Summary
هنا نقدم طريقة جديدة لقياس دقة الاختلافات في درجة الحرارة الجسم في تاق الجهازية السلبي (PSA) والحساسية الغذائية الماوس نماذج استخدام حرارة الأشعة تحت حمراء. تم تكرار هذا الإجراء بدقة في السابق بي إس أية نتائج.
Abstract
قياس درجة حرارة الجسم الماوس من الأهمية بالنسبة للتحقيق في الحساسية وأعراض تحسسي. المسابر المستقيم لقراءات درجة الحرارة الشائعة، وأنها قد أثبتت أن تكون دقيقة ولا تقدر بثمن في هذا الصدد. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب لقياس درجة الحرارة الفئران أن تخديره من أجل إدراج التحقيق دون أذى للحيوان. وهذا يحد من القدرة على مراقبة أخرى تعمل الماوس في وقت واحد. من أجل التحقيق الأخرى تعمل أثناء قياس درجات الحرارة، المسابر المستقيم ليست مثالية، والمطلوب هو أسلوب آخر. هنا، علينا الأخذ بأسلوب موسع لقياس درجة الحرارة التي التعويضي الشرط للتخدير الماوس مع الحفاظ على موثوقية متساوية لتحقيقات المستقيم في قياس درجة حرارة الجسم. ونحن نستخدم حرارة الأشعة تحت حمراء التي يكشف الجسم درجات الحرارة السطحية في يتراوح بين 2 و 150 مم. هذا الأسلوب لقياس درجة حرارة الجسم النجاح في تكرار موثوق اتجاهات تغير درجة الحرارة أثناء تجارب الحساسية المفرطة نظام سلبي في الفئران. ونحن تبين أن درجات الحرارة السطحية في الجسم حوالي 2.0 درجة مئوية أقل من قياسات مسبار المستقيم، ولكن درجة انخفاض درجة الحرارة ويتبع نفس الاتجاه. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لمراقبة الفئران في نموذج الحساسية غذائية لتقييم مستويات درجة الحرارة والنشاط في نفس الوقت.
Introduction
تم قياس درجة حرارة الجسم جزءا أساسيا من رصد آثار أعراض تحسسي في الحيوان نماذج1،2. الاختلافات في درجة الحرارة قيست تقليديا بالحرارة المسبار المستقيمي في الفئران3،4. مع هذه القياسات، محققين موثوق قد يصور الاختلافات في درجة الحرارة بين المتغيرات؛ ومع ذلك، هذا الأسلوب هو إجراء يستغرق وقتاً طويلاً ويسبب الضيق للفئران، التي يمكن أن تزيد من درجة حرارة الجسم الأساسية. سبر المستقيم يمكن أيضا أن يسبب الإصابة وتمزق الأغشية المخاطية3. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن تخديره الفئران من أجل إدراج معاملة إنسانية المسبار المستقيمي لقياس درجة الحرارة3. هذه عملية بطيئة، ويحظر بقياس درجات الحرارة المتعاقبة خلال فترة قصيرة من الزمن. وعلاوة على ذلك، لا يمكن ملاحظة تعمل نشاط الفئران خلال هذا الوقت حتى المخدر هو تماما بليت، وهي عملية تستغرق وقتاً طويلاً آخر. في الآونة الأخيرة، استخدمت أساليب أخرى يمكن الاعتماد عليها لقياس درجة حرارة الجسم العلامات مرسل الأشعة تحت الحمراء السلبية مزروع تحت الجلد أو أجهزة البث الإذاعي التي تشمل درجة حرارة استشعار3،،من56. على الرغم من أنها مقبولة كممارسة مثالية ببعض الباحثين، لا يتم استخدام هذه الأساليب على نطاق واسع بسبب ارتفاع التكاليف الأولية والشدة للفئران، بسبب العمليات الجراحية زرع جهاز استشعار درجة الحرارة تحت الجلد أو جزء آخر من الجسم.
من أجل إثبات أن فرق في درجة حرارة انعكاس دقيق للأعراض في مرض نموذج1،2، الفئران يجب أن تكون مستيقظا أثناء قياس درجة الحرارة وتكون قادرة على العودة إلى نشاطهم المظهرية العادية مباشرة قبل وبعد القياس. وتحقيقا لهذه الغاية، سعينا لأسلوب الذي يمكن أن يتحقق هذا.
وكان هدفنا دقة وبتكلفة زهيدة قياس درجة حرارة الجسم الماوس، دون الحاجة للتخدير ودون فرض قيود على النشاط، لتمكين المراقبة السلوكية تعمل أثناء وبعد الوقت لقياس درجة الحرارة. ولتحقيق هذا الهدف، كان من الواضح أن تقنية أقل الغازية من يسبر درجة حرارة المستقيم القياسية المطلوبة. استخدمت الأشعة تحت الحمراء الحرارة لعدة عقود في الطب السريري، لا سيما في طب الأطفال، للحصول على قراءات دقيقة درجة الحرارة. وكان أسلوب بديل التي سمحت للأطباء بسرعة ودقة الحصول على قياسات درجات الحرارة عند الرضع والأطفال صعب أن نشاط متحركة. تنفيذ هذا الأسلوب نفسه في الفئران، وقد تطورت طريقة ناجحة للحصول على درجات حرارة دون تخدير. الأهم من ذلك، نحن تبين أن هذه الطريقة قادرة على تكرار نتائج تاق المنهجية السلبية الراسخة فيما يتعلق بالتغيرات في درجات الحرارة، في حين يجري أيضا قادرة على مراقبة نشاط الماوس في جميع أنحاء القياس. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لتقييم درجات حرارة الجسم من الفئران حساسية الغذاء، أثناء التحقيق في نفس الوقت الأعراض الأخرى، لإثبات أن درجة حرارة الجسم هو في الواقع انعكاسا دقيقا لمستوى النشاط والنمط الظاهري عموما من الماوس.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
بموافقة جميع التجارب على الحيوانات بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة للمعهد لاخويا للحساسية وعلم المناعة.
1-الماوس قياس درجة حرارة الجسم أثناء أنيسثيتيزاتيون
- ضع الماوس في مربع تحريض تخدير. تخدير باستخدام التدفق 1 لتر في الدقيقة للأوكسجين مع إيسوفلوراني 5%.
ملاحظة: أنيسثيتيزيشن هو تأكيد عند الماوس يتوقف عن الحركة الطوعية وكانت غير متحركة لأكثر من 30 س. بدلاً من ذلك، رصد معدل التنفس، ومجرد التنفس الفئران في التنفس 1 لكل 2 s أو لم يعد، هو تأكيد أنيسثيتيزيشن. - أمسك الماوس بمؤخر العنق بالسبابة والإبهام وعقد الذيل مع إصبع الخنصر من أجل فضح أسفل البطن.
- ضع جهاز استشعار الأشعة تحت الحمراء الحرارة أسفل أسفل البطن أثناء الضغط بالماوس مع الهيئة موازية للأرض.
ملاحظة: يجب أن يكون شقة السطح الخارجي للحرارة (لا على سطح جهاز الاستشعار) حوالي 2 – 5 ملم بعيداً عن سطح البطن. قياس هذه النتائج نسخ متماثل لدرجات الحرارة في حين لم يتم تخديره الفئران (كما هو موضح في القسم 2). من المهم تحديد موقع الهدف من البطن. هدف بين اثنين حلمات العليا يسمح لنتائج متسقة. - اضغط على الزناد لقياس درجة الحرارة. ضمان إجراء الماوس والحرارة مستقرة.
2. الماوس قياس درجة حرارة الجسم دون مخدر
- التقاط الماوس في منتصف الذيل.
-
تعرض البطن للماوس.
- تسمح الماوس إلى التمسك بسطح مستقيم الحافة، مثل الشفة قفص مفتوحة أو أعلى القفص مع فوريباوس به.
ملاحظة: هذا يسمح الماوس لتمتد في الجزء العلوي من الجسم، وتعرض في البطن. - بدلاً من ذلك، السماح للماوس على الإبقاء على التوالي-الحافة العلوية من الحرارة وجعل الماوس الجلوس على السطح الخارجي للحرارة مع البطن شقة فقط على مدى استشعار الأشعة تحت الحمراء.
ملاحظة: أي وقت يستريح آثار أقدام هند على سطح الحرارة، ضمان أن القدمين هي عدم عرقلة المجس من سطح البطن. الحرارة مع عرقلة القدم سيتم قياس درجة حرارة أقل من البطن.
- تسمح الماوس إلى التمسك بسطح مستقيم الحافة، مثل الشفة قفص مفتوحة أو أعلى القفص مع فوريباوس به.
- اضغط على الزناد لقياس درجة الحرارة.
ملاحظة: الفئران تميل إلى التحرك؛ العناية في قياس نفس الموقع من الجسم دائماً بأخذ قياسات درجات الحرارة عند الفئران نسبيا أقل المتنقلة.
3. تاق النظامية السلبي7
-
اليوم 0: توعية مع الغلوبولين المناعي ه (IgE).
- إعداد 200 ميليلتر (للماوس) لمكافحة--دينيتروفينيل (DNP) فريق الخبراء الحكومي الدولي بتركيز 100 ميكروغرام/مل في برنامج تلفزيوني.
- إينترابيريتونيلي حقن 200 ميليلتر لفريق الخبراء الحكومي الدولي مكافحة--دينيتروفينيل (DNP) أعد الخطوة 3.1.1 أو برنامج تلفزيوني فقط (برنامج تلفزيوني فقط التحكم بسلبية). استخدام إبرة ز 26 للحقن. إجراء الحقن الأفقي فقط إلى خط الوسط، تقريبا بين حلمات أقل شأنا آخر اثنين.
-
اليوم الأول: الحث على الحساسية المفرطة مع إدارة التخطيط الوطني يمتلكهما.
- إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من يمتلكهما التثقيف بتركيز 10 ملغ/مل في 0.9% كلوريد الصوديوم.
- تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
- قياس درجة حرارة الجسم باستخدام الأسلوب الموصوفة في الخطوة 1.
- حقن الوريد 100 ميليلتر من إدارة التخطيط الوطني-يمتلكهما إعدادها في الخطوة 3.2.1. استخدام إبرة 30 غم للحقن. إجراء الحقن في الجيوب الوريدية ريتروربيتال. أدخل الإبرة على الجانب الآنسي للعين بزاوية ضحلة، تسعى وراء العين.
- بعد الحقن، وضع الفئران في أقفاص فردية. ضمان أن الفئران التعافي من التخدير. نلاحظ أن توقظ وتصبح متحركة طوعا.
- قياس درجة حرارة الجسم باستخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة ومراقبة نشاطهم كل 10 دقائق لمدة 70 دقيقة.
4-نموذج الماوس للغذاء الحساسية8،9
ملاحظة: يظهر التخطيطي في الشكل 2.
-
اليوم 0: توعية الفئران مع البويضات/الشب.
- إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من البويضات (0.5 ملغ/مل) والألمنيوم (10 مغ/مل) معا في برنامج تلفزيوني. دوامة في الإعداد منخفضة لمدة 30 دقيقة.
- تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
- باستخدام إبرة ز 26، إينترابيريتونيلي بحقن كل الماوس مع 100 ميليلتر من خليط البويضات/الشب إعدادها في الخطوة 4.1.1.
ملاحظة: دوامة الخليط البويضات/الشب مرة أخرى، بإيجاز قبل كل حقنه، لأفضل ضمان مخلوط المتجانس. راجع الخطوة 3.1.3 للحصول على التفاصيل في موقع الحقن. - بعد الحقن، وضع الفئران في اقفاصها الأصلية. ضمان أن الفئران التعافي من التخدير. نلاحظ أن توقظ وتصبح متحركة طوعا.
-
اليوم 14: القيام توعية ثانية مع البويضات/الشب.
- كرر الخطوات 4.1.1 و 4.1.2 4.1.3.
-
أيام 28-46: تحدي الفئران مع البويضات كل يوم.
- إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من البويضات بتركيز 250 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني.
ملاحظة: الخليط ينبغي أن تدلي بها هزاز جيئة وذهابا برفق باليد بدلاً من دوامة للتقليل من تشكيل فقاعة.- في حالة استخدام مثبطات الحساسية الغذائية، تعد مثبطات9. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) للمانع بتركيز 1 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني. وهذا ما يسمح تسليم 100 ميكروغرام من مثبط لكل الماوس.
ملاحظة: لا تتجاوز 100 ميليلتر من مثبط للماوس، كما الفئران فقط قادرة على التعامل مع 200 ميليلتر من حجم تزقيمية مدتها الإجمالية خلال يوم واحد التحديات. ما يلزم للبويضات والتحدي، فضلا عن 100 ميليلتر، 100 ميليلتر هو الحد الأقصى الموصى بها وحدة التخزين لاستخدام المانع.
- في حالة استخدام مثبطات الحساسية الغذائية، تعد مثبطات9. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) للمانع بتركيز 1 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني. وهذا ما يسمح تسليم 100 ميكروغرام من مثبط لكل الماوس.
- تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
- شفويا تزقيمية كل الماوس مع 100 ميليلتر من البويضات الحل (25 ملغ البويضات في 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني جافاجيد الواحدة والماوس) التي تم إعدادها في الخطوة 4.3.1.
- في حالة استخدام مثبطات، تستخدم نفس التقنيات الموضحة في الخطوات التالية من أجل تزقيمية المانع (أو مراقبة برنامج تلفزيوني) أعد الخطوة 4.3.1.1 30 دقيقة قبل التحدي البويضات. بعد 30 دقيقة، انتقل إلى الخطوة التالية.
- استخدام إبرة تزقيمية مع حقنه 1 مل. يستغرق 100 ميليلتر من البويضات في المحاقن.
- أدخل الإبرة في الفم. تشير الإبرة نحو اليسار أو الجانب الأيمن من الحلق، الشريحة، ثم بلطف الإبرة عن طريق المريء. حقن 100 ميليلتر من البويضات.
ملاحظة: للتأكد من أن الإبرة ليس في القصبة الهوائية، مراقبة نشطة التنفس قبل حقن البويضات. كما ستلقى مقاومة إدخال الإبرة مبكرا إذا كان قد دخل القصبة الهوائية بدلاً من المريء.
- وضع الفئران في اقفاصها الفردية. لسهولة مراقبة نوعية البراز، استخدام الأقفاص دون فراش.
- ضمان التعافي من التخدير. ويلاحظ أن الفئران توقظ وتصبح متحركة طوعا.
- قياس درجات حرارة الجسم من الفئران في تيميبوينتس 10 و 20, 40، و 60 دقيقة باستخدام الأسلوب الموصوفة في المقطع 2.
- إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من البويضات بتركيز 250 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تاق الجهازية السلبي: لحقن رابعا، أسبوع 10 القديمة من الإناث بالب/ج الفئران تم تخديره. قبل الحقن، قمنا بقياس على درجة حرارة الجسم (فيديو 1) كما هو موضح في الخطوة 1. ويبين الشكل 1 الاتجاه درجة الحرارة لكل السكان بعد حقن الرابع. فريق الخبراء الحكومي الدولي توعية الماوس أظهر انخفاض درجة حرارة قصوى 3.0 درجة مئوية في 20 دقيقة، في حين كان الماوس التحكم برنامج تلفزيوني بانخفاض 1.1 درجة مئوية كحد أقصى في 20 دقيقة7. وعلاوة على ذلك، قيمت عشرات النشاط طوال هذه العملية، استناداً إلى تنقل كل الماوس. ولوحظت الفئران أولاً دون أي تحريض. ثم أنها لوحظت مع الانفعالات قبل إدخال اليد للمقيم في القفص وجعل الاتصال لينة مع الماوس. وبناء على ردود أفعالهم، الفئران يتم تقييمها وسجل على مقياس من 1 إلى 3. نقاط 1 يشير إلى ماوس غير متحرك أو المحمول الحد الأدنى مع أو بدون الانفعالات؛ نقاط 2 يشير إلى ماوس متحرك دون الانفعالات وهو المحمول مع الانفعالات دون إجراء حركات مراوغة سريعة؛ ويشير إلى نقاط 3 ماوس متحركة أو متحرك دون الانفعالات والمتنقلة مع الانفعالات ويجعل حركات مراوغة سريعة. فيديو 2 و 3 أمثلة للفريقين التي تجسد أساليب قياس درجة الحرارة فضلا عن قياسات مستوى النشاط المقابلة. الاستخدام للحرارة الأشعة تحت الحمراء يسمح لقياسات درجات الحرارة دون تخدير، الذي يسمح بدوره لتقييم النمط الظاهري السلوكية قبل وأثناء وبعد قياس درجة الحرارة؛ على النقيض من ذلك، تحقيق المستقيم تقليدية تتطلب التخدير وذلك يحول دون أي تقييم السلوكية خلال دقائق عدة قياسات درجات الحرارة المحيطة.
نموذج الفأر من الحساسية الغذائية8: التخطيطي للطراز الماوس هو هو مبين في الشكل 2. الفئران هي الإناث بالب/ج الفئران للإعمار 8 إلى 10 أسابيع من العمر في الوقت للتوعية. ولوحظت الفئران في 10 و 20, 40، و 60 دقيقة بعد كل التحدي لدرجة حرارة الجسم والنشاط. يبين الشكل 3 لتغيير درجة الحرارة نتيجة ممثل أثناء التحدي 7. وأظهرت الفئران انخفاض درجة حرارة قصوى في 10 دقيقة؛ ولذلك، استخدمت في درجات الحرارة 10 دقيقة ترتبط بدرجات حرارة الجسم في مستويات النشاط 10 دقيقة (مع سجل استناداً إلى المعايير المبينة أعلاه). درجة النشاط ودرجة حرارة قطره أظهرت وجود ترابط يعتد به إحصائيا (الشكل 4). كما هو مذكور في المقطع تاق الجهازية السلبي، الملاحظات السلوكية تم إجراؤها بسبب عدم توافر التخدير، واستخدم مقياس الحرارة الأشعة تحت الحمراء. على النقيض من ذلك، أن المسابير المستقيم إحباط أية ملاحظات سلوكية أو التقييمات خلال الوقت لقياس درجة الحرارة. أي وقت أن درجة الحرارة وغيرها من الأنشطة التي يجب أن تسجل تعمل، ضروري للاستفادة من نظام لقياس درجة الحرارة التي لا تتطلب التخدير.
الشكل 1 : تاق الجهازية الكامن في الفئران بالب/ج. اثنين من الفئران كانت الملكية الفكرية حقن بالتثقيف ضد فريق الخبراء الحكومي الدولي في اليوم 0، ثم رابعا حقن المحلول الملحي العادي أو التثقيف يمتلكهما في يوم 1. وتم قياس درجة حرارة الجسم استخدام حرارة الأشعة تحت حمراء قبل الحقن وكل 10 دقيقة بعد الحقن لدقيقة 70 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : الغذاء الحساسية الماوس نموذج تخطيطي. في اليوم 0، كانت الفئران بالب/ج وعي الملكية الفكرية مع البويضات والألمنيوم، ومرة أخرى في يوم 14. في يوم 28، 30 دقيقة قبل كل التحدي، كانت الفئران جافاجيد شفويا مع مراقبة برنامج تلفزيوني أو مثبط الحساسية غذائية (طالبات-2CArecombinant الهستامين-الإفراج عن عامل مع سيستينيس اثنين في تبادل مع الانينيس)9. ثم طعن الفئران ig بملغ 25 من البويضات. وأجريت التحديات كل يوم للتحديات 9. وقد لوحظت الفئران لقياس درجة حرارة الجسم والنشاط وسجل 10، 20 و 40 و 60 دقيقة بعد التحدي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : نموذج الحساسية الغذائية في الفئران بالب/ج. تغيير درجة الحرارة بعد التحدي البويضات 7 كان يرصدها الحرارة الأشعة تحت الحمراء. يتم إظهار النتائج النموذجية من تجارب مستقلة على الأقل أربعة (* *، ف < 0.01 بين العلاجات برنامج تلفزيوني و 2CA باختبار t للطالب؛ ns: ليس كبيرا). أشرطة الخطأ = sem. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : العلاقة بين النشاط ودرجة الحرارة في 10 دقيقة في تجارب الحساسية الغذائية- وتعكس النتائج القياسات المأخوذة من 4 مجموعات منفصلة من التجارب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الفيديو 1: هيئة قياس درجة الحرارة في حين يتم تخديره من الفئران. يمكن أن تؤخذ قياسات درجة حرارة الجسم في الفئران مع أو بدون تخدير. لقياسات متسقة، من الضروري أن تهدف دائماً الحرارة في نفس الموقع في الجسم. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
