Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Anticancer Effekten av fotodynamisk behandling med Lung Cancer-Målrettet Nanopartikler

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

MERK: Alle dyrestudieprotokoller ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité Seoul National University Bundang Hospital (BA1308-134 / 072-01).

1. Syntese av hyaluronsyre-Ceramide (HACE)

  1. Oppløse 12,21 mmol av hyaluronsyre (HA) oligomer og 9,77 mmol av tetra-n--butylammonium hydroksyd (TBA) i 60 ml dobbeltdestillert vann (DDW). Omrør i 30 minutter.
  2. For å syntetisere den DS-Y30 linker, oppløse 8,59 mmol av DS-Y30 ceramid og 9,45 mmol trietylamin i 25 ml tetrahydrofuran (THF). Bland med 8,59 mmol 4-chloromethylbenzoyl klorid i THF. Omrør i 6 timer ved 60 ° C.
  3. Oppløs den syntetiserte 8,10 mmol HA-TBA og 0,41 mmol av DS-Y30 linker i en blanding av THF og acetonitril (4: 1, v / v). Omrør i 5 timer ved 40 ° C.
  4. Fjerne urenheter ved filtrering med et filtermiddel, og fjerne det organiske løsningsmidlet ved vakuum-fordampning. Rens produktet ved hjelp av en dialysemembran (molekylvekt cut-off: 3,5 kDa) og Lyofiliser.

2. Utarbeidelse av Nanopartikler

  1. Oppløs 1 mg HB og 1 mg av paclitaxel i 0,5 ml dimetylsulfoksyd (DMSO) og blandes med 0,5 ml av DDW ved vortex-blanding i 5 min. Deretter oppløseliggjøre hare ved at blandingen av vortex-blanding i ytterligere 5 min.
  2. For å eliminere løsningsmiddel, varme ved 70 ° C i 4 timer under en svak strøm av nitrogengass.
  3. Resuspender film sammensatt av hare, HB, og paclitaxel med 1 ml DDW. Filter med en sprøytefilter (0,45 um porestørrelse) for å fjerne uinnkapslede legemidler.

3. In Vitro fototoksisitet

  1. Opptak av nanopartikler i lungekreftcellelinjer
    1. Fremstille RPMI-1640 medium inneholdende 10% (v / v) føtalt bovint serum og 1% (vekt / volum) penicillin-streptomycin.
    2. Seed A549-celler i 24-brønners cellekulturplater ved en tetthet på 1 x 10 5 celler / brønn (tre paralleller for hver enkeltgruppe). Inkuber i 24 timer ved 37 ° C i en fuktet 5% CO2 og 95% luftatmosfære.
    3. Etter celleadhesjon, fjern mediet og vask cellene ved å tilsette 1 ml fosfat-bufret saltvann (PBS).
    4. Oppløs nanopartikler i PBS til en endelig konsentrasjon på 2 uM / ml HB. Deretter inkuberes cellene med 1 ml PBS, tom NPS, HB-NPS, eller HB-P-NPS i hver brønn i 4 timer i mørket.
    5. Fjern all oppløsning og vaske cellene ved å tilsette 1 ml kald PBS. Gjenta vasketrinnet en gang til. Legg friskt kulturmedium.
  2. Celleviabilitet assay
    1. Plasser cellekultur plate under PDT fiber (med 1 cm avstand fra PDT fiber til brønnen). Bruk laser vernebriller og belyse cellene med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) i mørket for ulike tidsperioder: 0, 5, 10, 20, 30 og 40 sek (0, 2, 4 , 8, 12, og 16 J / cm2). Deretter inkuberes cellene i 24 timer i mørket.
    2. Aspirere mediet og vask cellene ved å tilsette 1 ml kald PBS. Gjenta vasketrinnet en gang til.
    3. Tilsett 10 mL av cytotoksisitet måleløsning til hver brønn. Inkuberes i mørket i 2 timer.
    4. Mål absorbansen ved 450 nm ved anvendelse av en mikroplateleser.
  3. mikroskopisk analyse
    1. Plasser cellekultur plate under PDT fiber (med 1 cm avstand fra PDT fiber til brønnen). Bruk laser vernebriller og belyse cellene med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) i mørket for 0, 20, eller 40 sek (0, 8 eller 16 J / cm 2). Deretter inkuberes cellene i 24 timer i mørket.
    2. Aspirere mediet og vask cellene ved å tilsette 1 ml kald PBS. Gjenta vasketrinnet en gang til.
    3. Tilsett 50 ul av annexin V-FITC og 50 ul av 4 ', 6-diamidino-2-fenylindol (DAPI, 1,5 ug / ml). Rist platen og inkuberes det i 15 minutter ved romtemperatur i mørke.
      MERK: Bruk annexin V-FITC fra fluorescens mikroskop kit.
    4. Vask cellene ved tilsetning av 1 ml kald PBS. Gjenta vasketrinnet en gang til. Hold cellene i fersk PBS. Identifiser de apoptotiske celler ved hjelp av lysmikroskopi ved 100X forstørrelse.
  4. Fluorescens-aktivert cellesortering (FACS) analyse
    1. Plasser cellekultur plate under PDT fiber (med 1 cm avstand fra PDT fiber til brønnen). Bruk laser vernebriller og belyse cellene med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) i 0, 20, eller 40 sek (0, 8 eller 16 J / cm 2). Deretter inkuberes cellene i 24 timer i mørket.
    2. Aspirere mediet og vask cellene ved å tilsette 1 ml kald PBS. Gjenta vasketrinnet en gang til.
    3. Resuspender cellene i 1 ml av 1 x bindingsbuffer (fortynne en del av den 10 x bindingsbuffer, 0,1 M Hepes / NaOH (pH 7,4), 1,4 M NaCl, og 25 mM CaCl 2 til 9 deler destillert vann) og overføre 100 ul av prøveløsningen på en 5 ml-dyrkningsrør.
    4. Tilsett 5 ul av annexin V-FITC og 5 ul av propidiumjodid (PI). Forsiktig vortex tube og inkuber i 15 minutter ved romtemperatur (RT) i mørket. Tilsett 400 ul av 1 x bindingsbuffer.
      MERK: Bruk annexin V-FITC og PI fra fluorescens mikroskop kit.
    5. Identifiser apoptotiske celler ved hjelp FACS 14. De eksitasjon laserlinjer av PI og annexin V-FITC er 488 nm og 635 nm, henholdsvis. Måle fluorescensemisjonen av PI og annexin V-FITC på 610 ± 20 nm og 660 ± 20 nm, respektivt. Samle de ervervede celler på strømningscytometeret per 10.000 hendelser.

4. In vivo anticancer-effekt hos tumorbærende mus

  1. Lungekreft-indusert musemodell
    1. Forbered 1 × 10 6 A549 celler i 0,1 ml RPMI-1640 medium; holde den i isen.
    2. Bedøve musene med en ip injeksjon av en xylazin og en blanding av tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml /kg). Bekreft riktig anesthetization ved å forsiktig klemme en liten fold av mus hud. Bruk dyrlege salve på øynene for å hindre tørrhet mens under anestesi.
      MERK: Hvis ingen bevegelse er observert, er tilstrekkelig bedøvet å starte forsøkene dyret.
    3. Injisere cellene subkutant i venstre flankene av BALB / C mannlig hårløse mus (6 - 7 uker gammel, 20-22 g).
    4. Hold observere musene før de begynner å bevege seg rundt i buret.
      MERK: Ikke la et dyr uten tilsyn før det har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumbency. Ikke returner et dyr som har gjennomgått kirurgi i selskap med andre dyr før det er fullstendig restituert. Hold mus under konkrete patogenfrie (SPF) betingelser.
    5. Mål tumorstørrelse med calipers hver dag. Beregn tumorvolum (mm3) som (lengde x bredde2) / 2. Når tumorstørrelsen nådde ca. 200 mm3 i volum, starter eksperimentet.
    6. Anticancer effektstudie
      1. Tilfeldig dele musene i 4 grupper (n = 10 for hver gruppe).
      2. Bedøve musene med en ip injeksjon av en xylazin og en blanding av tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekreft riktig anesthetization ved å forsiktig klemme en liten fold av mus hud. Bruk dyrlege salve på øynene for å hindre tørrhet mens under anestesi.
        MERK: Hvis ingen bevegelse er observert, er tilstrekkelig bedøvet å starte forsøkene dyret.
      3. Oppløs nanopartikler i PBS til en sluttkonsentrasjon på 2 mg / ml HB. Injisere PBS, fri HB, HB-NPS, eller HB-P-NPS via halevenen (2 mg / kg som HB) to ganger på dagene 0 og 7.
      4. Hold observere musene før de begynner å bevege seg rundt i buret.
        MERK: Ikke la et dyr uten tilsyn før det har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumbency. Ikke returner et dyr som har gjennomgått kirurgi i selskap med andre dyr før fulltgjenvunnet. Hold merdene mørke og under bestemte SPF forhold.
      5. 24 timer etter hver injeksjon, bedøve musene med en ip injeksjon av en xylazin og en blanding av tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekreft riktig anesthetization ved å forsiktig klemme en liten fold av mus hud. Bruk dyrlege salve på øynene for å hindre tørrhet mens under anestesi.
        MERK: Hvis ingen bevegelse er observert, er tilstrekkelig bedøvet å starte forsøkene dyret.
      6. Plasser svulst nettstedet under PDT fiber (med 1 cm avstand fra PDT fiber til svulsten). Bruk laser vernebriller, slå av bryteren, og belyse svulsten med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) for 500 sek (200 J / cm 2) to ganger på dag 1 og 8.
      7. Hold observere musene før de begynner å bevege seg rundt i buret. Ikke la et dyr uten tilsyn før det har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumbency. Ikke returner et dyr som har undergone kirurgi til selskap med andre dyr før fullt restituert.
      8. Hold merdene i henhold SPF forhold. Opprettholde merdene i mørket i 24 timer etter laserbehandling.
      9. Visuelt overvåke tumorvolumet og endringene på tumorstedet hver dag. Mål tumor størrelse med calipers, og beregne volumet som (lengde x bredde 2) / 2 (mm 3). Ta bilder av svulsten nettsteder hver dag for å se etter svulst overflate endringer etter PDT.
      10. På dag 16, ofre fem mus per gruppe av terminal anestesi ved hjelp av isofluran.
      11. Med pinsett og saks, klippe den ytre huden og eksponere svulstene 15. Nøye høste dem. Fest dem i 10% formalin, legge dem i parafin, og beis dem med hematoxylin og eosin (H & E) for histologisk analyse 16.
      12. Etter 45 dager med overvåking, ofrer de resterende mus ved terminal anestesi ved hjelp av isofluran.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi forberedte både HB-NPs og HB-P-NPs med teknikker nevnt ovenfor. De midlere diametere på HB-NPS og HB-P-NPS var 220,9 ± 3,2 nm og 211,9 ± 1,6 nm, respektivt.

Cellelevedyktigheten til A549-celler etter 4 timer inkubasjon med PBS, tom NPS, HB-NPS, og HB-P-NPS fulgt av lysbestråling (0 til 16 J / cm2) er vist i figur 1. Uten lyset, HB-NP behandlingsgruppe viste ingen cytotoksisitet i det hele tatt, mens HB-P-NP-behandlede celler viste 81,28 ± 0,14% celleviabilitet. Dette kan være på grunn av den anticancer virkning av paclitaxel, som ble frigjort fra nanopartikler. Under PDT ble cellelevedyktigheten reduseres i henhold til den lyseksponering tid i både HB-NP- og HB-P-NP-behandlede celler. De HB-P-NP-behandlede celler viste økt fototoksisitet enn HB-NPs gruppe under samme bestrålingsvilkår. Når 16 J / cm2 av bestråling ble gitt, bare 7,52 ± 0,38% av cellene overlevde i HB-P-NP-behandlingsgruppen.

Den konsistente resultater ble visualisert med annexin V-FITC-farging (figur 2). De PDT-induserte apoptotiske celler ble farget med annexin V-FITC, uttrykker grønn fluorescens. Det sterkeste signal grønn fluorescens ble påvist i de HB-P-NP-behandlede celler under de samme bestrålingsbetingelser.

Stadier av PDT-induserte apoptotiske celler ble klassifisert av flowcytometri. Ved å dobbelt farging med annexin V-FITC og PI, tidlig apoptotiske celler (bare annexin V-FITC positive), sent apoptotiske celler (både annexin-V og PI positive) og nekrotiske celler (kun PI positive) var preget. Under de samme betingelser PDT, ble den del av slutten av apoptotiske celler økte i HB-P-NP-behandlede gruppen (figur 3).

"Fo: hold-together.within-siden =" en "> In vivo tumorvekst hos lungetumorbærende mus etter dobbel intravenøs injeksjon av PBS, fri HB, HB-NPS, og HB-P-NPS fulgt av lys bestråling er vist i figur 4. overflatene av tumorseter ble også undersøkt (figur 5). de HB-P-NP-behandlede mus viste de raskeste reaksjoner, herunder blødning og nekrose, og den tregeste tumorvekst. Videre har bekreftet histologisk analyse mest alvorlig skadede kreftceller var i HB-P-NP behandlingsgruppen (figur 6).

Figur 1
Fig. 1: In vitro fototoksisitet av A549-celler A549-celler ble behandlet med PBS, tom NPS, HB-NPS, eller HB-P-NPS, og lysbestråling ble gitt for 0, 5, 10, 20, 30 eller 40 sek (0, 2, 4, 8, 12, 16 eller J / cm2). Under than samme bestråling tid, HB-P-NP behandlingsgruppen viste høyere fototoksisitet enn HB-NP behandlingsgruppen. Verdier er uttrykt som gjennomsnitt ± standard avvik (SD; n = 3). *** P <0,001, sammenlignet med PBS-behandlede gruppen. ## P <0,01, ### p <0,001, sammenlignet med HB-NP behandlingsgruppe. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Fig. 2: Mikroskopisk analyse av apoptotisk A549-celler A549-celler ble behandlet med PBS, HB-NPS eller HB-P-NPS, og lysbestråling ble gitt for 0, 2, eller 4 J / cm2. Den dobbeltflekk av DAPI (blå, første kolonne) og annexin V-FITC (grønn, andre kolonne) viser atomkjernerog apoptotiske celler, respektivt. De HB-P-NP-behandlede celler viste sterkere grønn fluorescens-signaler enn de HB-NP-behandlede celler under de samme bestrålingsbetingelser, noe som indikerer en mye høyere fototoksisitet. Scale bar = 200 mikrometer, forstørrelse = 100X. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Fig. 3: FACS-analyse av apoptotisk A549-celler A549-celler ble behandlet med PBS, HB-NPS, eller HB-P-NPS, og lysbestråling ble gitt for 0, 2, eller 4 J / cm2. Cellene ble inndelt i fire grupper. I), både Annexin V-FITC- og PI-negative celler er ansett uskadde, ii) annexin V-FITC-positive og PI-negative cellerer tidlig apoptotisk, iii) begge annexin V-FITC- og PI-positive celler er sent apoptotiske, og iv) annexin V-FITC-negative og PI-positive celler er enten sen apoptotiske eller nekrotiske. I samsvar med den mikroskopiske analysen under de samme bestrålings forhold, HB-P-NP-behandlede celler viste høyere fototoksisitet enn de HB-NP-behandlede celler, og sene apoptotiske celler nivåene ble øket. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4:. Tumorvolum Overvåking av A549-tumorbærende mus på dag 0 og 7, de doble injeksjoner av PBS, fri HB, HB-NPS, og HB-P-NPS ble utført. Den PDT (200 J / cm 2) var utføMed en dag etter hver injeksjon, på dag 1 og 8. De behandlinger viste forskjellige nivåer av terapeutisk effekt, med HB <HB-NPS <HB-P-NPs. På dag 45, viste HB-P-NPS behandlingsgruppe en betydelig redusert tumorvolum sammenlignet med de andre gruppene. Verdier er presentert som gjennomsnitt ± standard avvik (SD; n = 4). Svulsten volum (mm 3) ble definert som (lengde x bredde 2) / 2. Hentet fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 5
Figur 5:. Overflaten Endringer på Tumor Site of A549 Tumor-bærende mus Tumor nettstedene ble overvåket etter doble intravenøse injeksjoner (på dag 0 og 7) i PBS, gratis HB, HB-NPs og HB-P-NPs med 200 J / cm2 lys bestråling en dag etter hver injeksjon (på dagene 1 og 8). Både HB-NPS og HB-P-NPS behandlingsgruppene begynte å vise reaksjoner dagen etter den første PDT. HB-P-NPs behandlingsgruppen viste alvorlig blødning og den raskeste utviklingen av nekrose. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 6
Figur 6:. Histologisk analyse av tumorvev i A549-tumorbærende mus på dag 16, ble histologisk bekreftelse utføres av en H & E flekk av utskårende tumorvev. HB-P-NPs behandlingsgruppen påvist den mest komplette svulst celledød. Scale bar = 500 mikrometer, forstørrelse = 40X. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den mest kritiske trinnet i denne studien er å velge de riktige laser forhold: bølgelengde, kraft og bestråling tid. Den riktige bølgelengden av lys som er egnet for spesifikk fotosensibilisatoren er nødvendig for PDT. Vi brukte en 630-nm laser som var egnet for hypocrellin B. Utgangseffekten ble en annen viktig faktor, som ble satt til 400 mW / cm2 basert på mange pilotstudier. Utgangseffekter som overstiger 400 mW / cm 2 skadede celler eller hudoverflaten av dyrene på grunn av bestråling i seg selv, mens utgangseffekter under 400 mW / cm 2 var for svake til å vise noen terapeutisk effekt. De passende bestrålingstider for in vitro og in vivo studier var 40 sek (16 J / cm 2) og 500 sekunder (200 J / cm 2), henholdsvis. Avstanden fra PDT fiber til cellene eller til tumor vev i dyremodeller var også en kritisk faktor i denne studien. For å dekke hele celle eller tumor flate med denlys, 1 cm ble funnet å være den optimale avstand.

Hvis en annen fotosensibilisator er brukt, kan bruk av riktig bølgelengde av lys maksimere PDT effekt. Utgangseffekten og bestrålingstiden skal være løst gjennom prøving og feiling. Når hudoverflaten begynner å brenne i løpet av lysbestråling, bør utgangseffekten settes lavere. Når tumoroverflaten viser ingen endring i det hele tatt dagen etter PDT, kan det tyde på at det er nødvendig for å øke utgangseffekten.

Denne metoden har noen begrensninger. Første, selv om avstanden fra PDT fiberen til målet er en viktig faktor i denne studien, er det vanskelig å sikre ensartethet. Avstanden kan variere noe fordi det er kontrollert av mennesker. For det andre, for dyremodellen med svulster i organer som lunge, er denne protokollen vanskelig å bruke siden endoskopi er nødvendig og respiratoriske bevegelse uunngåelig.

Selv om kirurgisk reseksjon er den førstealternativ for behandling av lungekreft, har PDT flere fordeler som en ikke-invasiv og ikke-kirurgiske alternativ behandling. Når operasjonen er ikke hensiktsmessig, for eksempel i flere lesjon tilfeller kan PDT være en gyldig alternativ. Dessuten kan preoperativ PDT redusere tumorstørrelsen og redusere graden av kirurgi 17. PDT har færre bivirkninger sammenlignet med kirurgi, strålebehandling, eller endobronchial brachyterapi. I tillegg er PDT irrelevant for mutasjoner som gir resistens overfor strålebehandling eller kjemoterapi 18.

I denne studien har vi foreslått både photosensitizer- og kreft narkotika-innkapslet lungekreft målrettet nanopartikler som en roman fotosensibiliserende levering system for PDT. Dette konseptet kan anvendes på andre fotosensibiliserende midler og anticancer legemidler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Denne studien ble støttet av tilskuddet no. 14-2014-017 fra SNUBH forskningsfond.

Forfatterne står i gjeld til J. Patrick Barron, professor emeritus, Tokyo Medical University og professor II, Seoul National University Bundang Hospital for sin pro bono redigering av dette manuskriptet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Tags

Cancer Research fotodynamisk terapi partikler Lung Cancer fototoksisitet A549 BALB / C Nude Mouse
Anticancer Effekten av fotodynamisk behandling med Lung Cancer-Målrettet Nanopartikler
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter