты канюли. Это обеспечит давление перфузии 70-80 мм рт.ст. к сердцу, что рекомендованное давление перфузии 4.
- Вставка для диспергирования газа барботер в буфер в бутылке.
- Запуск буфер через систему, будучи уверенным, чтобы устранить любые пузыри изнутри трубы.
- Включите газа (95% O 2/5% CO 2) по крайней мере, за 30 мин до сердца должен быть размещен в системе. Используйте зонд потока газа и газоанализатор крови, чтобы проверить насыщение кислородом.
- Подготовка хирургические материалы и воздушный шар.
- Для уборки сердца, подготовить одну пару 6,75 "хирургическими ножницами, одну пару 4,5" ножницы, две пары кровоостанавливающих, два набора щипцов, карамельный Два шприцы с иглами 27 G, 2 части 0-GUAGE шелковой нити (около 15 см в длину), один 1/16 дюйма колючей канюли, и один трахеи канюли.
- Чтобы собрать трахеи канюли, клей короткий кусок 1/16 дюйма диаметр пластиковой трубки к Y-разъем.
- Чтобы собрать шар аппарат: приложите через зонд иглу с куском 1/16 дюйма трубки, затем приложите трубку к корпусу датчика давления. Небольшой шприц прикреплен к другой стороне TR давленияansducer жилья позволит инфляции и дефляции баллона.
- Вырезать квадрат полиэтиленовой пленкой и место кончике иглы через зонд в центре. Оберните полиэтиленовой пленкой вокруг зондового иглы.
- Заполните шар с физиологическим раствором и галстук с двумя швами. Накачать шар, чтобы убедиться в отсутствии утечек. Объем физиологического раствора в надутого воздушного шара должно быть около 200 мкл, но может варьироваться в зависимости от размера крысы.
- Кроме того, используйте латекс палец кроватки в месте пластиковой пленкой. Поместите иглу через зонд в палец кроватки, залейте раствором и галстук.
2. Урожай сердце
- Задержите крысу Спрэг Dawley, используя decapicone или другое устройство ручной сдержанность. Взвесьте крысы.
- Администрирование кетамин / ксилазин смеси (0,85 мг / кг кетамина и 0,15 мг / кг ксилазина) с помощью внутрибрюшинной инъекции для анестезии крыс. Эта доза анестетика обеспечит достаточные для анестезии20-40 мин, но процедура должна быть завершена как можно быстрее после анестезии подтверждается.
- Подтвердите должной степени анестезии путем тестирования пальца щепоткой рефлекса.
- Трахеотомия
- Удалить шкуру с середины передней лапы до основания челюсти, используя кровоостанавливающих поднять шкуру и ножницы, чтобы сделать разрез. Держите шкурку повышенной отделить его от основной мышцы, позволяя сократить по шкуре и снимите его.
- Использование кровоостанавливающих, поднимите железистой ткани и сделать горизонтальный разрез в фасции уступает железистой ткани. Используйте кровоостанавливающих распространяться разрез открытым, стараясь не ник яремной вены.
- Использование кровоостанавливающих, щепотка мышцы вышележащих трахеи и с помощью ножниц сделать поперечный разрез в мышце чуть ниже кончика кровоостанавливающих. Использование кровоостанавливающих, распространение ткань на части, чтобы раскрыть трахеи.
- Осторожно вставьте кровоостанавливающих под трахеи, очистка фасции, а прогрессирует, осторожно вперед и втягивания кровоостанавливающих.
- После кровоостанавливающих успешно размещены позади трахеи, щепотка 0-0 шелковый шов с кровоостанавливающих и hemisect трахеи с небольшим, острой парой ножниц.
- Вставьте трахеи канюли в трахее hemisected, тянуть нить за трахеи и связать нить вокруг канюлированного трахеи, закрепления шва в Y-пах канюли с хирургами узел.
- С помощью иглы 27 G, вводят 1000 ЕД / кг гепарина в яремную вену и позволяют распространить в течение 30 сек.