الفيديو 2: مستوى النشاط في 40 دقيقة بعد حقن يمتلكهما إدارة التخطيط الوطني الرابع- الفئران لوحظت دون إثارة الشغب في البداية، ثم مع الانفعالات. بناء على ردود أفعالهم، قيمت الفئران وسجل على نطاق نشاط من 1 إلى 3. الماوس إلى اليسار (ماوس توعية مكافحة التثقيف) تعطي درجة 1، بينما تعطي الماوس على اليمين (برنامج تلفزيوني التحكم الماوس) نقاط 3. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
الفيديو 3: هيئة قياس درجة الحرارة في 40 دقيقة بعد حقن يمتلكهما إدارة التخطيط الوطني الرابع- وهذا الرقم يوضح قدرة الحرارة الأشعة تحت الحمراء بدقة وقياس درجة حرارة الجسم دون أنيسثيتيزيشن نونينفاسيفيلي. وعلاوة على ذلك، تعكس نشاط عشرات تظاهروا في الفيديو 2 درجة انخفاض درجة الحرارة تقاس في هذا الفيديو. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
4 فيديو: أخطاء في درجة حرارة القراءة بهند مخلب العرقلة من أجهزة الاستشعار- هذا الفيديو يوضح الفرق في درجات الحرارة مع أو بدون القدم داخل محيط الاستشعار. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
بروتوكول وصف أنشئت بهدف قياس درجة حرارة الجسم دون استخدام التخدير. وعلى الرغم من سهولة نسبية مع درجة الحرارة التي يمكن الحصول على قراءات، هناك العديد من المحاذير التي تستوعب هذه التقنية، بالإضافة إلى آثار أكثر وضوحاً مثل التعامل مع الإجهاد ودرجات الحرارة المحيطة مختلفة.
أولاً، بغية الحفاظ على قراءات درجة الحرارة متسقة في جميع أنحاء هذه التجربة، يجب أن سلفا الموقع حيث يتم قياسه درجة الحرارة باستخدام المعالم التشريحية، والمحققين يجب أن تكون قادرة على تكرار قياس الجسم وقال الموقع. بتأمين فوريباوس الماوس على سطح مستقيم الحافة، مثل الشفة من قفص أو الحافة من الحرارة، سهولة يتعرضون البطن لاستشعار الأشعة تحت الحمراء من الحرارة. وبوجه عام، هو البطن مساحة سطحية كبيرة تسمح ببعض المرونة لنتائج متسقة. وعلاوة على ذلك، البطن لكن الشعر من سطح الماوس الظهرية، ويسمح ذلك لقراءة درجة حرارة جسم أكثر دقة.
وثانيا، يجب دائماً رصد آثار أقدام هند عند أخذ قياس درجة حرارة. عندما تكون الحرارة قريبة من البطن، تميل الفئران لوضع أقدامهم على الحرارة نفسها. عند القدمين أو أصابع داخل المحيط من أجهزة الاستشعار، يمكن قراءة درجة الحرارة أقل من البطن، كما هو موضح في الفيديو 4. من المهم السماح للماوس لتنتشر بقدميها على كلا جانبي من أجهزة الاستشعار، مع الحفاظ على محيط خال من أي أجزاء من الجسم أو الكائنات إلى جانب سطح البطن.
ثالثا، لا يمكن أن تكون السطوح البطن للفئران الرطب عند أخذ القياسات. وسوف يغير سطح رطب القدرة الترمومتر لقياس درجة الحرارة بدقة؛ عادة، سوف تكون درجة الحرارة المقاسة أقل من القيمة الفعلية. ويمكن تجنب هذه المسألة عن طريق الحفاظ على الفئران في أقفاص مع الأسرة جديدة أثناء فترة المراقبة. وهذا يضمن أيضا أن جفاف السطح البطني هو موحدة في كل مرة يتم قياس درجات الحرارة.
وأخيراً، الأشعة تحت الحمراء الحرارة يكون هامش الخطأ أكبر من المسابر المستقيم، لو فقط قليلاً. وحدد هامش الخطأ للقياسات مع تحقيقات المستقيم هو ± 0.1 درجة مئوية، بينما هو للأشعة تحت الحمراء الحرارة، ± 0.2 درجة مئوية. هذا هامش الخطأ كان ضئيلا مقارنة بالاختلافات العامة في انخفاض درجة الحرارة بين السكان في التجربة PSA. الأهم من ذلك، مشروع تتطلب فرقا خفية كما ± 0.1 درجة مئوية كما قد تتصور الهامش الأخرى من المسائل خطأ، بغض النظر عما إذا كان حرارة الأشعة تحت الحمراء أو المسبار المستقيمي هو استخدام. أثناء إعداد هذا البروتوكول، قد أظهرت أيضا أن هناك علاقة جيدة جداً بين الهيئة الأساسية درجات الحرارة تقاس درجة الحرارة القابلة للغرس مرسلا ودرجات حرارة سطح الجسم تقاس بالأشعة تحت الحمراء الحرارة أثناء انخفاض حرارة الجسم التي يسببها ليبوبوليساكتشاريدي6.
انخفاض درجة الحرارة في نموذج الحساسية الغذائية المستخدمة قد لا لوحظ سابقا8،10. معياراً للتقييم كان سابقا لتحديد شدة النمط الظاهري بتسجيله الإسهال؛ بيد أن هذا الأسلوب يفتقر إلى الموضوعية. باستخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة، أظهرنا أن درجة حرارة خفية يمكن الكشف عن قطرات. ثم كنا قادرين على ربط هذه مع مستويات النشاط، كما تم تخديره الفئران لا أثناء الإجراء. يسمح هذا الأسلوب بطريقة سريعة ودقيقة وسهلة الاستخدام، وموسع، وغير مكلفة لقياس درجة حرارة الجسم في الفئران حين التمكن من مراقبة أخرى تعمل ستفتقده إلا إذا تم تخديره الفئران لقياسات مسبار المستقيم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
المنح البحثية في كواكامي وأيده مختبر المعهد الوطني للصحة: R01 AR064418-01A1 ومنظمة العفو الدولية R21 115534-01، و R01 HL124283-01 R41AI124734-01.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Non-contact infrared thermometer | SinoPie | DT-8861 | |
| Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE | Sigma Aldrich | D8406-.2MG | |
| PrecisionGlide 30 G needle | BD | 305128 | |
| PrecisionGlide 26 G needle | BD | 305111 | |
| 1 mL syringe | BD | 309659 | |
| Dinitrophenyl - human serum albumin | Biosearch Technologies | D-5059-10 | |
| Ovalbumin from chicken egg white | Sigma Aldrich | A5503-50G | |
| Imject Alum | ThermoFisher Scientific | 77161 | |
| Animal Feeding Needles, disposable | Fisher Scientific | 01-208-87 |
References
- Finkelman, F. D. Anaphylaxis: lessons from mouse models. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 120 (3), Quiz 516-507 506-515 (2007).
- Lee, J. K., Vadas, P. Anaphylaxis: mechanisms and management. Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 41 (7), 923-938 (2011).
- Newsom, D. M., Bolgos, G. L., Colby, L., Nemzek, J. A. Comparison of body surface temperature measurement and conventional methods for measuring temperature in the mouse. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (5), 13-18 (2004).
- Wong, J. P., Saravolac, E. G., Clement, J. G., Nagata, L. P. Development of a murine hypothermia model for study of respiratory tract influenza virus infection. Laboratory Animal Science. 47 (2), 143-147 (1997).
- Quimby, J. M., Olea-Popelka, F., Lappin, M. R. Comparison of digital rectal and microchip transponder thermometry in cats. Journal of American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 402-404 (2009).
- Mei, J., Riedel, N., Grittner, U., Endres, M., Banneke, S., Emmrich, J. V. Body temperature measurement in mice during acute illness: implantable temperature transponder versus surface infrared thermometry. Scientific Reports. 8 (1), 3526 (2018).
- Doyle, E., Trosien, J., Metz, M. Protocols for the induction and evaluation of systemic anaphylaxis in mice. Methods in Molecular Biology. 1032, 133-138 (2013).
- Brandt, E. B., et al. Mast cells are required for experimental oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Clinical Investigations. 112 (11), 1666-1677 (2003).
- Ando, T., et al. Histamine-releasing factor enhances food allergy. The Journal of Clinical Investigations. 127 (12), 4541-4553 (2017).
- Brandt, E. B., et al. Targeting IL-4/IL-13 signaling to alleviate oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 53-58 (2009).
