Summary
ここでは、苗木における Phytophthora nicotianae 耐性についてのタバコ遺伝子型の効率的かつ正確なスクリーニングのためのプロトコルが提示される。これは、精密育種や分子機構研究のための実用的なアプローチです。
Abstract
卵菌類Phytophthora nicotianaeによって引き起こされる黒いシャンクは、タバコに対して破壊的であり、この病原体は多くのナス科作物に対して高病原性である。P.ニコチアナエは高温によく適応しています。したがって、この病原体の研究は、地球温暖化のために世界中の農業で重要性を増しています。タバコ植物のP. nicotianae耐性品種は、一般に、P. nicotianaeによってコロニー形成されたオート麦粒を接種し、疾患症状をモニタリングすることによってスクリーニングされる。しかし、この場合は正確な接種が重要であるため、接種強度を定量化することは困難である。この研究は、P. nicotianaeの感染に対するタバコの耐性を評価するための効率的で信頼性の高い方法を開発することを目的としていた。この方法は抵抗性品種の同定に成功しており、リアルタイムPCRにより接種効率が確認されました。本研究で提示した抵抗性評価方法は、精密育種や分子機構研究に効率的かつ実用的である。
Introduction
P. nicotianae は多くのナス科作物に破壊的です。タバコの「ブラックシャンク」1、ジャガイモの葉と塊茎の腐敗2、トマトとピーマンの冠と根腐れ3、ゴジカラーと根腐れ4を引き起こす可能性があります。 P. nicotianae は、任意の成長段階で根、茎、葉を含むタバコ植物のすべての部分を攻撃することができます5。この病気の最も一般的な症状は、茎の黒い基部です。根は最初は水に浸されたように見え、その後壊死し、葉は大きな円形の病変を示します5。この病気は、温室内のタバコ植物や畑のタバコ植物に壊滅的な影響を与える可能性があります6。 P. nicotianae を防除するための最も実用的で経済的な方法は、抵抗性品種の使用です7。しかしながら、タバコ生殖質コレクションからの P.ニコチアナエ耐性アクセッションの同定には、効果的なスクリーニングプロトコルが必要である。
タバコ中のニコチアナエ菌耐性を評価するために様々な同定方法が記載されている7、8、9、10、11、12、13、14、15、16。一般に、P. nicotianae耐性タバコ遺伝子型の同定には、3つの主要なアプローチが用いられてきた。第1は、菌糸体をP.ニコチアナエを含むペトリプレート上で寒天培地と混合することを含む。その後、菌糸体を室温で暗所で2週間培養する。1Lの脱イオン水を菌糸体に加え、30秒間均質化する。接種物は必要になるまで氷の上に保たれます。植物の両側に2つの穴(直径1cm、深さ4〜5cm)を作り、各穴に10mLの種菌を注ぐ。その後、穴は周囲の土壌で埋められ、病気の発症は2週間毎日監視されます8,10。
第2の方法では、植物に病原体が寄生した爪楊枝を接種する。このアプローチでは、移植後約6週間で植物を使用し、最低身長30cmにする必要があります。オートクレーブ処理された爪楊枝は、P. nicotianae菌糸体を含む培養物の表面に置かれる。次いで、培養皿を、室温で光の下で7日間保存する。次に、コロニー形成された爪楊枝を使用して植物を接種する。爪楊枝は、第4節と第5節の間のタバコ茎に挿入される。植物は毎日5日間監視されています9,15。この方法は、小さな苗には適用できません。接種源は病原体が蔓延する爪楊枝であるため、接種強度を正確に制御することはできません。
最も頻繁に使用されるアプローチは、接種のためのオート麦穀物を含む。この場合、オート麦粒は、500mLのオートクレーブおよび300mLの脱イオン水を121°Cで1日1回、3日間オートクレーブ処理することによって調製される。次いで、オート麦粒が病原体コロニー形成培養培地に添加される。ディッシュをパラフィンフィルムで密封し、光中25°Cで7〜12日間インキュベートした。鉢植えの土壌に4つの別々の5cmの深さの穴が作られ、各植物から4cm、病原体が蔓延するオート麦粒が各穴に1つ入れられます。潜伏期間は、最初の地上の症状がいつ発生したかに基づいて決定されます7、11、12、13、14、15、16。この方法は効率的で、大規模な抵抗スクリーニングに適用できます。しかし、このアプローチの1つの制限は、接種物が病原体に寄生するオート麦粒であるため、接種強度を正確に制御できないことである。
しかし、ここで提示されるのは、成長チャンバ抵抗評価に適用可能なより正確な方法である。他のアプローチと比較して、接種物は遊走子懸濁液であり、したがって接種強度は制御可能かつ調整可能である。この研究のタバコ植物は土壌なしで栽培されているため、結果は観察しやすい。さらに、土壌から植物の根をサンプリングすると、常に根に損傷を与え、一連の生理学的反応を誘発する17。この方法では、植物を土壌なしで栽培するので、根の損傷における干渉を排除することができる。結論として、この方法は分子メカニズム研究および精密育種にとってより実用的である。このプロトコルを使用すると、データは通常5日以内に得られ、1回の実験で200以上の植物が評価されます。
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Protocol
1. 素材
- タバコの品種を入手してください。
注:この実験のために、 "Beinhart1000-1"(Beinhart 1000の選択)(BH)と "Xiaohuangjin1025"(XHJ)は中国のタバコ生殖質資源の国家中期Genbankから入手しました。BHは耐性であるのに対し、XHJは ニコチアナエ菌 感染を受けやすい16。中国農業科学院タバコ研究所に保存されている P. nicotianae race 0のフィールド単離物が、研究を通してすべての接種に使用された。
2. P. ニコチアナエ 抵抗性評価のための植え付けタバコ遺伝子型
- タバコの種とバーミキュライトを混ぜ合わせ、滅菌した鉢植えの土に優しく種を吹き付けます。成長室にポットを置きます。16時間の光/8時間の暗光周期の下で、25°Cの一定温度を維持します。
- トレイと発泡シートを備えた水耕栽培装置を準備する。種子が発芽したら、鉢植えの土から苗を刺し、滅菌脱イオン水で根を優しく洗い流し、水耕栽培装置に移植する。
- デバイスを 25 °C の気候室に 16 時間の光/8 時間の暗黒光周期下で 24 時間置きます。
- ホーグランド養液を予め調製しておく(表1)。ホーグランド養液(植物あたり約125mL)で苗を水耕栽培装置に移植する。
- デバイスを25°Cの気候チャンバーに入れ、16時間の明光/8時間の暗光周期下で2週間置きます。
3. P. nicotianae遊走子懸濁液の調製
- オートミール寒天培地を調製する。
- オートミール33gの重さを量り、ガラス製品に移し、1,000mLの滅菌水を加える。電磁コンロオーブンで沸騰させる。
- オートミールが粘着性になったら、滅菌ガーゼを通して液体溶液をこすります。
- 液体溶液を1,000 mLのメスシリンダーに注ぎ、滅菌水で体積を1,000 mLに調整する。
- 液体溶液をガラス試薬瓶に注ぎ、18gの寒天を加える。この混合物(オートミール寒天培地)を121°Cで15分間よく振とうした。室温で30分間放置する。
- 滅菌オートミール寒天培地の約20mLを各ペトリ皿に注ぐ。菌糸栽培の前にペトリ皿を室温で放置して十分に冷却する。
- 菌糸栽培を行う。
- 直径1cmのパンチと爪楊枝を121°Cで15分間オートクレーブ処理して予め用意しておきます。
- P. nicotianae菌糸寒天培養物に穴を開けて丸い菌糸マットを作る。
- 菌糸マットを取り出し、菌糸体側を下に置いたオートミール寒天培地の上に置き、菌糸体を暗所で25°Cで14日間インキュベートする。
- P. nicotianae 遊走子懸濁液を準備する。
- 各菌糸体培養液(15mL/ディッシュ)に0.1%KNO3溶液を加え、4°Cで20分間培養して胞子嚢を誘導した。
- 食器を25°Cで25分間保持し、遊走子を放出する。
- 遊走子懸濁液をビーカーに集め、顕微鏡及び血球計を用いて遊走子濃度を測定する。
- 遊走子濃度を滅菌水で1 x 104遊 走子/ mLに調整します。
4. 耐病性タバコ品種の同定
- Hoagland養液から苗を取り、ペトリ皿(90mm)の 中のP. nicotianae 遊走子懸濁液20mLに根を浸して接種し、暗所で25°Cで3時間。
- 接種後、タバコの苗を新しいペトリ皿に入れ、10mLの滅菌水で根を浸します。2枚のろ紙で覆って根を湿らせてください。皿を25°Cに保ち、16時間の明光/8時間の暗光周期で保管してください。
- 2〜3日後、疾患の重症度を観察する。
- 防除処理のために、タバコの苗木を10mLの滅菌水でシャーレに直接入れて根を浸し、2枚のろ紙で根を覆う。
注:各処理は3つの複製を有し、実験ごとに8つの植物であった。
- 防除処理のために、タバコの苗木を10mLの滅菌水でシャーレに直接入れて根を浸し、2枚のろ紙で根を覆う。
5. ニコチアナエ 菌感染の評価
- 接種後4〜5日後に疾患の重症度を評価する。中国の国家標準18に基づいて、個々の植物病害の重症度を0〜9のスケールでスコアリングする(表2、 図1)。
- 次の式18を使用して疾患指数を計算します。
疾患指数 =
ここで、a、b、c、d、e、および f は、各疾患重症度グレードの植物の数です。
注:疾患の重症度は6つのグレード18 に分けた(表3)。
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Representative Results
抵抗性品種BHおよび感受性品種XHJの4週齢の植物を、本稿で提示された方法を用いて P. nicotianae で挑戦した。実験は3回の反復で計画され、それぞれに1群あたり8本の植物がいた。2つのタバコ品種、BHおよびXHJの P.ニコチアナエ 感染を、 図2に提示する。接種後3日目に、XHJの場合、茎病変は茎の胴回りの約半分を覆い、葉の半分はわずかにしおれた。耐性品種BHでは、症状は認められなかった。接種後4日目に、XHJでは葉のしおれおよび重度の茎病変が生じたが、これらの症状はBHでは現れなかった。
接種後5日目に、個々の植物病害の重症度を記録し、中国の国家規格「タバコ病害及び害虫の等級及び調査方法」18 に基づいて算出した(表4)。BHの平均疾患指数は6.48であり、標準に従って耐性(R)とみなされ、XHJの平均疾患指数は76.85であり、標準に従って感受性(S)と考えられた。
接種効率を確認するため、相対病原体バイオマスをリアルタイムPCRにより定量した(図3)。植物および病原体のゲノムDNAを感染BHおよびXHJから単離し、CTABプロトコルを用いて感染後24時間、72時間、および168時間で収集した19。相対病原体バイオマスを、プライマー対Pn−Fw(5'−CTCCAGAACGTGTACATCCGG−3')/Pn−Rev(5'−TAGCGCCCTTCTCCTCAG−3')を用いて定量し、 P.ニコチアナエ20の40Sリボソームタンパク質S3A(WS21)を増幅し、およびNt−Fw(5'−CAAGGAAATCACCGCTTTGGG−3')/Nt−Rev(5'−AAGGGATGCGAGGATGGA-3')を用いて、タバコ参照遺伝子26S rRNA遺伝子21を増幅した。病原体とタバコgDNAとの間の発現フォールド変化は、2−ΔΔCT Ct法を用いて計算した。リアルタイムPCRの結果は表現型観察を確認した。
BHとXHJとの交配のBC4F2集団からの5つの子孫と、2つの中間抵抗性品種、K326およびYunyan87を、遊走子懸濁接種法およびオート麦粒接種法を用いて評価した(表5)。遊走子懸濁法は小型の苗木に対して行い、オート麦粒接種法は成体植物に対して行った。BC4F2集団の5つの子孫について、疾患指数は遊走子懸濁法で16.49〜77.60、オート麦粒法で10.33〜83.08の範囲であった。2つの感染方法間の耐性分類は、互いにほとんど一致していた。K326およびYunyan87の2つの中間抵抗性品種では、評価は両方の方法で「耐性」を示した。これらのデータは、異なる成長期間にタバコ植物に対して実施されているにもかかわらず、2つの接種方法間の相関関係を示している。
| オリジナル酒 | 比率 | 原液量(mL) | 栄養成分 | コンテンツ (g) |
| OL 1 | 1000× | 500 | マグネシウムSO4•7 H2O | 30.81 |
| OL 2 | 1000× | 500 | カ(NO3)2•4 H2O | 221.39 |
| OL 3 | 1000× | 500 | NaH2PO4•2 H2O | 19.5 |
| OL 4 | 1000× | 500 | NH4NO3 | 75.04 |
| OL 5 | 1000× | 500 | (NH4)2SO4 | 123.75 |
| OL 6 | 1000× | 500 | カクル2 | 104.06 |
| OL 7 | 1000× | 500 | FeSO4•7 H2O | 2.78 |
| Na2-EDTA | 3.73 | |||
| OL 8 | 1000× | 500 | K2SO4 · | 87.1 |
| OL 9 | 4000× | 1000 | MnCl2•4 H2O | 7.24 |
| H3BO3 · | 11.44 | |||
| ZnSO4•7 H2O | 0.88 | |||
| CuSO4•5 H2O | 0.32 | |||
| (NH4)6 Mo7O24•2 H2O | 0.36 |
表1:ホーグランド養液。
| 等級 | 表現型の出現 |
| グレード0 | 植物全体に症状はありません |
| グレード1 | 茎の胴回りの1/3または<1/3の葉がしおれている茎病変< |
| グレード3 | 茎の胴回りの1/3〜1/2または葉の1/3〜1/2の間の茎病変がわずかにしおれている |
| グレード5 | 茎病変>茎胴回りの1/2であるが、胴回りの周囲に完全にはないが、葉の1/2〜2/3がしおれている |
| グレード7 | 茎の胴回り全体または葉の>2/3の周りの茎病変がしおれている |
| グレード9 | 植物は死んで見える |
表2:ブラックシャンク病重症度ランキング。 「タバコ病害および害虫の等級および調査方法」(GB/T 23222-2008)の中国国家基準に基づいて、個々の植物病害の重症度を0〜9の尺度でスコア付けした。
| 疾患指数 | 抵抗の評価 |
| 0 | 高耐性または免疫性(I) |
| 0.1 から 20 | 耐性(R) |
| 20.1 から 40 | 適度な耐性(MR) |
| 40.1 から 60 | 中程度に感受性(MS) |
| 60.1 から 80 | 感受性(S) |
| 80.1 から 100 | 非常に感受性(HS) |
表3:疾患指数による耐性の評価。 疾患重症度は、疾患指数に従って6つのグレードに分けた。0は高耐性または免疫性(I)を意味し、0.1〜20は耐性(R)を意味し、20.1〜40は中程度耐性(MR)を意味し、40.1〜60は中程度感受性(MS)を意味し、60.1〜80は感受性(S)を意味し、80.1〜100は高感受性(HS)を意味する。
| 品種 | 繰り返す | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 疾患指数 | 意味する | 抵抗の評価 | |
| ティッカー | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 | 4.17 | 6.48 | ||
| 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 3 | 1 | 0 | 1 | 8.33 | R | |||
| 3 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 1 | 6.94 | ||||
| ティッカー | 1 | 7 | 5 | 7 | 7 | 9 | 7 | 7 | 7 | 77.78 | 76.85 | ||
| 2 | 9 | 7 | 9 | 7 | 5 | 9 | 7 | 5 | 80.56 | S | |||
| 3 | 7 | 5 | 7 | 9 | 5 | 9 | 5 | 5 | 72.22 | ||||
表4:BHおよびXHJにおける疾患指数および耐性。 BHの平均疾患指数は6.48で、標準に応じて耐性(R)を示し、XHJの平均疾患指数は76.85であり、標準に従って感受性(S)を示した。
| 遺伝子型 | 遊走子懸濁液 | オート麦粒法 | ||||||
| 実験1 | 実験2 | 意味する | 分類 | 実験1 | 実験2 | 意味する | 分類 | |
| ティッカー | 4.17 | 8.33 | 6.94 | R | 0 | 0 | 0 | 私 |
| ティッカー | 77.78 | 80.56 | 72.22 | S | 84.89 | 90 | 87.45 | ティッカー |
| K326 · | 12.5 | 12.5 | 12.5 | R | 5.39 | 15.67 | 10.53 | R |
| ユンヤン87 | 19.45 | 8.33 | 13.89 | R | 4.7 | 28.89 | 16.8 | R |
| C42-4. | 21.28 | 21.89 | 21.59 | さん | 7.56 | 13.11 | 10.33 | R |
| C13-4. | 18.16 | 14.81 | 16.49 | R | 38.89 | 19.66 | 29.27 | さん |
| C9-5. | 77.41 | 77.78 | 77.6 | S | 79.83 | 82.86 | 81.34 | ティッカー |
| C46-8. | 55.56 | 51.11 | 53.34 | さん | 62.91 | 72.65 | 67.78 | S |
| C66-9 · | 79.88 | 74.07 | 76.98 | S | 93.94 | 72.22 | 83.08 | ティッカー |
表5:遊走子懸濁接種法およびオート麦粒接種法による異なる遺伝子型におけるP.ニコチアナエ感染応答。遊走子懸濁接種法は小型苗に、オート麦粒接種法は成体植物に対して行った。これらのデータは、遊走子懸濁接種法とオート麦粒接種法との相関関係を示すものである。K326およびYunyan87は中程度のレベルの耐性を有し、C42-4、C13-4、C9-5、C46-8、C66-9はBHとXHJの間の交配のBC4F2集団からの子孫である。植物は、免疫性、耐性性、中等度耐性、中等度感受性、感受性、または高感受性に分類された。
図1:各グレードの症状 。(A)グレード0、全草症状なし。(b)グレード1、茎胴回りの<1/3または<1/3葉の茎病変部がしおれている。(c)グレード3、茎胴回りの1/3〜1/2の間の茎病変、または葉の1/3〜1/2の間の茎病変がわずかにしおれている。(D)グレード5の、茎病変>茎胴回りの1/2であるが、胴回りの周囲に完全にはない、または葉の1/2〜2/3の間がしおれている。(e)グレード7、茎胴回り全体または葉の>2/3の周囲の茎病変。(F) グレード9、植物は死んでいるように見える。赤い矢印は茎病変を示す。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:2つのタバコ遺伝子型で観察された変動。 (A)接種後3日目の耐性品種BHにおける全草症状のない。(b)茎病変は、接種後XHJ3日目に茎胴回りの1/2程度及び葉の1/2程度がややしおれている。(c)接種後4日目の抵抗性品種BHにおいて全草無症状。(d)茎病変>茎胴回りの1/2、胴回りの周囲に完全にはないが、接種後4日目に罹りやすい品種XHJにおいて葉の1/2〜2/3の間しおれている。赤い矢印は茎病変を示す。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:接種後24時間、72時間、および168時間における感染BHおよびXHJにおける 相対的P.ニコチアナエ バイオマス定量。 これは、タバコ26S rRNA遺伝子と比較した P. nicotianae WS21遺伝子増幅の比率として算出される。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
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Discussion
栽培タバコにおけるP. nicotianae耐性を改善するために、複数の抵抗性源が用いられてきた。単一の優性R遺伝子であるPhpおよびPhlは、それぞれニコチアナ・プラムバギニフォリアおよびニコチアナ・ロンギフローラから侵入されている10。葉巻タバコ品種のBeinhart 1000は、P. nicotianae13に対する定量的耐性の報告された最高レベルを有する。複数の間隔マッピング実験は、少なくとも6つの量的形質遺伝子座(QTL)がこのラインの抵抗に寄与し得ることを示唆している13,22。上記の耐性源に加えて、別のエイリアン遺伝子Wzも、レース0およびレース123,24に対して高レベルの耐性を付与することが見出されている。複数の抵抗性源と抵抗性品種の複雑な遺伝的背景を考慮すると、1)P. nicotianae耐性タバコ遺伝子型の同定、2)抵抗性品種の育種、3)植物病原体相互作用の分子機構研究には、正確で信頼性の高い抵抗性評価方法が必要である。P. nicotianae感染の重症度を評価するために使用された以前の方法は、時間がかかり、接種強度を制御することは困難であった。したがって、P.ニコチアナエ耐性評価のための新しい方法を設定することが急務である。
自然感染プロセスを模倣することが、私たちの新しい方法の重要なポイントです。第一に、 P. nicotianaeの典型的なライフサイクルの間、遊走子は植物病害を開始する主要な感染物質である。遊走子が植物表面に到達すると、それらは不動の嚢胞となり、続いて発芽し、生殖管を形成する。そして、生殖管25の先端で付着器が産生される。我々のプロトコールでは、遊走子懸濁液を接種源として用い、これは自然感染状況を模倣した。第二に、 ニコチアナ・ベンタミアナ の葉では、嚢胞は3時間26で発芽し、表皮細胞をコロニー形成した。 シロイヌ ナズナの根では、すべての被嚢胞子が接種後6時間で根に侵入することに成功しました27。我々のアプローチでは、接種プロセスでは、 P. nicotianae 遊走子懸濁液に根を暗闇の中で3時間浸漬し、自然環境を模倣し、病原体のコロニー形成を促進し、安定的かつ効果的な感染をもたらした。
タバコ中のニコチアナエ菌耐性を評価するために最も頻繁に使用されるアプローチであるオート麦穀物法は、多数の植物を接種するのに効率的かつ容易である7、11、12、13、14、15、16。ただし、いくつかの欠点があります。主な欠点は、制御されていない接種強度であり、これは精密繁殖におけるその適用を制限する。オート麦粒法および他の2つの既存のアプローチと比較して、この新しいアプローチでは、遊走子懸濁液が接種源として使用されるため、接種強度は制御可能で調整可能である。植物を水耕栽培環境で培養すると、土壌の干渉がなくなり、評価精度が向上します。しかし、この方法には1つの制限があり、成体植物では使用できないということです。一方、オート麦粒法は成体植物の大規模抵抗性スクリーニングに適用可能である7,13。したがって、この方法およびオート麦穀物法は、タバコ植物の異なる成長期間および異なる状況で互いに補完し合うことができる。
ここで説明するプロトコルは、苗の段階で のP. nicotianae による感染に対するタバコの耐性を評価するための効率的で信頼性の高い方法です。このプロトコルは、育種や分子機構の研究に使用できます。
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Disclosures
著者らは開示するものは何もありません。
Acknowledgments
この研究は、中国国家自然科学財団(31571738)と中国農業科学技術イノベーションプログラム(ASTIP-TRIC01)から資金提供を受けました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| (NH4)2SO4 | Sinopharm | 10002917 | Analytical Reagent |
| (NH4)6 Mo7O24•2 H2O | Sinopharm | XW131067681 | Analytical Reagent |
| 1.5 ml Safe-lock Microcentrifuge Tubes | Eppendorf | 30120086 | Used for Sample Extarction |
| 2 ml Safe-lock Microcentrifuge Tubes | Eppendorf | 30120094 | Used for Sample Extarction |
| Agar | MDBio, Inc | 9002-18-0 | Materials of Culture Medium |
| Analytical Balance | AOHAOSI | AX2202ZH | Equipment |
| Autoclave | Yamatuo | SQ510C | Equipment |
| Autoclave | YAMATUO | SQ510C | Equipment |
| Beaker | Bio Best | DHSB-2L | Materials of Culture Medium |
| Biological Incubator | JINGHONG | SHP-250 | Equipment |
| Ca(NO3)2•4 H2O | Sinopharm | 80029062 | Analytical Reagent |
| CaCl2 | Sinopharm | 10005817 | Analytical Reagent |
| CuSO4•5 H2O | Sinopharm | 10008218 | Analytical Reagent |
| Electromagnetic Oven | Bio Best | DHDCL | Equipment |
| FeSO4•7 H2O | Sinopharm | 10002918 | Analytical Reagent |
| Filter Paper | Bio Best | DHLZ-9CM | Material |
| Fluorescence Ration PCR Instrument | Roche | LightCycler96 | Equipment |
| Gauze | Bio Best | 17071202 | Materials of Culture Medium |
| H3BO3 | Phytotechnology | B210-500G | Analytical Reagent |
| Hemocytometer | Solarbio | 17072801 | Material for disease-resistant identification |
| K2SO4 | Sinopharm | 10017918 | Analytical Reagent |
| KNO3 | Sinopharm | 10017218 | Analytical Reagent |
| KT Foam Sheet | Bio Best | DHKTB | Material for Seedling |
| Low Constant Incubator | Jinghong | SHP-250 | Equipment |
| Measuring Cylinder | Bio Best | DHBLLT-1000ML | Materials of Culture Medium |
| MgSO4•7 H2O | Sinopharm | 10013080 | Analytical Reagent |
| Microscope | ECHO | RVL-100-G | Equipment |
| MnCl2•4 H2O | Sinopharm | G5468154 | Analytical Reagent |
| Na2-EDTA | Sinopharm | G21410-250 | Analytical Reagent |
| NaH2PO4•2 H2O | Sinopharm | 20040717 | Analytical Reagent |
| NH4NO3 | Sinopharm | B64586-100g | Analytical Reagent |
| Oatmeal | Bio Best | DHYMP-1.5KG | Materials of Culture Medium |
| Petri Dish | Bio Best | DHPYM-9CM | Material for disease-resistant identification |
| Pipettor | THERMO | S1 | Equipment |
| Potting | Bio Best | DHYCXHP-12CM | Material for Seedling |
| Potting Soil | Bio Best | DHYMJZ-50L | Seedling Material |
| Punch | Bio Best | DHDKW | Material |
| qRT-PCR Plate | Monad | MQ50401S | qRT-PCR Plate |
| SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit | Accurate Biology | AG11718 | PCR Reagent |
| Toothpick | Bio Best | DHYQ-900 | Material |
| Total RNA Kit II | Omega | R6934-01 | PCR Reagent |
| TransScript® II One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix | Transgen | AH311-02 | PCR Reagent |
| Trays | Bio Best | DHYMTP-90G | Material for Seedling |
| Vermiculite | Bio Best | DHZS | Seedling Material |
| Water Purification System | HEAL FORCE | HSE68-2 | Equipment |
| ZnSO4•7 H2O | Sinopharm | 10024018 | Analytical Reagent |
References
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