Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

איתור מולקולרית ראפיד והבחנה א נגיפי שפעת A ו- B

Published: January 30, 2017 doi: 10.3791/54312

Summary

אנו מתארים assay מהיר, מולקולרי מבוסס השפעת A ו- B. שפעת assay מזהה כל מטרה בתוך 15 דקות על ידי העסקת הגברת בידוד תרמית עם פריימרים ספציפי שפעת ואחריו איתור יעד עם בדיקות משואה מולקולריות. שפעת A ו- B assay הוא ידידותי למשתמש ונזקק ידות על מינימאליות זמן לבצע.

Abstract

שפעת היא מחלה נשימתית מדבקת הנגרמת על ידי נגיפי שפעת A ו- B בבני אדם וגורמת כמות משמעותית של תחלואה ותמותה מדי שנה. שפעת A ו- B assay היה מבחן השפעת מהירה מולקולרית CLIA-ויתרו הזמין הראשון. שפעת A ו- B הבדיקה פועלת על ידי העסקת הגברת בידוד תרמית עם פריימרים ספציפי שפעת ואחריו איתור יעד עם בדיקות משואה מולקולריות. הנה, את הביצועים של השפעת A ו- B assay על קפוא, בארכיון ספוגית אף ולוע (NPS) דגימות מאוחסנות במדיום תחבורת ויראלי (VTM) הושוו assay לוח נשימה.

המופע של assay שפעת A ו- B הוערך על ידי השוואת התוצאות למודל התייחסות לוח הנשימה. רגישות וירוס הכולל שפעת הייתה 67.5% (95% CI (CI), 56.6-78.5) ואת סגוליות 86.9% (CI, 71.0-100). עבור בדיקות B נגיף השפעת, הרגישות והסגוליות עמדו 90.2% (CI, 68.5-100) ו 98.8% (CI, 68.5-100), בהתאמה.

מערכת זו יש את היתרון של זמן בדיקה קצר משמעותי מאשר כל assay מולקולרית אחרת קיימים, ואת ההליך פשוט, ללא פיפטה פועלת על משולבים במלואם, סגור, מערכת-טביעת רגל קטנה. בסך הכל, שפעת A ו- B assay העריכו במחקר זה יש פוטנציאל לשמש כמבחן אבחון שפעת מהירה בנקודת הטיפול.

Introduction

נגיף שפעת לגרום כמות משמעותית של תחלואה ותמותה מדי שנה 1, 2, 3. שפעת מסובכת מאופיינת בתסמינים חוקתיים נשימה כגון חום, כאבי שרירים, כאבי ראש, ואת לא פרודוקטיביים שיעול 4, 5. מבוגרים יחידים, ילדים צעירים, בחולים מדוכאי חיסון, וחולים עם מחלות רקע שבבסיס נמצאים בסיכון גבוה יותר לסיבוכים רציניים כמו דלקת ריאות, דלקת שריר הלב, מחלת מערכת העצבים המרכזית, או מוות 6, 7.

זיהום שפעת הוא ייחודי מפני וירוסים נשימה אחרים כי הממשל הפקודה של טיפול אנטי-ויראלי בתוך 48 שעות מהופעת התסמינים יכולים להפחית את חומרת המחלה, אורך 8. זיהוי מהיר של שפעת כבר גםמפחית את השימוש באנטיביוטיקה מיותרת 9, 10. יתר על כן, חולים מאושפזים עם זיהומי שפעת יש להציב בחדרים מבודדים עם אמצעי זהירות בקרת הזיהום מתאים. עם זאת, מחלות בדרכי נשימה הנגרמות על ידי וירוסים שאינם שפעת יכולות להיות קשות קליני להבחין משפעת. מסיבה זו, בדיקות אבחון מהירות ומדויקות לשפעת חשובה מאוד לניהול מטופל קליני.