- Торакотомия
- Удалить шкуру с середины живота к середине передней лапы области, зажимая с кровоостанавливающих и резки с ножницами.
- Сделайте ¾ дюйма поперечный разрез в брюшной стенке мышечной, чуть ниже диафрагмы.
- Сделайте вертикальный разрез до брюшной стенки и грудной стенки, резки вдоль грудины.
- Вырезать диафрагму назад на двусторонней основе, затем распространилась грудную клетку, чтобы выявить сердце, зажим грудную клетку с кровоостанавливающих чтобы убедиться, что он остается распространение. Использование кровоостанавливающих, аккуратно удалите тимус, обнажая восходящую аорту.
- Дразнить кровоостанавливающих через аорты петли, продвижении и втягивания кровоостанавливающих и осторожно распространяя фасции, чтобы кончик кровоостанавливающих через.
- Используйте кровоостанавливающих тянуть 0-0 шелковый шов за восходящей аорты, галстук шов в свободную половину квадратных узла.
- Поверните кран, чтобы начать поток перфузии буфера, hemisect аорты и сразу вставить канюли в просвет аорты. Быстро подпруга половину квадратных узел и завершить узел, затянув тщательно.
- Используйте ножницы, чтобы рассекать сердце от больших сосудов, удалить сердце из груди и приложить к колонке перфузии.
- Обрезать излишки ткани легких и позволить, чтобы уравновесить сердца на колонке в течение 15 мин до введения баллона. Использование нормальную скорость потока буфера через сердце 10-20 мл / мин.
3. Лангендорфа перфузии и ишемии реперфузии
- Размещение предварительно LVssure шар
- Выпустите шарик при прокатке в форме конуса и повернуть кран, чтобы обеспечить воздушный шар остается спущенный.
- Акцизный левого предсердия с небольшим ножницами, чтобы разоблачить доступ к митрального клапана.
- Вставьте шар через левое предсердие и митрального клапана в левый желудочек.
- Начните программное обеспечение для мониторинга давления (LabChart Pro).
- Накачать шар, открыв кран и аккуратно увеличивая количество физиологического раствора в воздушном шаре, пока диастолическое давление чтение микроманометром больше нуля.
- Чтобы проверить реакцию длины натяжения, надуть воздушный шар медленно диастолического давления 75 мм рт.ст., выкачать медленно, повторяю еще.
- Установка диастолическое давление до 10 мм ртутного столба, модулируя количество физиологического раствора в баллоне. Поверните кран, чтобы запечатать воздушный шар на этом уровне инфляции, и поддерживать систему замкнутого давления между ЛЖ и воздушном шаре датчика давления.
- Нижняя сердце в нагретую камеру и крышкой камеры с пластиком.
- Объявлениеслужение ишемии реперфузии
- Вставьте нижнюю часть нагретой камере и позволяет камере, чтобы заполнить буфер изливаемой.
- Когда буфер погружен сердце, включите кран, чтобы остановить поток буфера в сердце, вызывая глобальное ишемии. Время ишемии может варьироваться в зависимости от целей эксперимента.
- Через 30 мин ишемии, повернуть кран, чтобы восстановить поток буфера в сердце, начала реперфузии.
- Разрешить реперфузии сердца в течение 1 ч до прекращения эксперимента. Используйте переменные раз реперфузии, в зависимости от целей эксперимента.
- Прекращение эксперимента и сбор урожая ткани
- Использование боковой порт краном, администрирование 10 мл фосфатно-буферного раствора при 4 ° С в сердце со скоростью 10 мл / мин, чтобы остановить сердце.
- Удалить сердце из колонки перфузии, обрежьте остальные предсердия ткани.
- Поместите сердце в нержавеющей стали ткани нарезки матрицы, накрыть Паrafilm, и место при -80 ° С в течение 8 мин, или пока сердце имеет консистенцию зефира, как.
- Удалить блок из морозильника и вставьте бритвы в матрицу нарезки нарезать сердце в 2 ломтика мм. Тканевые блоки также могут быть приобретены с другими, чем 2 мм размеров срезов.
- Удалить ломтиками по одному и падение в жидкий азот, чтобы заморозить мигать для биохимических исследований. Сохранение третий желудочка ломтик от вершины для окрашивания инфаркта.
- Удалите ткань из жидкого азота и хранят при -80 ° С до использования в биохимических экспериментов.
- Инфаркт Окрашивание
- Инкубируйте третий кусочек желудочка в 10 мл 1% вес / объем хлорида трифенилтетразолинхлорида (TTC) при 37 ° С в течение 15 мин.
Примечание: Инкубационный в ТТС может быть выполнена в течение 15 или 30 мин без изменения эффективности 15. - Передача ткани кусочек от TTC до 10% забуференном формалине и позволяют инкубировать при комнатной температуре в течение ночи. Для получения оптимальных результатов, слышатьTS должны быть вывезены из формалина и отображаемого в течение 24 часов 4.
- Фотография окрашенных кусочек и использование программного обеспечения, таких, как ImageJ оценить размер инфаркта в соответствии с протоколом производителя. Фотографировать, как можно скорее после фиксации, а краска будет исчезать с течением времени.
- Инкубируйте третий кусочек желудочка в 10 мл 1% вес / объем хлорида трифенилтетразолинхлорида (TTC) при 37 ° С в течение 15 мин.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Желудочка баллон аппарат левой позволяет мониторинга в режиме реального времени в разработанной заказчиком левого желудочка (рис 1) давления. Как описано выше 7, это давление трассировки может быть использован для вычисления многих параметров функции левого желудочка. Эти расчеты могут быть сделаны в базовой фазе, а также на этапе реперфузии, усредненное по несколько следов в каждой группе, и по сравнению с тем, чтобы определить, приводит ли фармакологическое вмешательство в сердечной предварительной подготовки, как мы сделали ранее 9. Одним из таких параметров является достигаемое давление, вычисляется как разность между систолическим давлением и давлением в конце диастолической. Достигаемое давление в нормальных перфузируемые сердцах крыс может варьироваться от 70 до 130 мм рт.ст. (рис 1А). После ишемического инсульта, достигаемое давление снижается и конечного диастолического давления (возвышает Рисунок 1B). Когда крысывводить известный предобусловливания агент, такой как класс I и IIb ингибитора HDAC (SAHA) Vorinostat 18 до вырезания сердце, снижение давления и развитой повышение конечного диастолического давления, связанного с ишемии реперфузии ослабляются (рис 1c). Другие меры функции левого желудочка, такие как скорость генерации давления (DP / DT макс), скорость релаксации давления (-dP / д макс), и давление продукта ставка (РПП) могут быть непосредственно получены или рассчитаны из Выход программного обеспечения (Рисунок 2). Ишемическая фаза также может контролироваться в режиме реального времени, с явной прекращения генерации давления в течение нескольких минут после начала ишемии. Ишемическая сокращение также может контролироваться путем измерения времени начала сокращения и время до пиковой сокращение.
Трифенилтетразолинхлорида хлорид (ТТС) обычно используется для различения метаболическиCTIVE и неактивные ткани, и используется здесь для окрашивания инфаркта. После того, как всасывается в ткани ТТС уменьшается на метаболических ферментов, превращая активную тканей в красный цвет. Неактивные ткань не снизить TTC, и, таким образом окрасит белый 8. Лангендорфа перфузии сердца крыс, которые не подвергались ишемического повреждения не показывают каких-либо белые области (не показаны), в то время как сердца подвергается ишемии реперфузии шоу существенных областях, окрашенных белой, указывая инфарктом ткани (рис 3).
Рисунок 1: Типичные следы давления от левого желудочка баллон давления записанного шара LV при сжатии желудочков.. Сердца не подвергнутые ишемии (А) испытывать незначительные потери сократительной способности со временем. Сердца, подвергнутые ишемии (В) показаны IMMEDIate потери поколения давлении, затем тоническое сокращение. По реперфузии, эти сердца испытывают повышенный EDP и снижение разработана давление. Сердца предобуславливания с САХА и подвергнутые ишемии (С) показывают ослабление ишемии реперфузии. N = 1 на группу.
Рисунок 2: Расчетные параметры функции желудочков скорость генерации давления (A), скорость релаксации давления (B), разработан давления (С), и давление продукта Скорость (D) являются некоторые параметры функции левого желудочка, которые могут быть вычислены из. программное обеспечение для мониторинга давления.
Рисунок 3: окрашивание TTC для инфаркта области.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Изолированных перфузии сердца крысы могут быть успешно использованы для изучения влияния фармакологического вмешательства на сердечную предварительной ишемии реперфузии 9. Тем не менее, существуют некоторые существенные шаги по процедуре, которые должны быть стандартизированы, чтобы обеспечить воспроизводимые результаты. Поддержание температуры 37,4 ° C в системе является критическим, так как даже гипотермию и гипертермии может привести к остановке предварительной подготовки 10,11. Общее время, которое проходит от инъекции анестезирующего средства к удалению сердца должны быть сведены к минимуму, так как длительное воздействие кетамина может помешать сердечной предварительной 12. Своевременное катетеризации аорты в месте имеет важное значение для предупреждения развития гипоксии в сердце или обескровливания животного перед удалением сердца. Габаритные, время от первого разреза до удаления сердца должны быть не длиннее 6-8 мин. Левого желудочка баlloon должны быть проверены на герметичность перед каждым экспериментом, и при необходимости заменять. Система должна быть тщательно поддерживается, в том числе промывки всего устройства с дистиллированной водой после каждого запуска и замены изношенных труб по мере необходимости, чтобы предотвратить утечку или загрязнение внутренней части трубки.
Изолированного сердца может быть изменен на любое количество новых применений, в том числе изображений флуоресценции 13, ЯМР-спектроскопии и 7 оптического отображения 14 и многие другие. Система также может быть изменен, чтобы заливать сердца от различных животных, в том числе мышей. Эта модификация особенно полезно, так как позволяет для экспериментов с использованием трансгенных мышей. Чтобы изменить систему сердца, мыши меньшей канюли и меньшей колонке перфузии должны использоваться, в дополнение к других модификаций. Подробные описания, как использовать метод Langendorff для мыши сердцах были опубликованы в другом месте 16,17. Другие модификацииэтот протокол включают введение различных препаратов в различные моменты времени. При исследовании способности препарата вызывать фармакологический предварительной подготовки или пост-кондиционирования, важно принимать препарат в различные моменты времени по отношению к ишемии реперфузии. Препарат можно вводить животному, прежде чем сердце вырезали, или в смеси в буфер либо до сердца помещают на колонку или в течение ишемической фазы, так что лекарственное средство присутствует при реперфузии. Кроме того, сторона-порт может быть использован для введения болюса лекарственного средства в любой момент времени во время протокола. Кроме того, протокол может быть изменен, чтобы изменить длительность ишемии, реперфузии, или обоих. Это позволяет проводить анализ функциональных и биохимических данных в различные моменты времени и может быть использован для отслеживания временной ход острый эффект препарата. Если период реперфузии изменяется, важно отметить, что, по крайней мере 60 минут реперфузии в neceмируется необходимый для окрашивания TTC эффективно разграничить инфаркта область 15.
Основным ограничением модели изолированного сердца в плане ишемии реперфузии, что он не учитывает многие из системных факторов, которые присутствуют в условиях ишемии реперфузии в естественных условиях. Это устранение системного влияния необходимо учитывать при анализе данных, полученных с помощью модели Langendorff, но не исключает возможности модели, чтобы ответить на новые вопросы ответ миоцитов, фибробластов и эндотелиальных клеток к ишемии и последующей реперфузии. Изолированных модель сердца позволяет полностью манипуляции многие из факторов, влияющих на ишемию реперфузионного повреждения в дополнение к реальному времени анализа функциональных эффектов на сердце более короткие промежутки времени. Данные, полученные с помощью изолированной системы сердца неоценима в понимании фармакологической предварительной подготовки или пост-кондиционированиясердце в ответ на различные фармацевтические вмешательства.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Эта публикация была поддержана Южная Каролина Клиническая и трансляционных исследований (SCTR) института с академической дома в Медицинском университете Южной Каролины, NIH / NCATS Грант Количество UL1 TR000062. Дальнейшая поддержка была предоставлена В.А. заслуга премии BX002327-01 к DRM. DJH поддержали NIH / NCATS Грант Количество TL1 TR000061 и NIH Grant Номер T32 GM008716. СЭО поддержали NIH Grant Номер T32 HL07260.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Potassium Chloride | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Magnesium Sulfate | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Potassium Phosphate Dibasic | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Calcium Chloride Dihydrate | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-Glucose | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Octanoic Acid | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Medical Pressure Transducer | MEMSCAP | SP844 | |
| Masterflex Peristaltic Pump | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Masterflex Easy Load Pump Head | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Heated circulating water bath | Lauda | M3 | |
| Tubing Flow Module | Transonic | TS410 | |
| Modular Research Console | Transonic | T402 | |
| Inline flow sensor | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Data Acquisition Device | AD Instruments | PL3508 | |
| LabChart data acquisition software | AD Instruments | MLU60/8 |
References
- Bainey, K. R., Armstrong, P. W. Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction. American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).
- Beyersdorf, F. The use of controlled reperfusion strategies in cardiac surgery to minimize ischaemia/reperfusion damage. Cardiovascular Research. 83 (2), 262-268 (2009).
- Langendorff, O.
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
- Tyers, G. F., Todd, G. J., Neely, J. R., Waldhausen, J. A. The mechanism of myocardial protection from ischemic arrest by intracoronary tetrodotoxin administration. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 69 (2), 190-195 (1975).
- Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. Preconditioning with ischemia: A delay of lethal cell injury in ischemic myocardium. Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).
- Kolwicz, S. C., Tian, R. Assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31P NMR spectroscopy. The Journal of Visualized Experiments. (42), (2010).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: Validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. American Heart Journal. 101 (5), 593-600 (1981).
- Aune, S. E., Herr, D. J., Mani, S. K., Menick, D. R. Selective inhibition of class I but not class IIb histone deacetylases exerts cardiac protection from ischemia reperfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 138-145 (2014).
- Yellon, D. M., et al. The protective role of heat stress in the ischaemic and reperfused rabbit myocardium. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 24 (8), 895-907 (1992).
- Khaliulin, I., et al. Temperature preconditioning of isolated rat hearts--a potent cardioprotective mechanism involving a reduction in oxidative stress and inhibition of the mitochondrial permeability transition pore. The Journal of Physiology. 581 (Pt 3), 1147-1161 (2007).
- Molojavyi, A., et al. Effects of ketamine and its isomers on ischemic preconditioning in the isolated rat heart). Anesthesiology. 94 (4), 623-629 (2001).
- Asfour, H., et al. NADH fluorescence imaging of isolated biventricular working rabbit hearts. The Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).
- Sill, B., Hammer, P. E., Cowan, D. B. Optical mapping of langendorff-perfused rat hearts. The Journal of Visualized Experiments. (30), (2009).
- Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in langendorff rat model. Cardiovascular Drugs and Therapy. 23 (4), 327-331 (2009).
- Sutherland, F. J., Shattock, M. J., Baker, K. E., Hearse, D. J. Mouse isolated perfused heart: Characteristics and cautions. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 30 (11), 867-878 (2003).
- Reichelt, M. E., Willems, L., Hack BA,, Peart, J. N., Headrick, J. P. Cardiac and coronary function in the langendorff-perfused mouse heart model. Experimental Physiology. 94 (1), 54-70 (2009).
- Xie, M., et al. Histone deacetylase inhibition blunts ischemia/reperfusion injury by inducing cardiomyocyte autophagy. Circulation. 129 (10), 1139-1151 (2014).
