Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Антираковая Эффективность фотодинамической терапии рака легких с таргетингом наночастицами

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

Примечание: Все протоколы исследования на животных были одобрены Institutional Animal Care и использование комитета Сеульского национального университета Бунданг больницы (BA1308-134 / 072-01) путем.

1. Синтез Гиалуроновая кислота-церамид (HACE)

  1. Солюбилизации 12,21 ммоль гиалуроновой кислоты (HA) олигомера и 9,77 ммоль тетра- н гидроксида -butylammonium (ТБА) в 60 мл бидистиллированной воды (DDW). Смесь перемешивают в течение 30 мин.
  2. Для синтеза DS-Y30 линкер, растворите 8,59 ммоль DS-Y30 керамиды и 9.45 ммоль триэтиламина в 25 мл тетрагидрофурана (ТГФ). Смешать с 8,59 ммоль хлорида 4-chloromethylbenzoyl в ТГФ. Смесь перемешивают в течение 6 ч при 60 ° С.
  3. Растворите синтезированного 8,10 ммоль-ТВА и 0,41 ммоль DS-Y30 компоновщика в смеси ТГФ и ацетонитрила (4: 1, об / об). Перемешивают в течение 5 часов при 40 ° С.
  4. Удаление примесей путем фильтрации с агентом фильтра, и устранить органический растворитель испарением в вакууме. Очищают продукт с применением диализной мембраны (молекулярная масса отсечки: 3,5 кДа) и лиофильной сушке.

2. Подготовка Наночастицы

  1. Растворите 1 мг НВ и 1 мг паклитаксела в 0,5 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и смешивают с 0,5 мл DDW вихрем смешивания в течение 5 мин. Затем, солюбилизации HACE в этой смеси с помощью вихревого перемешивания в течение еще 5 мин.
  2. Для устранения растворителя при нагревании при 70 ° С в течение 4 ч при слабом токе газообразного азота.
  3. Ресуспендируют пленки, состоящей из HACE, HB и паклитаксел с 1 мл DDW. Фильтр с шприцевой фильтр (размер пор 0,45 мкм), чтобы удалить неинкапсулированной наркотики.