מבחנים קיימים מספר לאיתור וזיהוי של נגיפי שפעת. בדיקות לגילוי מהיר אנטיגן שפעת (RIDTs) נמצאים בשימוש נרחב בפרקטיקה הקלינית כבדיקות Point-of-care כי הם פשוט לשימוש לספק תוצאות תוך 15 עד 30 דקות 11, 12; עם זאת, הרגישויות שלהם להשתנות משמעותית (10-80%) בהתאם ליצרן ואת האוכלוסייה נבדקת, ואת סוג שפעת subty13 PE, 14, 15. מבחני קרינה ישירים (DFAs) לספק רגישויות מעולות על RIDTs, אבל הפעם העיבוד גדול (~ 3 שעות) וחייב להסתיים עד וטכנולוגים מיומנים 16, 17. תרבות ויראלי כבר את תקן הזהב לאבחון שפעת ושיפרה רגישות מעל שניהם RIDTs ו DFAs 18. עם זאת, תרבות ויראלי שפעת יכול לקחת בין 2-14 ד להשלים, הולכת ופוחתת השירות שלה בסיוע וניהול החולה 19. לבסוף, בדיקות הגברת חומצות גרעין (NAAT) החליפו טכניקות תרבות כתקן הזהב החדש באבחון שפעת. NAAT נחשבת כבעלות רגישות הגדולה לאיתור שפעת בעוד כמה שעות. עם זאת, NAAT הם המבחנים היקרים ביותר ודורש ציוד וטכנולוגים מיוחדים כדי לבצע 5 20, 21, 22, 23, 24, 25.

שפעת assay A ו- B המתואר כאן הוא מבחן השפעת המהיר המולקולרי CLIA-וייתר הראשון שכבר זמין. assay זה עובד על ידי העסקת תגובת הגברה שסחב Endonuclease (NEAR) המשתמשת הגברת בידוד תרמית עם פריימרים ספציפי שפעת ואחריו איתור יעד עם בדיקות משואה מולקולריות. assay זה מבדיל שפעת A מ- B, דורש 2 דקות כדי להגדיר ולעבד דגימה אחת, ודורש בסך הכל 15 דקות כדי להשלים.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור assay שפעת A & B. בנוסף, אנו מספקים נתונים לדוגמה להגדיר השוואת הביצועים של שפעת A ו- B assay על ספוגית האף והלוע בארכיון (NPS) דוגמאות טיפוסיות מאוחסן במדיום התחבורה ויראלי (VTM) למשנהו assay לוח הפתוגן הנשימה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

מסר אתיקה: שימוש שמאל מעל דגימות קליניות יאושר והוא פועל בהתאם להנחיות של דירקטוריון הסקירה המוסדי במרכז לחקר סרטן קטרינג סלואן הזיכרון.

1. לפני הפעלת Assay

הערה: השפעת A ו- B assay מאושר דגימות ספוגית אף ולוע ועבור מטליות אף ולוע מאוחסנות תקשורת תחבורת ויראלי. מטליות כלולות בערכה ויש להשתמש בם עבור ביצועים אופטימליים. עם זאת, זהורית, קצף, נהר מטליות או ספוגיות אף פוליאסטר יכולות לשמש גם כדי לאסוף דגימות ספוגית אף.

  1. כדי לאסוף דגימת אף ספוגית, הכנס את הספוגית לתוך הנחיר כי יש ניקוז הבולט ביותר או כי הוא הכי צפוף. עם סיבוב עדין, לדחוף את הספוגית לתוך הנחיר עד ההתנגדות הוא פגשה לסובב מספר פעמים כנגד קיר האף לפני ההסרה לאט מהנחיר. אחסן את מטליות ו להסיעם בקבוקונים המכילים 3 מ"ל של התקשורת התחבורה ויראלי (VTM).
    הערה: תשומת לב קפדנית approprאוסף הדגימה iate חייב להתפרש אוסף הדגימה לקוי עשוי להניב תוצאות שגויות.
    הערה: דגימות ספוגיות צריכים להיבדק בהקדם האפשרי לאחר איסוף. עם זאת, הם עשויים להיות מאוחסנים בטמפרטורת חדר למשך עד שעה 2 או בקירור ב 2-8 מעלות צלזיוס למשך עד 24 שעות אם בדיקות אינן זמינות מייד. טרי דגימות שנאספו הם אידיאליים עבור ביצועים במבחן אופטימליים. טיפול מדגם לא נכון, אחסון, ו / או הובלה עשוי להניב תוצאות שגויות.
    הערה: כאמצעי זהירות, אנשי ביצוע בדיקה זו צריכים להתייחס לכל הדגימות בפוטנציה זיהומיות שמירה על הנחיות בטיחות אוניברסלית בעת טיפול דגימות.
  2. תביאו כל הדגימות לטמפרטורת החדר לפני הבדיקה.
    הערה: כל מרכיבי הבדיקה מיועדים לשימוש יחיד בלבד ולא אמור לשמש לביצוע בדיקות מרובות. אין לערבב מרכיבי ערכת ממספרים הרבה שונים. אין להשתמש ריאגנטים ערכה מעבר לתאריך התפוגה שלהם.
  3. תביא את מקלט המדגם הכחול Rooטמפרטורה מ לפני הבדיקה. בסיס המבחן הכתום ניתן לבדוק ללא הצורך לחמם לטמפרטורת חדר.
  4. השאירו את כל פיסות הבדיקה בתוך האריזה רדיד עד מיד לפני השימוש. הפעל את המכשיר על ידי לחיצה על לחצן ההפעלה בצד של המכשיר. הזן את מזהה המשתמש ולחץ על 'אישור'.

2. הרצת מבחן

  1. כדי להתחיל בתהליך הבדיקה, לגעת 'הפעלה נסיונית "במסך המכשיר. הזן את מזהה המטופל באמצעות המקלדת שעל המסך או סורק ברקוד ולחץ על 'אישור'. פתח את המכסה והכנס את בסיס מבחן אורנג לתוך מחזיק בסיס מבחן אורנג '.
  2. אשר שהמבחן הנכון מוצג על המסך ולחץ על 'אישור'. הכנס את מקלט המדגם הכחול לתוך החזיק מקלט מדגם הכחול.
    הערה: אין לפתוח את השפופרת מדגם לפני הצבת המכשיר זה ימנע למאגר elution מלהגיע טמפרטורת ההפעלה הנכונה ועלול להשפיע על הביצועים במבחן. חכו מקלט מדגם להתחמם. כאשר תתבקש על ידי המכשיר, להסיר את החותם בנייר כסף ומניחים ספוגית החולה להיבדק לתוך השפופרת המדגם.
    הערה: בעת הסרת הרדיד, הנח שתי אצבעות על שפת הכונס לדוגמא כדי לוודא שהוא נשאר במקום.
  3. במרץ לערבב את הספוגית בנוזל במשך 10 שניות, לחיצה על הראש הספוגי כנגד צד המקבל מדגם כפי שאתה לערבב אותו כדי לעזור לסלק את הדגימה מן הספוגית. 'אישור' לחץ כדי להמשיך. אם מטליות בדיקות מאוחסנות במדיום תחבורת ויראלי, מערבולת VTM במשך 10 שניות ולאחר מכן להוסיף 200 μl למקלט המדגם.
  4. לחץ על מחסנית ההעברה הלבנה לתוך שפופרת המדגם הכחולה. המשך ללחוץ על המקלט מדגם עד שהחיווי הכתום עולה.
  5. רם ולאחר מכן חבר את מחסנית ההעברה לבסיס הבדיקה. שים את המחוון הכתום יורד פעם העברה המחסנית מחוברת כהלכה. לסגור את המכסה ואל תפתח עד "מבחן השלם"מופיעה הודעה על המסך.

3. בקרת איכות

  1. לגעת 'הפעלה QC Test' במסך הבית. בחר את פעולת QC שיופעל. אשר את סוג הבדיקה כדי להתאים מדגם QC שנועד לבדיקה על ידי נגיעה על 'אישור' ובעקבות על מסך כדי להשלים בדיקות.

