Summary
यह पत्र इस बात का विस्तृत विवरण प्रदान करता है कि लिवर प्रत्यारोपण के बाद इस्केमिया-रिफ्यूजन चोट में बुनियादी शोध की सुविधा के लिए चूहों में एनहेपेटिक चरण (लिवर इस्केमिया) का एक पशु मॉडल कैसे बनाया जाए।
Abstract
चूहों में ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण (ओएलटी) एक आजमाया हुआ और सिद्ध पशु मॉडल है, जिसमें एक्सपेरिपेटिक अंगों की इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी (आईआरआई) सहित प्रीऑपरेटिव, इंट्राऑपरेटिव और पश्चात अध्ययनों के लिए उपयोग किया जाता है। इस मॉडल के लिए कई प्रयोगों और उपकरणों की आवश्यकता होती है। एनहेपेटिक चरण की अवधि प्रत्यारोपण के बाद आईआरआई विकसित करने के समय से निकटता से संबंधित है। इस प्रयोग में, हमने चूहों में बाहरी अंग क्षति को प्रेरित करने और अधिकतम सहिष्णुता समय निर्धारित करने के लिए हीमोडायनामिक परिवर्तनों का उपयोग किया। जब तक सबसे गंभीर अंग चोट विभिन्न अंगों के लिए भिन्न होती है। इस विधि को आसानी से दोहराया जा सकता है और इसका उपयोग यकृत प्रत्यारोपण के बाद बाहेती अंगों के आईआरआई का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है।
Introduction
इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी (आईआरआई) लिवर प्रत्यारोपण के बाद एक आम जटिलता है। हेपेटिक आईआरआई एक रोग प्रक्रिया है जिसमें इस्केमिया-मध्यस्थता कोशिका क्षति और यकृत रिप्रेरण की असामान्य गिरावट शामिल है। नैदानिक वातावरण1में अंतर के अनुसार, हेपेटिक आईआरआई और स्थानीय जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को गर्म और ठंडे आईआरआई में विभाजित किया जा सकता है। गर्म आईआरआई स्टेम सेल चोट से प्रेरित है, आमतौर पर जिगर प्रत्यारोपण, सदमे, और आघात2का एक परिणाम के रूप में । कोल्ड आईआरआई एंडोथेलियल कोशिकाओं और परिधीय परिसंचरण3के कारण होने वाले यकृत प्रत्यारोपण की जटिलता है । नैदानिक रिपोर्टों से पता चला है कि हेपेटिक आईआरआई प्रारंभिक अंग विफलताओं के 10% के साथ जुड़ा हुआ है और तीव्र और पुरानी अस्वीकृति की घटनाओं में वृद्धि हो सकती है4,5. इसके अलावा, हेपेटिक आईआरआई उच्च मृत्यु दर6के साथ कई अंग रोग सिंड्रोम या प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया सिंड्रोम को भी प्रेरित कर सकता है। बाहरी अंग भागीदारी वाले रोगी अस्पताल में लंबे समय तक रहते हैं, अधिक पैसा खर्च करते हैं, और एक बदतर पूर्वानुमान7है। जटिलताओं का विकास यकृत प्रत्यारोपण के एंहपेटिक चरण की लंबाई से निकटता से संबंधित है8.
चूहों में ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण (ओएलटी) की रिपोर्ट सबसे पहले अमेरिकी प्रोफेसर ली ने १९७३ में दी थी । प्रायोगिक ऑपरेशन ने सीवन विधि का उपयोग करके नैदानिक यकृत प्रत्यारोपण और रक्त वाहिकाओं के एनास्टोमोसिस और आम पित्त वाहिनी (सीबीडी) के चरणों का अनुकरण किया। प्रक्रिया मुश्किल है और सफलता की कम दर के साथ समय लेने वाली9। 1 9 7 9 में, कामडा एट अल ने 26 मिनट10के भीतर anhepatic चरण को नियंत्रित करने के लिए पोर्टल नस के एनास्टोमोसिस के लिए 'दो-कफ विधि' का रचनात्मक उपयोग करके चूहों में ओएलटी में एक महत्वपूर्ण सुधार किया। उसी साल जिमरमैन ने ' सिंगल बिलियरी स्टेंट मेथड ' का प्रस्ताव रखा । ली के काम के आधार पर, ज़िमरमैन ने पॉलीथीन ट्यूबों का उपयोग सीधे दाता और प्राप्तकर्ता के सीबीडी को अनास्टोमोस करने के लिए किया, सीबीडी के पुनर्निर्माण को सरल बनाया, और स्फिंकर के कार्य को संरक्षित किया, और यह विधि ओएलटी मॉडल11के पित्त पुनर्निर्माण के लिए मानक बन गई। 1 9 80 में, मियाटा एट अल ने 'थ्री-कफ विधि' का प्रस्ताव किया जहां पोर्टल नस (पीवी), सुपरहेपेटिक वेना कावा (एसवीसी), और इंट्राहेपेटिक वेना कावा (आईवीसी) कफ विधि द्वारा अनस्टोमोस किए गए थे। हालांकि, इस विधि के साथ कैनुला के विरूपण का खतरा है, जो अवर वेना कावा भाटा12की बाधा का कारण बन सकता है। 1 9 83 में, पीवी और आईवीसी के एनास्टोमोसिस के लिए कफ विधि का उपयोग करके 'दो-कफ विधि' का प्रस्ताव किया गया था, लेकिन एसवीसी13के लिए सीवन विधि को अपनाना। ओएलटी मॉडल स्थापित करने के लिए विश्व स्तर पर विद्वानों द्वारा इस विधि को अपनाया गया था। तब से, कफ एनास्टोमोसिस चरणों में सुधार किया गया है ताकि anhepatic चरण को छोटा किया जा सके और चूहों के जीवित रहने की दर में सुधारकियाजा सके । इसी प्रकार, नैदानिक अभ्यास में बेहतर तरीकों का उपयोग15चरण को छोटा करने के लिए किया जाता है। हालांकि, जिगर प्रत्यारोपण के बाद IRI में बुनियादी अनुसंधान से पता चला है कि जीवित रहने की दर उलटा बाहरी अंगों को चोट की डिग्री से संबंधित है । इसलिए, आगे अनुसंधान की आवश्यकता है, और जिगर प्रत्यारोपण के बाद आईआरआई अनुकरण करने के लिए एक सरल और प्रजनन योग्य पशु मॉडल की आवश्यकता है।
anhepatic चरण की परिभाषा के आधार पर, हमने यकृत प्रत्यारोपण में हीमोडायनामिक परिवर्तनों का अनुकरण किया जिसके परिणामस्वरूप चूहों में बाहरी अंगों का आईआरआई होता है। इसके साथ ही, हम यकृत प्रत्यारोपण के बाद आईआरआई में बुनियादी शोध की सुविधा के लिए चूहों में एंहेपेटिक चरण (यकृत इस्केमिया) के एक पशु मॉडल का निर्माण करने का विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं।
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Protocol
एनिमल एथिक्स कमेटी ने ग्वांग्शी मेडिकल यूनिवर्सिटी (No20190920) के प्रयोग को मंजूरी दे दी। सभी जानवरों को ग्वांग्शी मेडिकल यूनिवर्सिटी के एनिमल एक्सपेरिमेंट सेंटर द्वारा सप्लाई किया गया था । हमने एसपीएफ पुरुष स्प्राग डावले चूहों (200-250 ग्राम, 10-12 सप्ताह) का उपयोग किया, जो 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस के कमरे के तापमान और 50 ± 10% की आर्द्रता के नीचे रखा गया था। ऑपरेशन से 24 घंटे पहले फीडिंग बंद कर दी गई थी; हालांकि, पानी की व्यवस्था की गई थी।
नोट: एक ऑपरेटर माइक्रोसर्जरी आधार या सर्जिकल माइक्रोस्कोप के बिना सभी ऑपरेशन कर सकता है।
1. ऑपरेशन
- वजन करने के बाद, आइसोफ्लुरेन (5%) एक पशु संज्ञाहरण मशीन का उपयोग करना।
- 1-2 मिनट के बाद, धीरे चिमटी के साथ चूहे के पंजे को दबाएं। यदि चूहा चुटकी लेने के बाद जवाब नहीं देता है, तो यह संज्ञाहरण की स्थिति में प्रवेश कर गया है। सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम का प्रयोग करें। चूहों के शरीर का तापमान 37-38 डिग्री सेल्सियस पर रखने के लिए पशु हीटिंग लैंप का उपयोग करें।
- पेट कीटाणुशोधन (पोविडोन आयोडीन समाधान) के बाद, जानवर विच्छेदन तालिका पर चूहे को ठीक करें। संदंश और कैंची का उपयोग कर xiphoid प्रक्रिया के नीचे 3 सेमी का एक औसत चीरा बनाओ।
- पेट की गुहा खोलें, एक रिट्रैक्टर का उपयोग करके जिगर का पर्दाफाश करें, और हेपेटोगास्ट्रिक स्नायु को जुटाने में। जिगर के मध्य पालि को धीरे से फ्लिप करने के लिए कपास झाड़ू का उपयोग करें और पोर्टा हेपाटियों को बेनकाब करने के लिए इसे ऊपर की ओर मोड़ें। सीबीडी, पीवी और एचए की पहचान करें।
- कपास झाड़ू का उपयोग करके बाईं निचली पेट गुहा की ओर छोटी आंत को पुश करें, इसे गीली धुंध से ढकें, और इंट्राहेपेटिक वेना कावा को सही गुर्दे की नस में ले जाएं।
- पोर्टल नस, हेपेटिक धमनी, और एक इंट्राओक्यूलर लेंस और 3-0 रेशम धागे के साथ चिह्नित संदंश के साथ सही गुर्दे की नस के ऊपर अवर वेना कावा को अलग करें, प्रत्येक पर्ची गाँठ के साथ।
- बाएं और दाएं निचले छोर की त्वचा को खोलें और नेत्र संदंश का उपयोग करके नैतिक नस का पर्दाफाश करें। धीरे-धीरे पूरे शरीर को हेपरिनाइज करने के लिए फेमोरल नस के माध्यम से कम आणविक वजन हेपरिन 625 आईयू/किलो इंजेक्ट करें।
- पोर्टल नस, हेपेटिक धमनी, और अवर वेना कावा को नंबर 3-0 टांके के साथ सही गुर्दे की नस के ऊपर लिगेट करें, जो 45 मिनट तक चलने वाला(चित्रा 1)। पेट की गुहा में छोटी आंत को बदलकर उसे धुंध से ढक दें। इन अवधियों के दौरान साँस लेना संज्ञाहरण को कम करें।
- 45 मिनट के बाद, पोर्टल नस, हेपेटिक धमनी, और सही गुर्दे की नस के ऊपर अवर वेना कावा जारी करें।
- मांसपेशियों और त्वचा, परत से परत सीवन, और साँस लेना संज्ञाहरण समाप्त। हर 4 घंटे में 5 मिलीग्राम/किलो के सबक्यूटेनियस मॉर्फिन का उपयोग करके पश्चात एनाल्जेसिया प्रदान करें।
- चूहे का निरीक्षण करें जब तक कि यह जाग न जाए और 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस के तापमान के नीचे खिलाएं और 50 ± 10% की आर्द्रता हो। पशु हीटिंग लैंप आवश्यक हैं।
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Representative Results
जिगर इस्केमिया के लिए चूहों की सहिष्णुता
इस पशु मॉडल में, जिन साइटों पर ऑपरेटिंग के दौरान रक्त वाहिकाओं को लिगा किया गया था, उन्हें चित्र 1में दिखाया गया है। चूहों को बेतरतीब ढंग से 15 मिनट (I15 समूह), 30 मिनट (I30 समूह), 45 मिनट (I45 समूह), 60 मिनट (I60), और नकली समूह के लिए इस्केमिया के लिए 5 समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में 10 चूहों के साथ। ऑपरेशन के 14 दिन बाद प्रत्येक समूह की जीवित रहने की दर देखी गई। सभी चूहों I15 समूह, I30 समूह, और नकली समूह में बच गया । आठ I45 समूह में 14 दिनों के लिए बच गया, और केवल 2 I60 समूह में बच गया । इन परिणामों से पता चलता है कि चूहे अधिकतम 45 मिनट(तालिका 1)के लिए एनहेपेटिक चरण को सहन कर सकते हैं।
चूहों में परिसंचरण पर संवहनी बंधन का प्रभाव
प्रयोग के दौरान, बायोसिस्टम्स ने एनहेपेटिक चरण से पहले और बाद में हृदय गति और रक्तचाप (दाएं आंतरिक कैरोटिड धमनी इसके बाद) दर्ज किया। हमने पाया कि चूहों की हृदय गति और मतलब धमनी दबाव (मानचित्र) वैस्कुलर लिगेशन(चित्रा 2) केबाद नाटकीय रूप से बदल गया।
बाहरी अंगों पर प्रभाव
हेपेटिक इस्केमिया भीड़ और एडिमा आंतों, गैस्ट्रिक वैरिस, और प्लीनामेगली में लिगाशन के बाद पाए गए थे। ८० चूहों को बेतरतीब ढंग से ४५ मिनट (T0), 6 घंटे (T6), 12 घंटे (T12), 24 घंटे (T24), ४८ घंटे (T48), ७२ घंटे (T72), 7 दिन (D7), और 14 दिन (D14) के लिए इस्केमिया के लिए 8 समूहों में विभाजित किया गया । चूहों की बलि देने के बाद, गुर्दे, अग्न्याशय, छोटी आंत, दिल और फेफड़ों से ऊतक ले लिए गए और हेमटॉक्सिलिन-इओसिन (एचई) से सना हुआ था। पूरी धुंधला प्रक्रिया में पांच चरण होते हैं: डेवलिंग, धुंधला, निर्जलीकरण, पारदर्शिता और सीलिंग। दिल को छोड़कर, रोग स्कोर पहले16, 17,18,19वर्णित के रूप में सौंपा गया था ।
बाहरी अंगों को अधिकतम चोट लगने तक का समय भिन्न होता है; यह अग्न्याशय के लिए ऑपरेशन के बाद 6-24 घंटे और फेफड़ों के लिए 24-48 घंटे था। इस्केमिया के 45 मिनट बाद आंतों की नली और किडनी सबसे गंभीर रूप से घायल हो गई। ऑपरेशन के 24 घंटे बाद आंतों के म्यूकोसा की कोई स्पष्ट असामान्यता नहीं थी और ४८ घंटे बाद किडनी बरामद हुई । रिफ्यूजन के बाद, स्थानीय मायोकार्डियल सेल नेक्रोसिस, सेल विखंडन और विघटन, भड़काऊ सेल घुसपैठ, और ऑपरेशन(चित्र 3)के 24-48 घंटे बाद दिल में स्थानीय वासोडिलेशन और भीड़-भाड़ पाई गई।
फ़ेफ़डे
इस्केमिया के बाद फेफड़ों के टिश्यू में न्यूट्रोफिल घुसपैठ पाई गई। रिफ्यूजन समय (T0, T6) की वृद्धि के साथ, ब्रोंकियल ल्यूमेन का बलगम फेफड़ों के ऊतकों में भी देखा जा सकता है। भड़काऊ सेल घुसपैठ अल्वियोलर दीवार में हुई, जो गंभीर रूप से मोटी हो गई। Alveolar पतन और alveolar गुहा के गायब होने भी कुछ ऊतकों में पाया जा सकता है । अल्वियोलर दीवारों में कोई महत्वपूर्ण अल्वियोलर एडिमा या केशिका भीड़ नहीं थी। वे ऑपरेशन के 24-48 घंटे बाद सबसे गंभीर रूप से घायल हो गए, कुछ चूहों के साथ डिस्पनिया और अन्य अभिव्यक्तियों को 7 दिन बाद ऑपरेशन दिखाया गया । वह धुंधला परिणाम वायुमार्ग में लिम्फेडेनाइटिस, अल्वेओलर दीवार में हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ, और स्थानीय नकसीर(चित्रा 3A, चित्रा 4) कासुझाव दिया ।
गुर्दे
चरण टी0 में इस्केमिया के बाद गुर्दे के ट्यूबलों में ियोसिनोफिलिक पदार्थ की एक छोटी मात्रा पाई गई थी, लेकिन कोई भड़काऊ सेल घुसपैठ और अन्य असामान्यताएं नहीं देखी गईं। हालांकि, सूजन गुर्दे ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं, छिद्रपूर्ण या vacuolated साइटोप्लाज्म, कुछ ल्यूमेंस में परिगलित कोशिकाओं, karyopyknosis, विखंडन, ब्रश सीमा हानि, और कई ल्यूमेंस में ट्यूब के आकार का अम्लीय समूह ऑपरेशन के 6-48 घंटे बाद देखा गया । इसके अलावा, दानेदार अध: पतन के साथ गुर्दे ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं की एक छोटी संख्या देखी गई, और ऑपरेशन के 48 घंटे बाद असुरक्षित और हल्के से सना हुआ साइटोप्लाज्म देखा गया। महत्वपूर्ण इंटरस्टिशियल तेलांगीसिया, फिर भी कोई गंभीर भड़काऊ सेल घुसपैठ नहीं मिली,(चित्र 3 बी, चित्र 5) पायागया।
छोटी आंत
इस्केमिया (टी0) के बाद छोटी आंत सबसे गंभीर रूप से घायल हो गई थी। वहां गंभीर भड़काऊ सेल घुसपैठ, म्यूकोसा एपिथेलियम बहा, और telangiectasia था । रिफ्यूजन समय की वृद्धि के साथ, चोट जल्दी ठीक हो गई। ऑपरेशन के 24 घंटे बाद म्यूकोसल एपिथेलियम को पूरी तरह से बहाल कर दिया गया था, और केवल हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ देखी गई थी(चित्रा 3 सी, चित्रा 6)।
अग्न्याशय
गंभीर भड़काऊ कोशिकाओं चरण T0 में अग्नाशय के ऊतकों के आसपास घुसपैठ की । हालांकि अग्नाशय के घाव एक समान नहीं थे। 10 में से छह अग्नाशय परिगलन और भड़काऊ घुसपैठ सर्जरी के 24 घंटे बाद था, और अंय 4 कोई स्पष्ट असामान्यताएं थी । ऑपरेशन के चौबीस घंटे बाद, भड़काऊ कोशिकाओं की घुसपैठ के अलावा, एडिमा, इंटरलोबुलर स्पेस का चौड़ीकरण, नकसीर, एकिनर कोशिकाओं की एक छोटी संख्या का परिगलन, कोशिकाओं का अस्पष्ट सीमांकन, परमाणु विखंडन और विघटन, और दृश्य क्षेत्र में हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ था । फिर, सूजन धीरे-धीरे गायब हो गई(चित्र 3 डी, चित्रा 7)।
दिल
चरण टी0 द्वारा, कार्डियक मायोसाइट्स को स्पष्ट सीमांकन, सामान्य कोशिका आकृति विज्ञान, स्थानीय मध्यवर्ती भीड़, और हल्के भूरे-पीले वर्णक जमाव के साथ नियमित रूप से व्यवस्थित किया गया था। इसके अलावा, मायोकार्डियल इंटरस्टिशियल और पेरिवैस्कुलर क्षेत्रों में भड़काऊ सेल घुसपैठ देखी गई। रिफ्यूजन समय में वृद्धि के साथ, स्थानीय मायोकार्डियल सेल नेक्रोसिस, सेल विखंडन और विघटन, भड़काऊ सेल घुसपैठ, स्थानीय वासोडिलेशन, और ऑपरेशन के 24-48 घंटे बाद ऊतकों में भीड़ पाई गई। कुछ नमूनों में वेंट्रिकुलर फैलाव, छिद्रपूर्ण संरचना, मायोकार्डियल इंटरस्टिटियम में वृद्धि हुई, और हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ देखी गई। 48 घंटे के बाद, स्थानीय कार्डियोमायोसाइट्स गायब हो गए और हल्के भड़काऊ सेल घुसपैठ के साथ रेशेदार संयोजी ऊतक की एक छोटी राशि द्वारा प्रतिस्थापित किया गया। तब तक, कोई अन्य स्पष्ट असामान्यताएं(चित्र 8)नहीं देखी गईं।
लिवर, किडनी, अग्न्याशय और हृदय सीरोलॉजिकल इंडेक्स पर हीमोडायनामिक परिवर्तनों का प्रभाव
सीरम एकत्र किया गया था, और एक स्वचालित बायोकेमिकल एनालाइजर द्वारा एलनिन अमीनोट्रांसफेरेज (एएलटी), एस्पार्टेट अमीनोट्रांसफेरेज (एएसटी), क्रिएटिनिन और एमिलेज के स्तर का पता लगाया गया था। सभी संकेतक 24-48 घंटे में नुकीला, रोग परिवर्तन के विपरीत । हालांकि ये स्तर ऑपरेशन के 48 घंटे बाद सामान्य थे, लेकिन पैथोलॉजिकल क्षति जारी रही(चित्रा 9)।
चित्रा 1:लिगेचर का स्थान: पीवी, एचए, आईवीसी सही गुर्दे की नस के ऊपरी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
| समूह | एन | 24 घंटे पर अस्तित्व, एन (%) | 7 डी, एन (%) | 14 डी, एन (%) |
| नकली | 10 | 10 | — | — |
| मैं 15 मिनट | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| मैं 30 मिनट | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| मैं 45 मिनट | 10 | 8/10 | 8/10 (80) | 8/10 (80) |
| मैं 60 मिनट | 10 | 2/10 | 2/10 (20) | 2/10 (20) |
तालिका 1: जिगर इस्केमिया के लिए चूहों की सहिष्णुता
चित्रा 2:I45 मिनट समूह में हेमोडायनामिक परिवर्तन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 3:अंग हिसल विज्ञान के स्कोर। (एक)फेफड़े; (ख)किडनी; (ग)आंत; (घ)अग्न्याशय; * नकली समूह(पी एंड एलटी; 0.05) की तुलना में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 4:ऑपरेशन के बाद फेफड़ों में पैथोलॉजिकल बदलाव। (A)शाम समूह; (ख)इस्केमिया समूह (टी0 समूह); (ग)रिप्रफ्यूजन 6 घंटे (T6) समूह; (घ)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (ई)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (F)रिप्रेफ्यूजन 24 घंटे (टी-24) ग्रुप; (जी)रिपरफ्यूजन 48 घंटे (T48) समूह; (ज)रिपरफ्यूजन 7 दिन (D7) समूह; (I)रिप्रेफ्यूजन 14 दिन (D14) समूह (स्केल 50 माइक्रोन)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 5: ऑपरेशन के बाद गुर्दे में रोग बदलता है। (क)शाम समूह; (ख)इस्केमिया समूह (टी0 समूह); (ग)रिप्रफ्यूजन 6 घंटे (T6) समूह; (घ)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (ई)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (F)रिप्रेफ्यूजन 24 घंटे (टी-24) ग्रुप; (जी)रिपरफ्यूजन 48 घंटे (T48) समूह; (ज)रिपरफ्यूजन 7 दिन (D7) समूह; (I)रिप्रेफ्यूजन 14 दिन (D14) समूह (स्केल 50 माइक्रोन)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 6:ऑपरेशन के बाद छोटी आंत में पैथोलॉजिकल बदलाव। (ए)शाम समूह; (ख)इस्केमिया समूह (टी0 समूह); (ग)रिप्रफ्यूजन 6 घंटे (T6) समूह; (घ)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (ई)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (F)रिप्रेफ्यूजन 24 घंटे (टी-24) ग्रुप; (जी)रिपरफ्यूजन 48 घंटे (T48) समूह; (ज)रिपरफ्यूजन 7 दिन (D7) समूह; (I)रिप्रेफ्यूजन 14 दिन (D14) समूह (स्केल 50 माइक्रोन)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 7:ऑपरेशन के बाद अग्न्याशय में पैथोलॉजिकल परिवर्तन। (ए)शाम समूह; (ख)इस्केमिया समूह (टी0 समूह); (ग)रिप्रफ्यूजन 6 घंटे (T6) समूह; (घ)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (ई)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (F)रिप्रेफ्यूजन 24 घंटे (टी-24) ग्रुप; (जी)रिपरफ्यूजन 48 घंटे (T48) समूह; (ज)रिपरफ्यूजन 7 दिन (D7) समूह; (I)रिप्रेफ्यूजन 14 दिन (D14) समूह(ए और डी स्केल 50 माइक्रोन; BCEFGHI स्केल 50 माइक्रोन)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 8:ऑपरेशन के बाद दिल में रोग बदलता है। (A)शाम समूह; (ख)इस्केमिया समूह (टी0 समूह); (ग)रिप्रफ्यूजन 6 घंटे (T6) समूह; (घ)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (ई)रिपरफ्यूजन 12 घंटे (T12) समूह; (F)रिप्रेफ्यूजन 24 घंटे (टी-24) ग्रुप; (जी)रिपरफ्यूजन 48 घंटे (T48) समूह; (ज)रिपरफ्यूजन 7 दिन (D7) समूह; (I)रिप्रेफ्यूजन 14 दिन (D14) समूह(एक पैमाने पर 50 माइक्रोन; बीसीडीएफएचआई स्केल 100 माइक्रोन)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 9: प्रत्येक समूह में एएलटी, एलएसटी, क्रिएटिनिन (सीआर) और एमिलेज के परिवर्तन; * नकली समूह(पी एंड एलटी;0.05) की तुलना में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
चूहों में OLT जिगर प्रत्यारोपण, आईआरआई, प्रत्यारोपण अस्वीकृति, प्रतिरक्षा सहिष्णुता, प्रत्यारोपण पैथोलॉजी और फार्माकोलॉजी, होमोट्रांजेशन, और xenotransplantation में अंग संरक्षण का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल है। वर्तमान में, यह व्यापक रूप से जिगर प्रत्यारोपण के प्रयोगात्मक अनुसंधान में प्रयोग किया जाता है।
पायलट अध्ययनों के दौरान हमने पहली बार पेंटोबार्बिटल सोडियम इंट्रापेरिटोनियल एनेस्थीसिया प्रशासित किया और पाया कि इससे उच्च पोस्टऑपरेटिव मृत्यु दर और हीमोडायनामिक परिवर्तनों के लिए कम सहिष्णुता हुई। इस प्रकार, हमने कार्रवाई की तेजी से शुरुआत और इन विट्रो विशेषताओं के तेजी से बहिष्कार के लिए बाद के परीक्षणों में साँस लेने संज्ञाहरण का उपयोग किया। साँस लेना संज्ञाहरण के लिए स्विच काफी सहिष्णुता समय और चूहों के पश्चात अस्तित्व में सुधार हुआ। जांचकर्ताओं को संवेदनाहारी को अधिक खुराक देने से रोकने के लिए चूहे की श्वास और हृदय दरों पर ध्यान देना चाहिए। बायोसिस्टम का उपयोग हृदय गति और रक्तचाप की निगरानी के लिए किया जा सकता है। हमने रक्त वाहिकाओं के बंधन पर सर्जिकल सीवन मोटाई के प्रभाव को भी देखा। हालांकि 3-0 से छोटी लाइनें पूरी तरह से रक्त वाहिकाओं को लिगेट कर सकती थीं, लेकिन उन्हें ढीला करना मुश्किल था और रक्त वाहिकाओं के टूटने का कारण बन सकता है। इसके विपरीत, 3-0 से बड़ी लाइनों के परिणामस्वरूप अधूरा संवहनी ऑक्स्यूलेशन हो सकता है, जो हीमोडायनामिक परिवर्तनों को रोकता है। इन भौतिक समस्याओं को भविष्य के प्रयोगों में सुधार किया जाएगा । हमारे प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं हैं । ओवरहीटिंग के लिए उनकी क्षमता के कारण तापमान रखरखाव के लिए हीट लैंप की सिफारिश नहीं की जाती है; वैकल्पिक हीटिंग सुझाव, जैसे पानी कंबल को फिर से तैयार करना, जानवर के लाभ के लिए अनुशंसित हैं।
ओएलटी के बाद डिस्टल ऑर्गन इंजरी के कई कारण हैं। सबसे पहले, चोट विट्रो20में दाता जिगर के ठंडे संरक्षण के कारण हो सकता है । दूसरा, आईआरआई हो सकता है और ऊतक क्षति का कारण बन सकता है जब इस्केमिया की लंबी अवधि के बाद ऊतक (रिफ्यूजन) में रक्त की आपूर्ति होती है। इस्केमिया चोट का प्रमुख कारण है, और रिफ्यूजन वह प्रक्रिया है जहां चोट होती है। एक साथ anhepatic चरण के दौरान आईवीसी और पीवी अवरुद्ध करने के बाद, निचले अंगों और आंतरिक अंगों में रक्त स्टेसिस की एक बड़ी मात्रा में हुई। प्रभावी परिसंचारी मात्रा (ईसीवी) में तेजी से कमी आई, और मानचित्र में कमी आई। हालांकि, वेगस तंत्रिका उत्तेजना के कारण, चूहों में हृदय गति में कोई प्रतिपूरक वृद्धि नहीं हुई। इस प्रयोग में, हमने पाया कि चूहों ने लिगेशन और पोत रिलीज के 5 मिनट के भीतर महत्वपूर्ण हेमोडायनामिक परिवर्तन किए, जो इस्केमिया-रिफ्यूजन सिंड्रोम की परिभाषा को पूरा करते थे।
इस्केमिया लिवर के बाहर कुछ ऊतकों में हुआ। एनहेपेटिक फेज के बाद ईसीवी बढ़ गई। मानचित्र सामान्य करने के लिए लौटे के बाद IVC और पीवी अनब्लॉक थे, आग के बाद जिगर के बाहर होने वाली चोट के साथ । इसके अलावा, दाता के जिगर के आईआरआई भड़काऊ मध्यस्थों (TNF-α, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-8) का उत्पादन किया है कि डिस्टल अंगों पर हमला21। इस प्रयोग में, anhepatic चरण के दौरान हीमोडायनामिक्स नकली थे, जो आईवीसी और गुर्दे की निष्क्रिय भीड़, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल बैरियर को नुकसान, बैक्टीरियल ट्रांसलोकेशन, अंगों के इस्केमिया (जैसे, फेफड़े, दिल, अग्न्याशय, गुर्दे, आदि) जहां एसवीसी स्थित है, और एक्सपेरिमेंटिक अंगों के लिए IRI का कारण बना।
पैथोलॉजिकल निष्कर्षों से पता चला है कि हर अंग में इस्कीमिक इंजरी की पीक और रिकवरी टाइम अलग-अलग थे। हालांकि कोल्ड स्टोरेज और प्रतिरक्षा कारकों के कारण होने वाले नुकसान को इस अध्ययन में अनुकरण नहीं किया जा सकता है, लेकिन बाहरी अंग चोट पर शोध करने के लिए अन्य पशु मॉडलों की तुलना में एनहेपेटिक आईआरआई को दोहराया जा सकता है और इसकी तुलना की जा सकती है। हमारे मॉडल और OLT मॉडल की तुलना की जा सकती है और पूर्वाधे अंग चोट पर अनुसंधान के लिए एक आधार प्रदान करने के लिए मनाया जा सकता है । इसके अलावा, हमारा मॉडल कुछ नैदानिक यकृत संचालन के समान है, जैसे कि हिलार कोलंगियोकार्सिनोमा के लिए। हिलर कोलंगियोकार्सिनोमा एक घातक ट्यूमर है जो अक्सर पीवी या आईवीसी पर हमला करता है और अक्सर सर्जरी22के दौरान पीवी क्लैंपिंग की आवश्यकता होती है। हेपेटिक पोर्टल पुनर्निर्माण किया गया था; जब ट्यूमर आईवीसी पर हमला करता है, तो आईवीसी के इंट्राऑपरेटिव क्लैंपिंग की भी आवश्यकता होती है, और जिसके परिणामस्वरूप हीमोडायनामिक परिवर्तन हमारे मॉडल के अनुरूप होते हैं।
संक्षेप में, चूहों में हमारा मॉडल माइक्रोसर्जरी के बिना उपयोग में आसान और सीधा है, और हेपेटिक इस्केमिया के बाद एक्सपेरिमेंटिक अंगों के आईआरआई में मौलिक अनुसंधान का आधार प्रदान करता है।
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Disclosures
इस पांडुलिपि के लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है ।
Acknowledgments
हम ग्वांग्शी मेडिकल यूनिवर्सिटी के दूसरे संबद्ध अस्पताल के डॉ वेन-ताओ ली और डॉ जी-हुआ वू द्वारा दिए गए उपयोगी सुझावों को स्वीकार करना चाहेंगे । लेखक उपयोगी टिप्पणियों और चर्चाओं के लिए हमारी टीम के साथियों का शुक्रिया अदा करना चाहेंगे । लेखक भी गुमनाम समीक्षकों और JoVE के संपादकों को उनकी टिप्पणी के लिए शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । विशेष धन्यवाद उनके निरंतर समर्थन और प्रोत्साहन के लिए डॉ युआन के माता पिता के पास जाना चाहिए । इस काम को निंगबो नेचुरल साइंस फाउंडेशन (2014A610248) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde solution | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | P804536 | |
| air drying oven | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanine aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammonia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| anhydrous ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal anesthesia machine | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartate aminotransferase (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatic biochemical analyzer. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| cover glass | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| creatinine Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| dewatering machine | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Donatello Series 2 | |
| embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| frozen machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| hematoxylin-eosin dye solution | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| high-efficiency paraffin wax | Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd | Q/YSQN40-91 | |
| hydrochloric acid | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| intraocular lens (IOL)forceps | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro Scissors(when nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| needle holders | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutral gum | Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd. | — | |
| normal optical microscope | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | straight |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | bending |
| ophthalmic Scissors | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathological slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipettes | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101008 | |
| retractors | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| scanner | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Pannoramic 250 | |
| slide | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xylene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
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