3. In Vitro фототоксичности

  1. Усвоение наночастиц в линиях клеток рака легких
    1. Подготовка среды RPMI-1640, содержащих 10% (об / об) фетальной бычьей сыворотки и 1% (вес / об) пенициллин-стрептомицина.
    2. Семенной клеток А549 в 24-луночные планшеты для культивирования клеток при плотности 1 × 10 5 клеток / лунку (трехкратном повторе для каждогогруппа). Инкубируют в течение 24 ч при 37 ° С в увлажненной атмосфере с 5% СО 2 воздуха и 95%.
    3. После прикрепления клеток, удаления среды и промыть клетки путем добавления 1 мл фосфатно-солевым буферным раствором (PBS).
    4. Растворите наночастиц в PBS до конечной концентрации 2 мкМ / мл НВ. Затем, инкубировать клетки с 1 мл PBS, пустых NPs, HB-NPs или HB-P-NPs в каждую лунку в течение 4 часов в темноте.
    5. Удалить весь раствор и промыть клетки путем добавления 1 мл холодного PBS. Повторите этап промывки еще раз. Добавить свежую культуральную среду.
  2. Жизнеспособность клеток для анализа
    1. Поместите культуральный планшет под волокном PDT (с 1 см расстояния от волокна до PDT скважины). Носите лазерные защитные очки и освещают клетки с помощью лазера PDT (630 нм, 400 мВт / см 2) в темноте в течение различных периодов времени: 0, 5, 10, 20, 30 и 40 сек (0, 2, 4 , 8, 12, и 16 Дж / см 2). Затем, инкубировать клетки в течение 24 ч в темноте.
    2. Аспирируйте средних и мыть клетки, добавляя 1 мл холодного PBS. Повторите этап промывки еще раз.
    3. Добавьте 10 мкл цитотоксичность мерного раствора в каждую лунку. Инкубируют в темноте в течение 2 часов.
    4. Измеряют поглощение при 450 нм с использованием микропланшет-ридера.
  3. Микроскопический анализ
    1. Поместите культуральный планшет под волокном PDT (с 1 см расстояния от волокна до PDT скважины). Носите лазерные защитные очки и освещают клетки с помощью лазера PDT (630 нм, 400 мВт / см 2) в темноте при 0, 20 или 40 сек (0, 8, или 16 Дж / см 2). Затем, инкубировать клетки в течение 24 ч в темноте.
    2. Аспирируйте средних и мыть клетки, добавляя 1 мл холодного PBS. Повторите этап промывки еще раз.
    3. Добавляют 50 мкл аннексина V-FITC и 50 мкл 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI, 1,5 мкг / мл). Слегка встряхните планшет и инкубируйте его в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте.
      Примечание: Используйте аннексина V-FIТС из комплекта флуоресцентного микроскопа.
    4. Промывают клетки путем добавления 1 мл холодного PBS. Повторите этап промывки еще раз. Держите клетки в свежей PBS. Определение апоптоза клеток с помощью световой микроскопии при 100-кратном увеличении.
  4. сортировка флуоресценция активированных клеток (FACS) анализ
    1. Поместите культуральный планшет под волокном PDT (с 1 см расстояния от волокна до PDT скважины). Носите лазерные защитные очки и освещают клетки с помощью лазера PDT (630 нм, 400 мВт / см 2) при 0, 20 или 40 сек (0, 8, или 16 Дж / см 2). Затем, инкубировать клетки в течение 24 ч в темноте.
    2. Аспирируйте средних и мыть клетки, добавляя 1 мл холодного PBS. Повторите этап промывки еще раз.
    3. Ресуспендируют клеток в 1 мл 1 × буфера для связывания (развести 1 часть 10 - кратного буфера для связывания, 0,1 М HEPES / NaOH (рН 7,4), 1,4 М NaCl и 25 мМ CaCl 2 до 9 частей дистиллированной воды) и передачи в количестве 100 мкл раствора образца до 5-млкультура трубки.
    4. Добавьте 5 мкл аннексина V-FITC и 5 мкл пропидийиодидом (PI). Аккуратно вихревой трубки и инкубировать в течение 15 мин при комнатной температуре (RT) в темноте. Добавить 400 мкл 1 × буфера для связывания.
      Примечание: Используйте аннексина V-FITC и PI из комплекта флуоресцентного микроскопа.
    5. Определение апоптотических клеток с помощью FACS 14. Лазерные возбуждения линии ПИ и аннексина V-FITC являются 488 нм и 635 нм соответственно. Измерение флуоресценции PI и аннексина V-FITC при 610 ± 20 нм и 660 ± 20 нм, соответственно. Собрать полученные клетки на цитометр потока на 10000 событий.