4. פרשנות תוצאה

  1. לאחר ריצת השלמת הבדיקה, לבחון את תוצאות הבדיקה המוצגת על המסך עם פרשנויות לנוכחות של השפעת A, B, תת ידוע. לקבלת תוצאות חוקיות לחזור על הבדיקה.

תחזוקה וניקיון 5.

  1. נקו את המכשיר באזור הספסל שמסביב יומי עם אתנול 70% או פתרון אקונומיקה 10%. תרסיס לניקוי על מטלית לחה, נטול סיבים לניקוי. אין לשפוך הפתרונות ישירות על המכשיר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

במחקר זה, בארכיון דגימות NPS נאספו מאושפזים עם הצגת תסמינים דמויי שפעת במרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג (MSKCC) במהלך התפרצות שפעת בין 15 בדצמבר, 2012 ו -1 במארס 2013. דגימות NPS הוגשו 3 מ"ל של VTM ונבדק כחלק בפועל קליני שגרתי עם assay מולקולרי שמזהה פאנל של וירוסים בדרכי הנשימה (RP), כולל שפעת A, A-1, A-3, ו- B. במהלך תקופת המחקר, 3,675 דגימות NPS הוגשו למעבדה הקלינית MSKCC לבדיקה. דגימות אלה, 45, 425, 37, ו -77 נדבקו בשפעת וירוסי A-1, A-3, A-un-subtypable (Au), ו- B, בהתאמה עם RP. סך של 360 דגימות חיוביות, 40 דגימות מכל אחת תת השפעת, ו -37 Au. בנוסף, 1-2 דגימות שליליות שהגיעו למעבדה מיד לפני או אחרי כל אחת מהדגימות החיוביות נבחרו testi עוקבותng עם שפעת A ו- B assay.

בסך הכל, השפעת A ו- B assay זוהו 79 וירוס שפעת, 37 B נגיף שפעת, 240 שליליים, ו -4 תוצאות לא חוקיות (כישלון של בקרות פנימיות) (טבלה 1). היו 46 תוצאות סותרות עם 44 דגימות חיוביות על RP רק ושנייה חיובית על השפעת ו assay ב 'בלבד. Assay שפעת מולקולרית מבוססת השלישי בוצעה על 44 הדגימות הצורמות אשר זוהו 33/43 (וירוס 8 שפעת, 21 Au, ו- B וירוס 2 שפעת) כי היו חיוביים על ידי RP ו 0/1 חיובי (וירוס שפעת) על ידי assay A ו- B שפעת. הסכם בין שניים או יותר מבחני נחשב זיהוי מדויק.

רגישות assay הכוללת שפעת A ו- B עבור וירוס הכולל שפעת הייתה 67.5% (95% CI (CI), 56.6-78.5). הרגישות עבור תת שפעת A הוא A-1, 84.6% (CI, 58.5-100), A- 3, 90.2% (CI, 62.8-100), ו- Au, 21.9% (CI, 19.6-24.1). סגוליות הכוללת עבור וירוס שפעת A היה 86.9% (CI, 71.0-100). עבור בדיקות B נגיף השפעת, הרגישות והסגוליות עמדו 90.2% (CI, 68.5-100) ו 98.8% (CI, 68.5-100), בהתאמה.

בסך הכל, את ערכי CT הממוצעים דגימות עם תוצאות צורמות היו גבוהים באופן משמעותי מאלה שהושגו עבור תוצאות תואמות (16.4 ± 0.48 לעומת 25.7 ± 0.51; p> 0.000) (איור 1).

איור 1
איור 1: ערכי CT ממוצעים נקבעו על ידי assay RP עבור דגימות שהיו חיוביים ושליליים, בהתאמה ידי assay עבור כל תת-סוג שפעת. ברי שגיאה מייצגים סטיית התקן. ** P <0.01; *** P <0.001.1large.jpg "target =" _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

שולחן 1
טבלה 1: ביצועים של שפעת A & B על VTM דוגמאות טיפוסיות בהשוואה לתוצאות התייחסות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

נגיפי שפעת גורמים משמעותיים עולמי של תחלואה ותמותה. אבחון מהיר ומדויק של שפעת הוא אחד המפתחות העיקריים לניהול התפרצויות שפעת בעונת נשימה. בדיקות אחרות מבוסס אנטיגן הן מהירות וקלות לביצוע; עם זאת, יש להם רגישויות נמוכות 13. מצד השני, בדיקות מולקולריות מסורתיות השתפרו רגישות, אך דורשות אנשי טכנולוגית מעבדה מנוסות יותר לבצע והם יקרים יותר. שפעת A ו- B assay המתואר במחקר זה ופרוטוקול הוא CLIA-וייתר, בדיקה מולקולרית מהירה לשפעת A ו- B. הטכנולוגיה מבוססת על הגברה-בידוד תרמי לאיתור וההבחנה של נגיפי שפעת A ו- B. אנחנו מראים תוצאות נציג כדי להדגים את הביצועים של שפעת A ו- B assay בפנל של לארכיון, דגימות קפואות NPS VTM הוערכה לעומת אחר assay לוח מולקולרי מבוסס נשימה.

> הדגימות שנקבעו להיות "חד-משמעית" או "untypeable" על-פי מבחן RP היתה הרגישות הנמוכה ביותר על ידי שפעת ו assay B. בנוסף, תוצאות צורמות נצפו בתדירות גבוהה יותר עבור דגימות עם ערכי C T גבוהים מבחני RP, הדבר המצביעה על כך שיעור זיהוי הנמוך ידי assay היה קשור titers ויראלי הנמוך. את assay היה ביצועים משופרים לצורך זיהוי על B נגיף השפעת על וירוס שפעת A זיהוי עם רגישות 90.2% וסגוליות 98.1%. התוצאות כאן עולות בקנה אחד עם ספרות שפורסמה בעבר 26, 27, 28.

למחקר זה יש שתי מגבלות חשובות. ראשית, דגימות אוחסנו VTM לבדיקה על הרציף. עם זאת, בעת הדגימות נבדקו, הפלטפורמה לא היה אישור FDA עבור סוג מדגם זה. לכן, הדילול לתוך VTM, עשוי צמצםזיהוי של דגימות VTM נמוכה כייל. שנית, הדגימות שנבדקו עם השפעת ו assay B אוחסנו ב -70 מעלות צלזיוס במשך 6 עד 9 חודשים לפני בדיקה ואילו בדיקות RP נעשה על דגימות טריות מייד לאחר קבלתן. יתכן כי הקפאת דגימות נוספות מופחת זיהוי שפעת בדגימות.

שפעת A & B יש assay כמה צעדים הוא פשוט לביצוע. עם זאת, ישנם שני שלבים עיקריים שיש להשלימן כראוי וכי משתמשים יכולים לפתור אם הם חווים שגיאות. ראשית, בהגדרה ראשונית של assay, מחסנית ההעברה חייבת להיות מחוברת לבסיס הבדיקה עד שהם לוחצים למקומו. אם שני חלקים אלה אינם מובטחים כראוי, בטווח ייכשל ויהיה צורך לחזור מההתחלה. שנית, המכשיר צריך להתחמם במשך 2 דקות לפני הוספת המדגם. לאחר זמן להתחמם זה, יש משתמשים 30 שניות להוסיף המדגם, לחבר את ג ההעברהartridge לבסיס הבדיקה, ולסגור את המכסה. אם הזמן עובר לפני שלב זה הושלם, המכשיר ייכשל בטווח ואת המדגם להגדיר יצטרך לחזור מההתחלה.

המגבלות של assay כוללות עלייה קלה הידיים על זמן ורגישות נמוכה יותר בהשוואה ללוח הנשימה ואינו תת סוג א שפעת יתר על כן, סוגים הדגימה היחיד שיכול לשמש עם assay הם מטליות האף והלוע או NPS המאוחסנים תקשורת תחבורת ויראלי; הביצועים של assay עבור כל סוג דגימה אחר, כגון דגימות נשימה תחתונות, לא הוערכו. חשוב לציין כי כל הצעדים בפרוטוקול זה הם קריטיים. כל שינוי או סטייה מן הפרוטוקול כפי שנכתב ועלול לגרום לביצועים נמוכים או של assay וחייב להיות מוערך על ידי המשתמש. היתרון של הטכנולוגיה הוא כי יש המכשיר טביעת רגל קטנה, רק לוקח 15 דקות כדי לבצע, למרות שהטכנולוגיהמבוסס על שיטות מולקולריות, אינו דורש הכשרה או כישורים מיוחדים כדי לבצע. שפעת A ו- B assay העריכו במחקר זה יש פוטנציאל לשמש כחלופה RIDTs לאבחון של שפעת. המערכת יש את היתרון של זמן בדיקה כולל קצר, יש טביעת רגל קטנה והוא קל לשימוש. בסך הכל, את העיצוב של המכשיר הוא מתאים בדיקות צבע של טיפול.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alere i Instrument Alere NAT-000 (Global), NAT-024 (US)
Alere i Influenza A & B 24 Test Kit Alere 425-000 (Global), 425-024 (US)
Alere i Barcode Scanner Alere EQ001001
Alere Universal Printer Alere 55115 (Global), alereiprinter (US)
200 µl precision pipette
200 µl disposable pipette tips
Viral transport medium Remel M4-RT

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Prevention control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. , Report No. 1057-5987 1-43 (2013).
  2. Poehling, K. A., et al. The Underrecognized Burden of Influenza in Young Children. New England Journal of Medicine. 355 (1), 31-40 (2006).
  3. Estimates of Deaths Associated with Seasonal Influenza --- United States, 1976-2007. MMWR. 59 (33), 1057-1089 (2010).
  4. Agrawal, A. S., et al. Comparative evaluation of real-time PCR and conventional RT-PCR during a 2 year surveillance for influenza and respiratory syncytial virus among children with acute respiratory infections in Kolkata, India, reveals a distinct seasonality of infection. Journal of Medical Microbiology. 58 (12), 1616-1622 (2009).
  5. Ginocchio, C. C. Strengths and Weaknesses of FDA-Approved/Cleared Diagnostic Devices for the Molecular Detection of Respiratory Pathogens. Clinical Infectious Diseases. 52, suppl 4 312-325 (2011).
  6. Grohskopf, L. A., et al. Prevention and control of seasonal influenza with vaccines: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices-United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62 (07), 1-43 (2013).
  7. Molinari, N. -A. M., et al. The annual impact of seasonal influenza in the US: measuring disease burden and costs. Vaccine. 25 (27), 5086-5096 (2007).
  8. Aoki, F. Y., et al. Early administration of oral oseltamivir increases the benefits of influenza treatment. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 51 (1), 123-129 (2003).
  9. Noyola, D. E., Demmler, G. J. Effect of rapid diagnosis on management of influenza A infections. The Pediatric infectious disease journal. 19 (4), 303-307 (2000).
  10. Sharma, V., Dowd, M., Slaughter, A. J., Simon, S. D. EFfect of rapid diagnosis of influenza virus type a on the emergency department management of febrile infants and toddlers. Archives of Pediatrics & Adolescent Medicine. 156 (1), 41-43 (2002).
  11. Dale, S. E., Mayer, C., Mayer, M. C., Menegus, M. A. Analytical and clinical sensitivity of the 3M rapid detection influenza A+B assay. J Clin Microbiol. 46 (11), 3804-3807 (2008).
  12. van Doorn, H. R., et al. Clinical validation of a point-of-care multiplexed in vitro immunoassay using monoclonal antibodies (the MSD influenza test) in four hospitals in Vietnam. J Clin Microbiol. 50 (5), 1621-1625 (2012).
  13. Hurt, A. C., Alexander, R., Hibbert, J., Deed, N., Barr, I. G. Performance of six influenza rapid tests in detecting human influenza in clinical specimens. Journal of Clinical Virology. 39 (2), 132-135 (2007).
  14. Fiore, A. E., et al. Antiviral agents for the treatment and chemoprophylaxis of influenza --- recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP). MMWR Recomm Rep. 60 (1), 1-24 (2011).
  15. Harper, S. A., et al. Seasonal influenza in adults and children--diagnosis, treatment, chemoprophylaxis, and institutional outbreak management: clinical practice guidelines of the Infectious Diseases Society of America. Clin Infect Dis. 48 (8), 1003-1032 (2009).
  16. Hannoun, C., Tumova, B. Survey on influenza laboratory diagnostic and surveillance methods in Europe. European Journal of Epidemiology. 16 (3), 217-222 (2000).
  17. Leonardi, G. P. Rapid identification of 2009 H1N1 influenza A virus using fluorescent antibody methods. Am J Clin Pathol. 134 (6), 910-914 (2010).
  18. Chartrand, C., Leeflang, M. M. G., Minion, J., Brewer, T., Pai, M. Accuracy of Rapid Influenza Diagnostic TestsA Meta-analysis. Annals of Internal Medicine. 156 (7), 500-511 (2012).
  19. Lee, G. C., et al. Evaluation of a rapid diagnostic test, NanoSign(R) Influenza A/B Antigen, for detection of the 2009 pandemic influenza A/H1N1 viruses. Virol J. 7, 244 (2010).
  20. Tang, Y. W., et al. Clinical accuracy of a PLEX-ID flu device for simultaneous detection and identification of influenza viruses A and B. J Clin Microbiol. 51 (1), 40-45 (2013).
  21. Bandt, D., et al. Economic high-throughput-identification of influenza A subtypes from clinical specimens with a DNA-oligonucleotide microarray in an outbreak situation. Molecular and Cellular Probes. 26 (1), 6-10 (2012).
  22. Pierce, V. M., Elkan, M., Leet, M., McGowan, K. L., Hodinka, R. L. Comparison of the Idaho Technology FilmArray system to real-time PCR for detection of respiratory pathogens in children. J Clin Microbiol. 50 (2), 364-371 (2012).
  23. Teo, J., et al. VereFlu™: an integrated multiplex RT-PCR and microarray assay for rapid detection and identification of human influenza A and B viruses using lab-on-chip technology. Archives of Virology. 156 (8), 1371-1378 (2011).
  24. Babady, N. E., et al. Comparison of the Luminex xTAG RVP Fast assay and the Idaho Technology FilmArray RP assay for detection of respiratory viruses in pediatric patients at a cancer hospital. J Clin Microbiol. 50 (7), 2282-2288 (2012).
  25. Chidlow, G., et al. Duplex real-time reverse transcriptase PCR assays for rapid detection and identification of pandemic (H1N1) 2009 and seasonal influenza A/H1, A/H3, and B viruses. J Clin Microbiol. 48 (3), 862-866 (2010).
  26. Bell, J. J., Selvarangan, R. Evaluation of the Alere I influenza A&B nucleic acid amplification test by use of respiratory specimens collected in viral transport medium. J Clin Microbiol. 52 (11), 3992-3995 (2014).
  27. Nie, S., et al. Evaluation of Alere i Influenza A&B for Rapid Detection of Influenza Viruses A and B. Journal of Clinical Microbiology. 52 (9), 3339-3344 (2014).
  28. Chapin, K. C., Flores-Cortez, E. J. Performance of the Molecular Alere i Influenza A&B Test Compared to That of the Xpert Flu A/B Assay. Journal of Clinical Microbiology. 53 (2), 706-709 (2015).

Tags

זיהום גיליון 119 שפעת שפעת אבחון מולקולרי Point-of-care בדיקות דגימות נשימה שפעת A ו- B assay
איתור מולקולרית ראפיד והבחנה א נגיפי שפעת A ו- B
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Otto, C. C., Kaplan, S. E., Stiles,More

Otto, C. C., Kaplan, S. E., Stiles, J., Mikhlina, A., Lee, C., Babady, N. E., Tang, Y. W. Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B. J. Vis. Exp. (119), e54312, doi:10.3791/54312 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter