Introduction
Aufklärung der Ereignisse des Herz Reaktion auf sowohl Ischämie und Reperfusion zugrunde liegen weiter zu verbessern die Behandlung von Herzinfarkt und Herz 1 operative Eingriffe, die Aorten-Querspann 2 erfordern. Während in vivo Modellen von Ischämie-Reperfusionsverletzung ermöglichen sehr nützlich Endpunktanalyse, sind sie nicht so wirksam für die Untersuchung der funktionellen Auswirkungen von Ischämie-Reperfusionsverletzung akut in Echtzeit. Zusätzlich kann in vivo Ischämie-Reperfusion-Modelle erzeugen im Allgemeinen zu signifikanten Schwankungen in der Infarktgröße und die direkte Abgabe von Arzneimittel an das Herz zum Zeitpunkt der Reperfusion ist eine Herausforderung. Die Verwendung einer Langendorff-Herzen isoliert System für die Untersuchung ischämischen Reperfusionsschäden ermöglicht Echtzeit-funktionelle Bewertung der pharmakologischen Behandlungen, gleichmäßige Flächen infarzierten Gewebe und momentane Abgabe von Arzneimittel direkt in den Herzmuskel.
Zuerst beschrieben by Oscar Langendorff 1895 3 ist der Langendorff-Herz isoliert ein robustes Modell für die Untersuchung ischämischen Reperfusionsschäden, nachdem er in Ischämie-Reperfusion Forschung für den letzten 40 Jahren 4,5 verwendet. Hier werden einige Modifikationen vorgenommen, um das isolierte Herz zur Funktionsanalyse zu optimieren. In situ Kanülierung der Aorta, während das Herz schlägt, wird sichergestellt, dass das Herz nicht ischämischen Präkonditionierung, die die Ergebnisse der Ischämie-Reperfusion den Versuchen 6 verändern würden auftreten. Um dies zu erleichtern, wird ein Luftröhrenschnitt durchgeführt, so dass Belüftung und gewährleisten physiologische Stabilität der Ratte während der Operation. Das Herz wird dann auf eine Glaswassermantel spiral Säule, durch die Krebs-Henseleit-Puffer wird durch retrograde Perfusion direkt in die Aorta geliefert befestigt. Eine Kochsalzlösung gefüllten Ballon wird in den linken Ventrikel eingeführt und mit einem Druckwandler, der für die Echtzeit-Messung von Drücken von innerhalb der Herzkammer ein ermöglicht befestigtd Berechnung mehrerer funktioneller Parameter. Am Ende des Experiments wird das Herz mit kalter Kochsalzlösung gespült, um die Kontraktion und in flüssigem Stickstoff eingefroren, um Downstream-Analyse von DNA, RNA und Protein-Ebene ermöglichen verhaften. So modifizierte, dient der Langendorff-perfundierten Herzen als ein wirksames System für die direkte Überwachung der physiologischen Wirkung von pharmakologische Interventionen zu jeder Zeit während des akut ischämischen Reperfusionsschäden.
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Protocol
Alle hier aufgeführten Verfahren wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee an der Medizinischen Universität von South Carolina genehmigt. Die hier beschriebenen Experimente sind akute, nicht-Überlebensexperimente. Als solche gibt es keine Verwendung von Augensalbe und eine sterile OP-Bereich nicht erforderlich ist. Sterbehilfe wird durch Ausbluten bei der Ernte des Herzens erreicht.
1. Versuchsvorbereitung
- Bis entweder einen konstanten Druck oder konstanten Fluss Langendorff Perfusion 4 Stellen.
- Herstellung von 4 L modifizierte Krebs-Henseleit-Puffer (in mM: 112 NaCl, 5 KCl, 1,2 MgSO 4, 1 K 2 HPO 4, 1,25 CaCl 2, 25 NaHCO 3, 11 D-Glucose, 0,2 Octansäure, pH = 7,4).
- Machen 10x stock Puffer.
- Aufzulösen NaCl, KCl, MgSO 4 und K 2 HPO 4 in 3 L Reinstwasser.
- Löse CaCl 2 in 500 ml Reinstwasser with 40 ml 1 N HCl.
- Langsam CaCl2-Lösung in den Puffer in 1.2.1.1 vorgenommen. Fügen Sie genug hochreinem Wasser auf insgesamt 4 L. Lassen Sie für 1 Stunde vor dem Filtrieren durch ein 0,8 um Filter zu rühren. Lagerung bei 4 ° C.
- Löse NaHCO 3 in 4 L Reinstwasser. Man lässt 1 h, bevor es durch einen Filter an 0,8 um-Filter rühren. Lagerung bei 4 ° C
- Kombinieren Sie 400 ml 10x Krebs Henseleit-Puffer mit 400 ml 10x NaHCO3-Puffer. Fügen Sie genug hochreinem Wasser auf insgesamt 4 L. auflösen Glukose und Oktansäure unter Rühren. Man filtriert durch 0,8-um-Filter.
- Machen 10x stock Puffer.
- Bereiten System für Herz.
- In 2 l gefiltert Puffer zu einem 4-l-Flasche 38 in platziert über dem Hahn an die Aortenkanüle angebracht. Dadurch wird ein Perfusionsdruck von 70-80 mmHg in das Herz, die die empfohlene Perfusionsdruck 4 zu liefern.
- Legen Gasdispersions bubbler in den Puffer in der Flasche.
- Führen Sie den Puffer durch das System, dass auf jeden Fall alle Blasen aus dem Inneren der Rohrleitung zu beseitigen.
- Einzuschalten Gas (95% O 2/5% CO 2) mindestens 30 min vor Herz ist auf dem System platziert werden. Verwenden Sie ein Gasstrom-Sonde und Blutgasanalysegerät, um die Sauerstoffsättigung zu überprüfen.
- Bereiten chirurgisches Material und Ballon.
- Für die Ernte von Herz, bereiten ein Paar von 6,75 "chirurgische Schere, ein Paar von 4.5" Schere, zwei Paare von Hämostatika, zwei Sätze von Karamellenmalz Zange zwei Spritzen mit 27 G Nadeln, 2 Stück von 0-Gauge-Seidenfaden (ca. 15 cm in der Länge), einer 1/16 inch Stacheldraht Kanüle und eine Trachealkanüle.
- Um Trachealkanüle montieren, kleben Sie ein kurzes Stück von 1/16 Zoll Durchmesser Kunststoffschlauch mit einem Y-Verbinder.
- Um Ballongerät montieren: fügen Sie eine Sondennadel an ein Stück 1/16 Zoll Schlauch, dann bringen Sie Schlauch an Druckwandlergehäuse. Eine kleine Spritze zu der anderen Seite des Druck tr befestigtansducer Gehäuse wird Aufblasen und Entleeren des Ballons zu ermöglichen.
- Schneiden Sie ein Quadrat der Plastikverpackung und Platz Spitze einer Magensonde Nadel in der Mitte. Wickeln Sie die Plastikfolie um die Sondennadel.
- Füllen Ballon mit Kochsalzlösung und binden mit zwei Nähten. Blasen Sie Ballon, um sicherzustellen, keine Lecks vorhanden sind. Das Volumen der Salzlösung innerhalb des aufgeblasenen Ballons sollte ungefähr 200 & mgr; l, kann aber abhängig von der Größe der Ratte variieren.
- Alternativ können Sie einen Latex Fingerling anstelle der Plastikfolie. Platzieren Sie eine Magensonde Nadel innerhalb Fingerling, füllen mit Kochsalzlösung und Krawatte ab.
2. Ernte das Herz
- Restrain eine Sprague Dawley-Ratte mit einem decapicone oder andere manuelle Rückhaltevorrichtung. Wiegen Ratte.
- Verabreichen Ketamin / Xylazin-Mischung (0,85 mg / kg Ketamin und 0,15 mg / kg Xylazin) durch intraperitoneale Injektion an Ratten anästhesiert. Diese Dosis des Anästhetikums ausreichend für Anästhesie liefern20-40 min, aber das Verfahren sollte möglichst schnell nach der Narkose wird bestätigt, durchgeführt werden.
- Bestätigen richtigen Grad der Anästhesie durch Tests toe Prise Reflex.
- Tracheotomie
- Entfernen pelt von Mitte Vorderpfote auf Basis des Kiefers, mit Gefäßklemmen, um Fell und Schere zu erheben, um Einschnitt zu machen. Halten Sie das Fell angehoben, um es von der darunter liegenden Muskeln zu trennen, so dass man auf dem Fell schneiden und entfernen.
- Verwendung hemostats, heben Drüsengewebe und machen einen horizontalen Schnitt in Faszie schlechter als das Drüsengewebe. Verwenden hemostats zu Einschnitt spreizt, kümmert sich nicht um nick die Halsvenen.
- Verwendung Hämostaten pinch Muskeldarüberliegenden Luftröhre, und mit einer Schere einen Quereinschnitt im Muskel genau unter der Spitze der Hämostatika. Verwendung hemostats, verbreiten Gewebe auseinander, um die Luftröhre zu offenbaren.
- Gefäßklemmen vorsichtig unter Luftröhre, Clearing Faszie, während voran durch leichtes Vor- und Zurück hemostats.
- Sobald hemostats erfolgreich hinter der Luftröhre gelegt, kneifen 0-0 Seidennaht mit Gefäßklemmen und hemisect die Luftröhre mit einem kleinen, scharfen Schere.
- Legen Trachealkanüle in die Trachea hemiseziert, ziehen Naht hinter der Luftröhre, und binden Sie den Faden um die Kanüle eingeführt Luftröhre, die Verankerung des Nahtmaterials zu der Y-Leiste der Kanüle mit einem Chirurgen Knoten.
- Unter Verwendung einer 27 G Nadel injizieren 1.000 U / kg Heparin in die Halsschlagader und lassen Sie sie für 30 Sekunden zu zirkulieren.
- Thorakotomie
- Entfernen pelt von Mitte Bauch bis Mitte Vorderpfote Region durch Kneifen mit Gefäßklemmen und Schneiden mit einer Schere.
- Machen Sie eine ¾-Zoll-Quereinschnitt in die Bauchmuskelwand, direkt unterhalb des Zwerchfells.
- Machen Sie eine vertikale Inzision bis die Bauchdecke und Brustwand, Schneiden entlang dem Brustbein.
- Schneiden Sie die Blende wieder auf bilateraler Ebene, dann verbreiten Brustkorb zu Herzen, Klemmbrustkorb mit Gefäßklemmen, um sicherzustellen, bleibt es verbreitet zu offenbaren. Verwendung hemostats, entfernen Sie vorsichtig Thymus, Aussetzen der aufsteigenden Aorta.
- Necken hemostats durch Aorten-Schleife, Vorschieben und Zurückziehen hemostats und sanft Verbreitung Faszie zu Spitze Gefäßklemmen ermöglichen durch.
- Verwenden hemostats zu 0-0 Seidennaht hinten aufsteigenden Aorta zu ziehen, binden Naht zu einem lockeren Halb quadratischen Knoten.
- Schalten Hahn, um den Fluss von Perfusionspuffer, hemisect Aorta beginnen und sofort legen Kanüle in Aortenlumen. Schnell cinch eine Halbkreuzknoten und füllen Sie die Knoten, Anziehen gründlich.
- Mit einer Schere Herzen weg von den großen Gefäßen zu sezieren, Herz aus der Brust zu entfernen und um die Perfusion Spalte.
- Abschneiden von überschüssigem Lungengewebe und lassen Herz auf der Säule für etwa 15 min vor dem Einsetzen des Ballons äquilibrieren. Verwenden Sie einen normalen Durchflussrate von Puffer durch das Herz von 10-20 ml / min.
3. Langendorff-Perfusion und Ischämie-Reperfusionsverletzung
- Platzierung der LV vorssure Ballon
- Lassen Sie die Luft Ballon beim Rollen in eine Kegelform und schalten Hahn, um sicherzustellen, Ballon bleibt entleerten.
- Excise linken Vorhof mit einer kleinen Schere, um den Zugang zu Mitralklappe aussetzen.
- Legen Ballon durch linken Vorhof und Mitralklappe in den linken Ventrikel.
- Startdruck-Monitoring-Software (LabChart Pro).
- Blasen Sie Ballon durch Öffnen Absperrhahn und sanft zunehmende Menge an Kochsalzlösung in Ballon, bis der diastolische Druck Lesung aus Mikromanometer Null übersteigt.
- Auf Länge-Spannung Antwort überprüfen, aufblasen Ballon langsam zu einer diastolischen Druck von 75 mmHg, entleeren langsam, einmal zu wiederholen.
- Eingestellt diastolische Druck 10 mmHg durch Modulieren der Menge von Salzlösung in den Ballon. Schalten Hahn zu Ballon auf diesem Niveau der Inflation zu versiegeln und zu pflegen geschlossenen Drucksystem zwischen LV Ballon und Druckwandler.
- Unteren Herzkammer in die erhitzt und Abdeckung mit Kunststoffkammer.
- AnzeigeDienst der Ischämie-Reperfusionsverletzung
- Stecker die Unterseite der erwärmten Kammer und erlauben Kammer mit ergossenen Puffer zu füllen.
- Als Puffer Herzen unter Wasser, drehen Hahn, den Fluss von Puffer in das Herz zu stoppen, zu induzieren globale Ischämie. Ischämie Zeit kann je nach den Zielen des Experiments variieren.
- Nach 30 Minuten der Ischämie, schalten Hahn, um die Strömung des Puffers in das Herz wiederherzustellen, Initiierung der Reperfusion.
- Lassen Sie Reperfusion des Herzens für 1 h vor Beendigung des Experiments. Verwenden variable Reperfusion Zeiten, abhängig von den Zielen des Experiments.
- Kündigung Experiment und Ernten von Tissue
- Verwendung Seitenöffnung des Absperrhahns verabreichen 10 ml phosphatgepufferter Salzlösung bei 4 ° C in das Herz mit einer Rate von 10 ml / min, um das Herz anzuhalten.
- Herz entfernen Perfusion Spalte wegschneiden restlichen Vorhofgewebe.
- Zeigen Herz in einen Edelstahlgewebe Schneidematrix, Deckel mit Parafilm und Stelle bei -80 ° C für 8 Minuten, oder bis das Herz hat einen Marshmallow artige Konsistenz.
- Entfernen Block vom Gefrierschrank und legen Sie in Rasierklingen schneiden Matrix zu Herzen in 2 mm dicke Scheiben schneiden. Gewebeblöcke können auch mit anderen als 2 mm Scheibe Größen erworben werden.
- Scheiben entfernen ein zu einer Zeit und fallen in flüssigem Stickstoff auf Blitzeis für biochemische Untersuchungen. Bewahren Sie den dritten Ventrikel Scheibe von der Spitze zur Infarkt Färbung.
- Entfernen Gewebe aus flüssigem Stickstoff und bei -80 ° C bis zur Verwendung in biochemischen Experimenten.
- Infarkt-Färbung
- Inkubieren des dritten ventrikulären Scheibe in 10 ml 1% w / v Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) bei 37 ° C für 15 min.
Anmerkung: Die Inkubation in TTC kann für 15 oder 30 Minuten bei unveränderter Wirksamkeit 15 durchgeführt werden. - Übertragen Gewebeschnitt von TTC zu 10% Formalin und lassen Sie sie bei Raumtemperatur über Nacht inkubiert. Für optimale Ergebnisse zu hörents sollte von Formalin aufgenommen und innerhalb von 24 Stunden 4 abgebildet werden.
- Fotografie Buntscheibe und Verwendung Software wie ImageJ zu Infarktgröße schätzen, nach dem Protokoll des Herstellers. Fotografieren so bald wie möglich nach der Fixierung, da der Farbstoff im Laufe der Zeit verblassen.
- Inkubieren des dritten ventrikulären Scheibe in 10 ml 1% w / v Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) bei 37 ° C für 15 min.
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Representative Results
Die linke Kammerballon Vorrichtung ermöglicht eine Echtzeitüberwachung des Drucks durch den Auftraggeber linken Ventrikel (Abbildung 1) entwickelt. Wie zuvor 7 beschrieben, kann diese Druckspur verwendet, um viele der Parameter der Herzfunktion zu berechnen. Diese Berechnungen können in der Basisphase als auch der Reperfusionsphase gemacht werden, gemittelt über mehrere Spuren in jeder Gruppe, und verglichen, um zu bestimmen, ob die pharmakologische Intervention ergab Herz Vorbehandlung, wie wir zuvor 9 gemacht. Ein solcher Parameter ist der entwickelte Druck, die als Differenz zwischen dem systolischen Druck und dem diastolischen Druck. Der entwickelte Druck in normalen perfundierten Rattenherzen kann von 70 bis 130 mmHg (1A) reichen. Nach einem ischämischen Insult, ist der entwickelte Druck reduziert und die enddiastolischen Druck erhebt (1B). Wenn die Rattenverabreicht eine bekannte Vorbehandlung Mittel wie der Klasse I und IIb HDAC-Inhibitor SAHA (vorinostat) 18 vor dem Herausschneiden des Herzens, die Reduktion in den entwickelten Druck und die Höhe des enddiastolischen Druck, mit Ischämie-Reperfusionsverletzung assoziiert abgeschwächten (Abbildung 1C). Andere Maßnahmen der linksventrikulären Funktion, wie beispielsweise die Rate der Druckerzeugung (dP / dt max) kann die Geschwindigkeit des Druckentspannungs (-dP / dt max), und die Rate Druck Produkt (RPP) direkt erhalten oder von der berechnet werden Software Ausgang (Abbildung 2). Der ischämische Phase kann auch in Echtzeit überwacht werden, wobei die Einstellung der scheinbaren Druckerzeugung innerhalb von Minuten nach dem Beginn der Ischämie. Ischämische Kontraktion kann auch durch Messen der Zeit, der Kontraktion und die Zeit bis zum Auftreten Kontraktion Spitze überwacht werden.
Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) wird häufig verwendet, um zwischen einem metabolisch differenctive und inaktive Gewebe, und ist für die Infarkt Färbung verwendet. Einmal in das Gewebe TTC wird von Stoffwechselenzymen verringert aufgenommen und verwandelt das aktive Gewebe rot. Inaktive Gewebe nicht TTC zu verringern, und als solche wird weiß 8 färben. Langendorff-perfundierten Rattenherzen, die nicht an ischämischer Verletzung unterzogen wurden keine weißen Bereiche (nicht dargestellt) zu zeigen, während die Herzen, um Ischämie-Reperfusionsverletzung zeigen wesentliche Bereiche weiß gefärbt, was auf Infarktgewebe (Abbildung 3) unterzogen.
Abbildung 1: Repräsentative Druck Spuren von linksventrikulären Ballondruck durch die LV Ballon auf ventrikuläre Kontraktion aufgezeichnet.. Herz nicht zu Ischämie (A) ausgesetzt erleben eine geringe Verlust der Kontraktionsfähigkeit über die Zeit. Herz-Ischämie unterzogen (B) zeigen immediate Verlust der Druckerzeugung, gefolgt von tonische Kontraktion. Nach Reperfusion, diese Herzen erleben erhöhten EDV und verringerte Druck entwickelt. Herzen mit SAHA vorkonditioniert und Ischämie (C) unterzogen zeigen Dämpfung von ischämischen Reperfusionsschäden. N = 1 pro Gruppe.
Abbildung 2: Berechnete Parameter der Herzfunktion Rate von Druckerzeugung (A), Geschwindigkeit des Druckentspannungs (B), entwickelte Druck (C), und bewerten Druckprodukt (D) sind einige Parameter der Herzfunktion, die von der berechnet werden kann. Druck-Monitoring-Software.
Abbildung 3: TTC-Färbung zur Infarktgebiet.
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Discussion
Isoliert perfundierten Rattenherzen erfolgreich eingesetzt werden kann, um die Wirkung von pharmakologischen Intervention Herz Präkonditionierung Reperfusionsverletzung 9 untersuchen. Es gibt jedoch einige wesentliche Schritte der Prozedur, die um reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten standardisiert werden müssen. Aufrechterhalten einer Temperatur von 37,4 ° C innerhalb des Systems ist entscheidend, denn auch milder Hypothermie und Hyperthermie kann Herz Präkonditionierung 10,11 führen. Die Gesamtzeit, die von der Injektion des Anästhetikums zur Exzision des Herzens verstreicht muß auf einem Minimum gehalten werden, da eine verlängerte Exposition gegen Ketamin kann mit Herz Vorkonditionierung 12 stören. Rechtzeitige Kanülierung der Aorta in situ wesentlich ist, um Herz Exzision der Verhinderung der Entwicklung von Hypoxie in das Herz oder das Ausbluten des Tieres vor. Insgesamt sollte die Zeit vom ersten Schnitt, um das Entfernen des Herzens nicht mehr als 6-8 min. Die linksventrikuläre balloon müssen auf Dichtheit vor jedem Experiment überprüft und gegebenenfalls ausgetauscht werden. Das System muß genau beibehalten werden, einschließlich Spülen der gesamten Vorrichtung mit destilliertem Wasser nach jedem Durchlauf und Ersetzen von abgenutzten Schlauch wie erforderlich, um ein Auslaufen oder Kontamination des Inneren der Rohrleitung zu verhindern.
Dem isolierten Herzen können für eine beliebige Anzahl von neuartigen Verwendungen, einschließlich Fluoreszenz-Bildgebungs 13 NMR Spectroscopy 7 und das optische Abbildungs 14 unter vielen anderen geändert werden. Das System kann auch modifiziert werden, um die Herzen von verschiedenen Tieren, einschließlich Mäusen durchströmen. Diese Abwandlung ist besonders nützlich, da es für Experimente unter Verwendung von transgenen Mäusen. So ändern Sie das System für die Mäuseherzen, kleinere Kanülen und eine kleinere Perfusion Spalte verwendet werden, zusätzlich zu anderen Modifikationen. Detaillierte Beschreibungen, wie man die Langendorff-Verfahren zur Mäuseherzen nutzen anderswo 16,17 veröffentlicht. Andere ModifikationenDieses Protokoll die Verabreichung verschiedener Arzneimittel zu verschiedenen Zeitpunkten. Bei der Untersuchung der Fähigkeit eines Arzneimittels zur pharmakologischen Präkonditionierung oder Nachkonditionierung verursachen, ist es notwendig, den Wirkstoff zu unterschiedlichen Zeitpunkten in Bezug auf die Reperfusionsverletzung zu verabreichen. Das Medikament kann dem Tier verabreicht werden, bevor das Herz herausgeschnitten, oder in den Puffer entweder vor das Herz an der Säule oder während der ischämischen Phase so angeordnet, dass das Medikament bei Reperfusion vorliegt gemischt. Alternativ kann eine Seitenöffnungs verwendet werden, um einen Bolus des Arzneimittels zu jedem Zeitpunkt während der Protokoll verabreichen. Zusätzlich kann das Protokoll modifiziert, um die Dauer der Ischämie, Reperfusion oder beides zu ändern. Dies erlaubt die Analyse der funktionellen und biochemischen Daten zu mehreren Zeitpunkten, und kann verwendet werden, um den zeitlichen Verlauf der akuten Wirkung eines Arzneistoffs zu verfolgen. Wenn der Reperfusionsperiode verändert wird, ist es wichtig zu beachten, dass mindestens 60 Minuten der Reperfusion sind necessar für TTC-Färbung, um effektiv zu beschreiben Infarktbereich 15.
Die Haupteinschränkung des isolierten Herzmodell in Bezug auf Ischämie-Reperfusionsverletzung ist, dass es nicht für viele systemische Faktoren, die bei der Einstellung der Ischämie-Reperfusion in vivo vorhanden sind, Rechnung zu tragen. Diese Eliminierung systemisch wirken muss bei der Analyse der Daten, die unter Verwendung der Langendorff-Modell erklärt werden, jedoch nicht die Fähigkeit des Modells, um neue Fragen zu der Reaktion der Myozyten, Fibroblasten und Endothelzellen, Ischämie und anschließende Reperfusion beantworten auszuschließen. Das isolierte Herzmodell ermöglicht eine vollständige Manipulation vieler Variablen, die Ischämie-Reperfusionsverletzung zusätzlich zu Echtzeit-Analyse der funktionellen Auswirkungen auf das Herz über kurze Zeitintervalle. Die mit Hilfe der isolierten Herzen System generierten Daten ist von unschätzbarem Wert für das Verständnis der pharmakologischen Präkonditionierung oder senden Anlage von derHerz in Reaktion auf verschiedene pharmazeutische Interventionen.
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Acknowledgments
Diese Veröffentlichung wurde von der South Carolina Clinical & Translational Research (SCTR) Institute unterstützt, mit einem akademischen Heimat an der Medizinischen Universität von South Carolina, NIH / NCATS Statt Anzahl UL1 TR000062. Weitere Unterstützung wurde von VA Merit Award BX002327-01 DRM zur Verfügung gestellt. DJH wurde von NIH / NCATS Statt Anzahl TL1 TR000061 von NIH Zuschusses Anzahl T32 GM008716 unterstützt. SEA wurde vom NIH Zuschusses Anzahl T32 HL07260 unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Potassium Chloride | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Magnesium Sulfate | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Potassium Phosphate Dibasic | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Calcium Chloride Dihydrate | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-Glucose | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Octanoic Acid | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Medical Pressure Transducer | MEMSCAP | SP844 | |
| Masterflex Peristaltic Pump | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Masterflex Easy Load Pump Head | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Heated circulating water bath | Lauda | M3 | |
| Tubing Flow Module | Transonic | TS410 | |
| Modular Research Console | Transonic | T402 | |
| Inline flow sensor | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Data Acquisition Device | AD Instruments | PL3508 | |
| LabChart data acquisition software | AD Instruments | MLU60/8 |
References
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