4. В естественных условиях противораковый эффективность в опухоли мышей

  1. Рак легких индуцированных модель мыши
    1. Готовят 1 × 10 6 клеток A549 в 0,1 мл среды RPMI-1640; держать его на льду.
    2. Обезболить мышей с IP-инъекции ксилазина и смеси tiletamine и zolazepam (1: 2, 1 мл /кг). Подтвердите надлежащее обезболивание, осторожно щипать небольшой складки кожи мыши. Используйте ветеринара мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
      Примечание: Если не наблюдается никакого движения, животное достаточно наркозом, чтобы начать эксперименты.
    3. Вводят клетки подкожно в левый фланги BALB / C мужской голых мышей (6 - 7 недель, 20 - 22 г).
    4. Продолжайте наблюдать мышей, пока они не начинают двигаться по клетке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточное для поддержания грудины лежачее. Не возвращать животное, которое перенес операцию на компании других животных, пока он не полностью восстановилась. Держите мышей под конкретного патогена (SPF) условиях.
    5. Измерьте размер опухоли циркулем каждый день. Рассчитать объем опухоли (мм 3), (длина × ширина 2) / 2. Когда размер опухоли достигает приблизительно 200 мм 3 по объему, начать эксперимент.
    6. Исследование эффективности противоопухолевых
      1. Случайным образом разделить мышей на 4 группы (n = 10 в каждой группе).
      2. Обезболить мышей с IP-инъекции ксилазина и смеси tiletamine и zolazepam (1: 2, 1 мл / кг). Подтвердите надлежащее обезболивание, осторожно щипать небольшой складки кожи мыши. Используйте ветеринара мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
        Примечание: Если не наблюдается никакого движения, животное достаточно наркозом, чтобы начать эксперименты.
      3. Растворите наночастиц в PBS до конечной концентрации 2 мг / мл НВ. Вводят PBS, свободный HB, HB-NPS или HB-P-NPS через хвостовую вену (2 мг / кг в качестве HB) дважды в дни 0 и 7.
      4. Продолжайте наблюдать мышей, пока они не начинают двигаться по клетке.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточное для поддержания грудины лежачее. Не возвращать животное, которое не прооперированы в компании других животных до полноговыздоровел. Держите клетки темные и при определенных условиях SPF.
      5. 24 ч после каждой инъекции, анестезию мышей с IP-инъекции ксилазина и смеси tiletamine и zolazepam (1: 2, 1 мл / кг). Подтвердите надлежащее обезболивание, осторожно щипать небольшой складки кожи мыши. Используйте ветеринара мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
        Примечание: Если не наблюдается никакого движения, животное достаточно наркозом, чтобы начать эксперименты.
      6. Поместите сайт опухоли под волокна PDT (с 1 см расстояния от волокна до ФДТ опухоли). Носите очки лазерной безопасности, выключите выключатель, и осветить опухоль с помощью лазера PDT (630 нм, 400 мВт / см 2) в течение 500 сек (200 Дж / см 2) дважды в дни 1 и 8.
      7. Продолжайте наблюдать мышей, пока они не начинают двигаться по клетке. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточное для поддержания грудины лежачее. Не возвращать животное, которое имеет undergonе хирургии в компании других животных, пока полностью не выздоровел.
      8. Держите клетки в условиях SPF. Поддерживать клетки в темноте в течение 24 ч после лазерной обработки.
      9. Визуально контролировать объем опухоли и изменения в опухоли ежедневно. Измерьте размер опухоли с суппортами, и рассчитать объем , как и (длина × ширина 2) / 2 (мм 3). Сфотографируйте опухолевых сайтов каждый день, чтобы проверить наличие поверхностных опухолей изменений после ФДТ.
      10. На 16-й день, пожертвовать пять мышей в группе терминальными анестезии с использованием изофлуран.
      11. С помощью пинцета и ножниц, вырезать наружную оболочку и подвергать опухоли 15. Осторожно собрать их. Закрепить их в 10% раствор формалина, встраивать их в парафин, и окрашивают их гематоксилином и эозином (H & E) для гистологического анализа 16.
      12. Через 45 дней мониторинга, пожертвуйте оставшихся мышей терминальными анестезии с использованием изофлуран.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Мы подготовили как HB-NPS и HB-P-NPS с методами, упомянутыми выше. Средние диаметры HB-NPs и HB-P-NPs были 220,9 ± 3,2 нм и 211,9 ± 1,6 нм, соответственно.

Жизнеспособность клеток в клетках А549 после 4 ч инкубации с PBS, пустыми NPs, HB-NPs и HB-P-NPs с последующим облучением светом ( от 0 до 16 Дж / см 2), показан на рисунке 1. Без света группа лечения HB-NP не показали цитотоксичность вообще, в то время как HB-P-NP-обработанные клетки показали 81,28 ± 0,14% жизнеспособность клеток. Это может быть связано с противораковым действием паклитаксела, который был выпущен из наночастиц. При ФДТ, жизнеспособность клеток была уменьшена в зависимости от времени экспозиции света в обоих HB-NP- и HB-P-NP-обработанных клеток. НВ-P-NP-обработанные клетки показали увеличение фототоксичности, чем группа НВ-NPS при тех же условиях облучения. Когда 16 Дж / см 2 облучения было дано лишь 7,52 ± 0,38% клеток выжили в группе лечения НВ-Р-NP.

Последовательные результаты были визуализированы с аннексина V-FITC окрашивания (рис 2). ФДТ индуцированные апоптотических клеток окрашивали аннексина V-FITC, экспрессирующих зеленую флуоресценцию. Самый сильный зеленый флуоресцентный сигнал был обнаружен в НВ-Р-NP-обработанных клеток при тех же самых условиях облучения.

Этапы PDT-индуцированных апоптотических клеток были классифицированы с помощью проточной цитометрии. С помощью двойного окрашивания с аннексина V-FITC и PI, ранних апоптотических клеток (только аннексина V-FITC положительный), в конце апоптотических клеток (как аннексина-V и PI положительным) и некротических клеток (только PI положительный) были выделены. В тех же условиях PDT, часть поздних апоптотических клеток была увеличена в HB-P-NP-обработанной группы (рисунок 3).

"ВОК: Keep-together.within-страницу =" 1 "> В естественных условиях роста опухоли в легких мышей с опухолями после двойной внутривенной инъекции PBS, свободный HB, HB-Соседства и HB-P-NPs с последующим облучением светом является показано на рисунке 4. поверхности опухолевых участков были также исследованы (рисунок 5). НВ-P-NP-обработанных мышей показали самые быстрые реакции, в том числе кровоизлияния и некроза, а самый медленный рост опухоли. Кроме того, гистологический анализ подтвердил большинство поврежденные клетки опухоли в группе лечения НВ-Р-NP (рисунок 6).

Рисунок 1
Рисунок 1:. В пробирке ФОТОТОКСИЧНОСТЬ клеток А549 А549 клетки обрабатывали PBS, пустыми NPs, HB-NPs или HB-P-NPs и облучения светом было дано в течение 0, 5, 10, 20, 30 или 40 сек (0, 2, 4, 8, 12, или 16 Дж / см 2). Под тон же время облучения, группа лечения HB-P-NP показали более высокую фототоксичности, чем в группе лечения HB-NP. Значения выражены в виде средних значений ± стандартные отклонения (SD, n = 3). *** Р <0,001, по сравнению с PBS-обработанной группе. ## Р <0,01, ### р <0,001, по сравнению с группой лечения НВ-NP. Адаптированный Chang и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

фигура 2
На рис . 2: Клетки А549 , микроскопический анализ апоптотических клеток А549 обрабатывали PBS, HB-NPs или HB-P-NPs, и облучение светом было дано на 0, 2, или 4 Дж / см 2. Двойное пятно DAPI (синий, первая колонка) и аннексина V-FITC (зеленый, второй столбец) указывают на ядраи апоптотических клеток, соответственно. НВ-P-NP-обработанные клетки показали более сильные зеленые сигналы флуоресценции, чем НВ-NP-обработанных клеток при тех же условиях облучения, что указывает на гораздо более высокую фототоксичности. Шкала бар = 200 мкм, коэффициент увеличения = 100X. Адаптированный Chang и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3
На рис . 3: А549 FACS - анализ апоптотических клеток А549 обрабатывали PBS, HB-NPs или HB-P-NPs, и облучение светом было дано на 0, 2, или 4 Дж / см 2. Клетки были разделены на четыре группы. I) Оба аннексина V-FITC- и PI-отрицательные клетки считаются неповрежденные, II) аннексина V-FITC-положительные и PI-негативных клетокявляются раннее апоптическая, III) и аннексина V-FITC- и PI-позитивные клетки задерживаются апоптическая, и IV) аннексина V-FITC-отрицательных и PI-положительные клетки либо в конце апоптическая или некротической. В соответствии с микроскопическим анализом, при тех же самых условиях облучения, НВ-Р-NP-обработанные клетки показали более высокую фототоксичности, чем НВ-НП-обработанных клетках, и поздние апоптотических уровни клеток увеличилось. Адаптированный Chang и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 4
Рис . 4: Опухоль Объем Мониторинг А549 опухоли мышей в дни 0 и 7 двойных инъекций PBS, свободный HB, HB-NPS и HB-P-NPS были выполнены. PDT (200 Дж / см 2) был perforмед 1 день после каждой инъекции, в дни 1 и 8. лечения показали различные уровни терапевтического эффекта, при HB <HB-NPS <HB-P-NPS. На 45-й день группа лечение НВ-Р-ИГ, показали значительное снижение объема опухоли по сравнению с другими группами. Значения представлены в виде средних значений ± стандартные отклонения (SD, п = 4). Объем опухоли (мм 3) была определена как (длина × ширина 2) / 2. Адаптированный Chang и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 5
Рис . 5: Поверхность Изменения на опухолевые Сайт А549 опухоли мышей опухолевые участки наблюдали после двойных внутривенных инъекций (в дни 0 и 7) PBS, свободный HB, HB-Соседства и HB-P-NPs с 200 Дж / см 2 облучение светом через 1 день после каждой инъекции (в дни 1 и 8). Оба HB-NPs и группы лечения HB-P-ИГ начал показывать реакций на следующий день после первого ФДТ. Группа лечения HB-P-NPs показал сильную кровоизлияние и самое быстрое развитие некроза. Адаптированный Chang и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 6
Рис . 6: гистологический анализ опухолевой ткани в А549 мышей-опухоленосителей На 16 -й день, гистологическое подтверждение было выполнено с помощью H & E пятна отсеченных тканей опухоли. Группа лечения HB-P-NPs продемонстрировал наиболее полную гибель опухолевых клеток. Шкала бар = 500 мкм, увеличение = 40X. Взято из Чанг и др. 10 Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Самым важным шагом в данном исследовании, заключается в выборе правильных лазерных условий: длины волны, мощности и времени облучения. Надлежащая длина волны света, подходящей для конкретного фотосенсибилизатора необходимо для ФДТ. Мы использовали 630-нм лазер , который был подходящим для гипокреллин В. Выходная мощность является еще одним важным фактором, который был установлен на уровне 400 мВт / см 2 на основе многих экспериментальных исследований. Выходная мощность превышает 400 мВт / см 2 поврежденные клетки или поверхность кожи животных из - за самого облучения, когда выход силы ниже 400 мВт / см 2 были слишком слабы , чтобы показать какой - либо терапевтический эффект. Соответствующие времена облучения для в пробирке и в естественных условиях исследования были 40 сек (16 Дж / см 2) и 500 сек (200 Дж / см 2), соответственно. Расстояние от волокна PDT к клеткам или опухолевых тканях животных моделях было также решающим фактором в данном исследовании. Для того, чтобы покрыть всю поверхность клетки или опухоли ссвет, 1 см было установлено, что оптимальное расстояние.

Если другой фотосенсибилизатора применяется, использование соответствующей длины волны света может максимизировать эффективность ФДТ. Время выходной мощности и облучения должна быть исправлена ​​путем проб и ошибок. Когда поверхность кожи начинает гореть во время облучения светом, выходная мощность должна быть ниже. Когда поверхность опухоли не показывает вообще никаких изменений на следующий день после PDT, это может указывать на необходимость увеличения выходной мощности.

Этот метод имеет некоторые ограничения. Во-первых, хотя расстояние от волокна ФДТ до цели, является важным фактором в этом исследовании, что трудно обеспечить однородность. Расстояние может изменяться незначительно, поскольку она находится под контролем человека. Во-вторых, для модели животных с опухолями в органах, таких как легкие, этот протокол трудно применять, так как эндоскопическое необходимо и дыхательное движение неизбежно.

Хотя хирургическая резекция является первымвариант для лечения рака легких, PDT имеет ряд преимуществ как неинвазивный и нехирургических альтернативного лечения. Когда операция не подходит, например, в нескольких случаях поражения, ФДТ может быть допустимым вариантом. Кроме того , перед операцией ФДТ может уменьшить размер опухоли и уменьшить степень хирургического вмешательства 17. PDT имеет меньше побочных эффектов по сравнению с хирургическим вмешательством, лучевой терапией или эндобронхиальным брахитерапии. Кроме того, ФДТ не имеет отношения к мутации , которые обеспечивают устойчивость к лучевой терапии или химиотерапии , 18.

В данном исследовании мы предложили как photosensitizer- и противораковые лекарства, инкапсулированных рак легких целевых наночастиц в качестве новой системы доставки фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии. Эта концепция может быть применена к другим фотосенсибилизаторов и противоопухолевых препаратов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Это исследование было поддержано грант №. 14-2014-017 из Фонда SNUBH Research.

Авторы признательны Дж Патрик Баррон, почетный профессор Токийского медицинского университета и адъюнкт - профессор Сеульского национального университета Бунданг больницы для его про боно редактирование этой рукописи.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Tags

Cancer Research выпуск 118 фотодинамическая терапия Nanoparticle рак легких фототоксичности А549 BALB / C Nude Mouse
Антираковая Эффективность фотодинамической терапии рака легких с таргетингом наночастицами
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter