Summary
यह प्रोटोकॉल माउस में मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालने के तरीके के चरण-दर-चरण विवरण प्रदर्शित करता है। यह जबड़े की हड्डी के उपचार और पुनर्जनन पर ध्यान केंद्रित करने वाले शोधकर्ताओं के लिए एक वैकल्पिक विधि प्रदान करता है।
Abstract
यह अध्ययन वायुकोशीय हड्डी पुनर्जनन और इंट्रामेम्ब्रेनस ओसिफिकेशन का अध्ययन करने के लिए एक व्यावहारिक मॉडल प्रदान करने के लिए मुराइन जबड़ा में एक दाढ़ निष्कर्षण मॉडल के विकास का परिचय देता है। इस मॉडल को स्थापित करने के लिए सी 57 / जे 6 चूहों का उपयोग मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालने के लिए किया गया था। उन्हें इच्छामृत्यु दी गई, और द्विपक्षीय जबड़ा क्रमशः 1 सप्ताह और 4 सप्ताह की सर्जरी के बाद काटा गया। सफल सर्जरी का प्रदर्शन करने के लिए बाद में सीरियल स्टीरियोस्कोपिक फसल, हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन और इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग का प्रदर्शन किया गया। सर्जरी के तुरंत बाद, स्टीरियोस्कोपिक छवियों ने एक खाली निष्कर्षण सॉकेट प्रदर्शित किया। 1 सप्ताह में हेमटोक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) और सर्जरी के बाद 4 सप्ताह में मैसन धुंधला होने से पता चला कि मूल जड़ का क्षेत्र क्रमशः आंशिक रूप से और पूरी तरह से हड्डी के ट्रेबेक्यूसे से भरा था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग से पता चला है कि, होमोस्टेसिस पक्ष की तुलना में, एसपी 7 अभिव्यक्ति सर्जरी के 1 सप्ताह बाद बढ़ गई, जो वायुकोशीय फोसा में जोरदार ऑस्टियोजेनेसिस का सुझाव देती है। इन सभी परिणामों ने एक व्यावहारिक मुराइन दांत निष्कर्षण सॉकेट हीलिंग मॉडल का प्रदर्शन किया। जबड़े की हड्डी दोष चिकित्सा या सॉकेट उपचार के तंत्र का खुलासा करने वाले आगामी अध्ययन इस विधि को अपना सकते हैं।
Introduction
दांत निकालने के बाद सॉकेट उपचार एक सामान्य नैदानिक परिदृश्य है, जिसके परिणामस्वरूप अवांछनीय उपचार 1,2,3 के तहत सॉकेट रक्तस्राव, शुष्क सॉकेट, या यहां तक कि जबड़े ऑस्टियोमाइलाइटिस जैसी अशोभनीय जटिलताएं हो सकती हैं। ये कोमोर्बिडिटी रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को खराब कर सकती हैं और इससे भी बदतर, बड़े पैमाने पर हड्डियोंके नुकसान के कारण कृत्रिम पुनर्वास को चुनौती दे सकती हैं। यद्यपि सॉकेट उपचार चरणों को स्पष्ट किया गया है, लेकिन वे विभिन्न रोग का सामना करते समय दंत निष्कर्षण सर्जरी के बाद नैदानिक देखभाल को निर्देशित करने के लिए अपर्याप्तहैं।
सॉकेट उपचार प्रक्रिया में अंतर्निहित तंत्र की बेहतर समझ हासिल करने और उपरोक्त स्थितियों को रोकने के लिए पशु मॉडल के आधार पर कई अध्ययन किए गए हैं। एसपी 7 ओस्टियोब्लास्ट भेदभाव में एक मास्टर नियामक है, जो कंकाल के विकास, हड्डी हेमोस्टेसिस और हड्डी पुनर्जनन 5,6 में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। तर्कसंगत सॉकेट उपचार मॉडल हड्डी पुनर्जनन में एसपी 7 पोस्ट-ट्रॉमेटिक के अतिरेक को प्रदर्शित कर सकते हैं। इसके अलावा, लंबी हड्डी के फ्रैक्चर उपचार से अलग, केवल एक ही ओस्टोजेनिक प्रक्रिया, इंट्रामेम्ब्रानस ओसिफिकेशन, में निष्कर्षण सॉकेट7 की उपचार प्रक्रिया शामिल है। यह पशु दांत निष्कर्षण मॉडल को इम्प्लांट-आधारित उपचारों का अध्ययन करने के लिए इष्टतम बनाता है, क्योंकि इम्प्लांट ऑस्सोइंटिग्रेशन एक ही ओस्टोजेनिक नियम8 का पालन करता है।
दशकों से, दांत निष्कर्षण मॉडल चूहों, खरगोशों और कुत्तों में किया गया है, क्योंकि इन प्रजातियों में बड़े दांत होते हैं जो 9,10,11 पर संचालित करने के लिए सुविधाजनक होते हैं। हालांकि, आनुवंशिक संशोधन के लिए बढ़ती मांगों को देखते हुए और मनुष्यों के लिए अधिक अनुकूली आनुवंशिक पृष्ठभूमि के रूप में, चूहों का उपयोग तेजी से दांत निष्कर्षण मॉडल स्थापित करने के लिए किया जा रहा है। इसलिए, शोधकर्ता केवलफेनोटाइप्स को देखने के बजाय जीनोम-संशोधित चूहों का उपयोग करके सॉकेट उपचार प्रक्रिया में एक विशिष्ट सेल आबादी की भूमिका को उजागर कर सकते हैं। मुराइन दांत निष्कर्षण सॉकेट मॉडल के बीच, पिछले अध्ययनों ने मुराइन मैक्सिलरी दांत और छेदक निष्कर्षण सॉकेट 13,14,15,16 की स्थापना और उपचार प्रक्रिया का प्रदर्शन किया है। हालांकि, रोग का निदान का उपचार पैटर्न, और जासूसी और अवलोकन समय बिंदु, प्रोटोकॉल में भिन्न हो सकते हैं। यह विद्वानों के लिए एक म्यूरिन सॉकेट हीलिंग मॉडल स्थापित करने के लिए एक सार्वभौमिक मानदंड की अपील करता है।
इस अध्ययन का उद्देश्य उपरोक्त मुद्दों के लिए एक व्यावहारिक मुराइन सॉकेट उपचार मॉडल का गठन करना था। चूहों में जबड़ा दाढ़ में मैक्सिलरी मोलर और छेदक की तुलना में विशिष्ट रूपात्मक लक्षण होते हैं, जो अद्वितीय फायदे और नुकसान लाते हैं। चूंकि मुराइन जबड़ा पर ध्यान केंद्रित करने वाले मॉडल वर्तमान में वैक्यूम-आधारित हैं, इसलिए इस प्रोटोकॉल ने चूहों में मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालने के लिए एक निपुण विधि प्रदान करने की कोशिश की। हमें उम्मीद है कि यह प्रोटोकॉल सॉकेट उपचार के अंतर्निहित तंत्र को उजागर करने और नैदानिक देखभाल का संकेत देने के लिए नए विचारों के साथ बुनियादी शोधकर्ताओं को प्रबुद्ध करेगा।
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Protocol
इस अध्ययन में सभी पशु प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई और वेस्ट चाइना स्कूल ऑफ स्टोमेटोलॉजी, सिचुआन विश्वविद्यालय (डब्ल्यूसीएचएसआईआरबी-डी-2017-041) की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। वयस्क C57BL/6 चूहों, एक वाणिज्यिक स्रोत से प्राप्त ( सामग्री की तालिका देखें), वर्तमान अध्ययन के लिए उपयोग किया गया था।
1. प्रीसर्जिकल तैयारी
- उपकरण तैयार करना
- लिफ्ट के रूप में उपयोग करने के लिए डिस्पोजेबल सिरिंज (26 जी, 25 जी, 23 जी; सामग्री की तालिका देखें) की विभिन्न सुइयां तैयार करें। सुई के सिर को लगभग 20 ° -40 ° घुमाएं, जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है।
- टूथेड ऑप्थेल्मिक चिमटी को फोर्सप्स के रूप में तैयार करें। सुनिश्चित करें कि यह चूहों के दाढ़ के आकार में फिट बैठता है और दाढ़ को मजबूती से पकड़ सकता है। आदर्श चिमटी आकार चित्रा 1 ए, बी 3 में दिखाया गया है।
- एक रबर बैंड (जिसे मेडिकल लेटेक्स दस्ताने से फाड़ा जा सकता है) को माउथ ओपनर के रूप में उपयोग करने के लिए प्राप्त करें, सर्जिकल प्लेटफॉर्म के रूप में फोम बोर्ड या कॉर्कबोर्ड, सर्जिकल क्षेत्र को रोशन करने के लिए एक हेडलैम्प, और पोस्टऑपरेटिव पुनरुद्धार के लिए एक हीटिंग पैड। एक सूखी कपास की गेंद को छोटे टुकड़ों में फाड़ें और प्रक्रिया के दौरान रक्तस्राव होने पर इसे सर्जिकल साइट पर लागू करें।
- संज्ञाहरण की तैयारी
- माउस को किसी भी उपयुक्त एनेस्थेटिक प्रोटोकॉल द्वारा एनेस्थेटाइज किया जा सकता है जो 'पैर की अंगुली पिंच' विधि के माध्यम से पुष्टि की गई सामान्य संज्ञाहरण प्राप्त करता है। संज्ञाहरण के बाद, माउस की आंखों पर पशु चिकित्सा मरहम लागू करें।
नोट: पसंदीदा सामान्य एनेस्थेटिक प्रोटोकॉल हो सकता है: ज़ाइलेज़िन (10 मिलीग्राम / किग्रा) और केटामाइन (100 मिलीग्राम / किग्रा) इंट्रापरिटोनियल (आईपी) के साथ प्रेरण और रखरखाव;
इस अध्ययन के लिए, आइसोफ्लुरेन और 1% पेंटोबार्बिटल सोडियम (50 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) का उपयोग आवश्यकतानुसार अतिरिक्त खुराक के साथ संज्ञाहरण प्रेरण और रखरखाव के लिए किया गया था।
- माउस को किसी भी उपयुक्त एनेस्थेटिक प्रोटोकॉल द्वारा एनेस्थेटाइज किया जा सकता है जो 'पैर की अंगुली पिंच' विधि के माध्यम से पुष्टि की गई सामान्य संज्ञाहरण प्राप्त करता है। संज्ञाहरण के बाद, माउस की आंखों पर पशु चिकित्सा मरहम लागू करें।
- कीटाणुशोधन और नसबंदी की तैयारी
- 75% इथेनॉल स्प्रेयर के साथ ऑपरेशन प्लेटफॉर्म और ओपन-एयर ओवरहेड को कीटाणुरहित करें। प्रत्येक माउस प्रक्रिया से पहले, डिस्पोजेबल सुइयों के एक नए सेट के उपयोग की सिफारिश की जाती है।
नोट: टूथेड चिमटी पुन: प्रयोज्य हैं और भाप नसबंदी जैसे किसी भी पसंदीदा तरीके का उपयोग करके निष्फल किया जा सकता है।
- 75% इथेनॉल स्प्रेयर के साथ ऑपरेशन प्लेटफॉर्म और ओपन-एयर ओवरहेड को कीटाणुरहित करें। प्रत्येक माउस प्रक्रिया से पहले, डिस्पोजेबल सुइयों के एक नए सेट के उपयोग की सिफारिश की जाती है।
2. शल्य चिकित्सा प्रक्रिया
- माउस और उसके जबड़े का निर्धारण।
- चिपकने वाला टेप का उपयोग करके लापरवाह स्थिति में माउस को एक सर्जिकल प्लेटफॉर्म से बांधें। ऑर्बिटल ईयर प्लेन के अनुरूप दो 26 ग्राम सुइयों को पिन करें और अन्य दो 26 ग्राम सुइयों को जबड़े के नीचे आसानी से पिन करें।
- सुइयों के चारों ओर रबर बैंड लागू करें और मुंह को खुला रखने के लिए छेदक को पार करें। जीभ को थोड़ा बाहर खींचें और इसे सर्जिकल साइड के विपरीत रबर बैंड के नीचे ठीक करें, ताकि इसे दृश्य के क्षेत्र में बाधा डालने से रोका जा सके (चित्रा 1 सी)।
- डिस्टल प्रतिरोध को खत्म करना
- चिमटी के साथ दाढ़ को धीरे-धीरे पकड़ें, 23 ग्राम की सुई को बाहर की जड़ की वायुकोशीय हड्डी में मजबूर करें, और एक अंतराल प्रस्तुत करें।
नोट: यह कदम बहुत सावधानी के साथ लिया जाना चाहिए, क्योंकि एक सुई जो बहुत गहरी एम्बेडेड है, संभवतः जड़ को तोड़ देगी। - इसके बाद, अंतराल का विस्तार जारी रखने के लिए 25 ग्राम सुई में बदलें, और धीरे-धीरे सुई को आगे और भाषाई रूप से (माउस शारीरिक स्थिति के साथ) घुमाते हुए पेरिपिकल क्षेत्र की ओर नाजुक रूप से प्रगति करें ताकि वायुकोशीय फोसा से जड़ को दबाया जा सके।
- चिमटी के साथ दाढ़ को धीरे-धीरे पकड़ें, 23 ग्राम की सुई को बाहर की जड़ की वायुकोशीय हड्डी में मजबूर करें, और एक अंतराल प्रस्तुत करें।
- मेसियल प्रतिरोध को समाप्त करना
- जब पर्याप्त जगह हो, तो रूट फोर्क में डालने के लिए 23 ग्राम सुई का उपयोग करें और मोलर को ओक्लुसल रूप से उठाएं। दाढ़ को कसकर पकड़ने के बाद, एक और 23 ग्राम सुई लें और इसे एक अंतराल बनाने के लिए लिंगुअल मेसिअल पेरियोडोंटल झिल्ली में मजबूर करें।
- फिर, 25 ग्राम सुई के साथ प्रतिस्थापित करें और धीरे-धीरे आगे और धीरे-धीरे घुमाएं। यदि कुछ अंतर्निहित बाधाएं दाढ़ के लक्सेशन में बाधा डालती हैं, तो रूट एपेक्स में प्रवेश करने के लिए 26 ग्राम सुई का उपयोग करें, और संचालन को दोहराएं।
- अंतिम निष्कर्षण।
- दांत निकालें और, निकालते समय, सुनिश्चित करें कि मुकुट ऑक्लुसल प्लेन से ऊपर उठता है और दो बरकरार जड़ें स्पष्ट रूप से देखी जा सकती हैं।
नोट: दांत के लक्सेशन (अव्यवस्था) को प्रक्रिया का सबसे दर्दनाक और परेशान क्षण माना जाता है। दांत को विस्थापित करने से पहले, एनेस्थेटिक गहराई को पैर की अंगुली पिंच परीक्षण का उपयोग करके फिर से मूल्यांकन किया जाना चाहिए, और तदनुसार, यदि आवश्यक हो तो एनेस्थेटिक एजेंट की एक मध्यम खुराक दी जानी चाहिए।
- दांत निकालें और, निकालते समय, सुनिश्चित करें कि मुकुट ऑक्लुसल प्लेन से ऊपर उठता है और दो बरकरार जड़ें स्पष्ट रूप से देखी जा सकती हैं।
- ऑपरेशन के बाद की देखभाल
- दांत निकालने के बाद, रक्तस्राव को रोकने के लिए सूखी कपास लागू करें, जीभ को फिर से रखें, कार्प्रोफेन (5 मिलीग्राम / किग्रा) को चमड़े के नीचे प्रशासित करें, और एनेस्थीसिया से उबरने तक माउस को निरंतर तापमान हीटिंग पैड पर रखें।
3. माउस जबड़ा और निष्कर्षण सॉकेट की इमेजिंग।
- नमूने की तैयारी
- गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा माउस को इच्छामृत्यु करें। जबड़ा और जाइगोमैटिक आर्क से जुड़ी कंकाल की मांसपेशियों को काटने के लिए नेत्र कैंची का उपयोग करें। जबड़े के निचले किनारे के साथ गले से आरोही शाखा तक और फिर कोंडिल के पीछे की ओर काटें, और फिर जबड़े को नीचे खींचें और निचले छेदक मध्य रेखा के साथ काट लें। इस तरह, दो अलग-अलग जबड़े काटे जाते हैं।
- मानक प्रक्रिया17 का पालन करते हुए निर्धारण, विखनिजीकरण और निर्जलीकरण करें। 17 एम्बेड करते समय, सुनिश्चित करें कि ऑक्लुसल प्लेन कैसेट के किनारे के समानांतर है ( सामग्री की तालिका देखें)। कैसेट के निचले हिस्से पर जबड़ा ठीक करें, इसके निचले किनारे को मुर्गा (चित्रा 2)।
नोट: यह प्रोटोकॉल जबड़ा क्षेत्र के विमान प्रदान करता है।
- माइक्रोटोम पर नमूना ठीक करना
- जड़ के गूदे के साथ सहवर्ती मुकुट लुगदी की एक एकीकृत छवि प्राप्त करने के लिए, माइक्रोटोम में नमूना क्लैंप को नियंत्रित करें ताकि कंडेल और क्राउन साइड को 5 ° -20 ° अधिक फैलाया जा सके (चित्र 2)।
- अनुभागों को तैयार करना
नोट: कोंडिल हमेशा काटने वाली पहली शारीरिक संरचना है। जब यह दूर हो जाता है, तो दाढ़ क्षेत्र को कई स्लाइस में काटा जा सकता है।- माइक्रोटोम रेंज को 5 μm तक स्थानांतरित करें, हर आठ स्लाइस इकट्ठा करें, और अंतिम स्लाइस में डेंटिन की तलाश करें। यदि क्राउन डेंटिन पहली बार किसी भी रूट एपिकल डेंटिन के बिना दिखाई देता है, तो जड़ क्षेत्र को बाहर निकालने के लिए नमूना क्लैंप को समायोजित करें, और इसके विपरीत।
- अनुभागों को एकत्र करना
नोट: काटने का कोण तब तक उपयुक्त है जब तक कि मुकुट और एपिकल क्षेत्र दोनों में डेंटिन समान रूप से प्राप्त न हो जाए।- इस दिशा में काटें और माइक्रोस्कोप के नीचे स्लाइस देखें जब तक कि दंत गूदा मुकुट और जड़ों दोनों में दिखाई न दे। पैराफिन नमूना17 की सतह पर दाढ़ की एक अस्पष्ट समोच्च दिखाई देने पर खंडों को इकट्ठा करें।
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Representative Results
इस विधि के व्यावहारिक उपयोग को स्पष्ट करने के लिए, दो स्वस्थ सी 57बीएल /6 चूहों (3 महीने पुराने, दोनों मादा) के दाहिने मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकाला गया और क्रमशः 1 सप्ताह और 4 सप्ताह के लिए पालन किया गया। क्षतिग्रस्त बाएं जबड़े को स्वस्थ नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। चित्रा 1 ए सर्जिकल उपकरण की विशिष्ट विशेषताओं को दर्शाता है, जिसमें 26-23 जी सुई और एक टूथेड ऑप्थेल्मिक चिमटी शामिल है। 26 ग्राम सुई को पिनपॉइंट-हटा दिया जाता है और मोड़ दिया जाता है। 25 ग्राम सुई को पिनपॉइंट पर लगभग 25 ° पर मोड़ा जाता है। 23 ग्राम सुइयां सर्जरी के लिए लिनपिन हैं और क्रमशः लगभग 25 ° और 35 ° पर मुड़ी हुई हैं, पिनपॉइंट पर (चित्रा 1 बी 1, बी 2)। चिमटी में 1 मिमी लंबा दांत होता है जो मुराइन मोलर्स के आकार में फिट बैठता है (चित्रा 1 बी 3)। चित्रा 1 सी सर्जरी से पहले माउस की स्थिति दिखाता है। मुख्य बिंदु सिर के चारों ओर चार पिनों का स्थान और बाईं ओर रबर बैंड के नीचे जीभ को ठीक करना है।
चित्रा 3 ए दाएं मैंडिबुलर पहले दाढ़ की स्थिति और आकृति विज्ञान को दर्शाता है। चित्रा 3 बी इंगित करता है कि दांत सॉकेट तुरंत थक्के से भर जाता है। 1 सप्ताह और 2 सप्ताह में, चूहों को इच्छामृत्यु दी गई थी, और जबड़े को डिमिनरलाइज्ड किया गया था, पैराफिन17 में एम्बेडेड किया गया था, और स्लाइस में विभाजित किया गया था। चित्रा 4 ए 1 सप्ताह में सॉकेट की उपचार प्रक्रिया प्रदर्शित करता है। कुछ स्पंज जैसी त्रिकोणीय हड्डियां बन गईं, लेकिन थक्का बना रहा। 2 सप्ताह (चित्रा 4 बी) में उपचार प्रक्रिया में, सॉकेट पूरी तरह से स्पंज हड्डियों से भरा हुआ था, जिसका अर्थ है कि पुनर्जनन लगभग पूरा हो गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आईएफ) धुंधला होने से हिस्टोपैथोलॉजी धुंधला होने के परिणामों की भी पुष्टि हुई। चित्रा 5 में, एसपी 7 को अस्थि मज्जा कोशिकाओं में व्यापक रूप से व्यक्त किया गया था, विशेष रूप से मार्जिन में, जो हड्डी बनाने वाला मोर्चा है। होमियोस्टैसिस अवस्था के तहत, त्रिकोणीय हड्डियां सुसंगत और सुसंगत थीं, जिसमें अस्थि मज्जा कोशिका ब्लॉक द्वीपों की तरह छिड़के हुए थे। हालांकि, सर्जरी के 1 सप्ताह बाद, कई एसपी 7-व्यक्त करने वाली कोशिकाओं ने निष्कर्षण सॉकेट को भर दिया, जिसमें नवगठित त्रिकोणीय हड्डी चारों ओर छिड़की गई थी। सर्जरी के 4 सप्ताह बाद, स्थिति उलट गई और बड़े पैमाने पर मिश्रित त्रिकोणीय हड्डी में बदल गई, और एसपी 7-व्यक्त करने वाली कोशिकाओं की गतिविधि होमियोस्टैसिस अवस्था के करीब पहुंचने वाले स्तर तक गिर गई।
चित्रा 1: सर्जिकल उपकरणों और सर्जरी से तैयार चूहों की वस्तु छवियां। (ए) सर्जिकल उपकरणों में मुख्य रूप से 26, 25, और 23 ग्राम सुई और एक टूथेड चिमटी शामिल थी। (बी) सुइयों को 20 ° -40 ° (बी 1,2) पर पिनपॉइंट पर झुकाया गया था। चिमटी के दांत का आकार लगभग 1 मिमी (बी 3) होना चाहिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: दांत निष्कर्षण से सेक्शनिंग तक प्रक्रिया का फ्लोचार्ट। यह छवि दांत निष्कर्षण से सेक्शनिंग तक एक योजनाबद्ध प्रवाह प्रदर्शित करती है। प्रोटोकॉल के अनुसार पहले दाहिने मैंडिबुलर मोलर को निकाला गया था, फिर माउस को इच्छामृत्यु दी गई थी, और जबड़ा काटा गया था। कटाई पर, जबड़े को 24 घंटे के लिए 4% पीओएम में भिगोया गया था, फिर 10% ईडीटीए में फिर से भिगोया गया था; तरल पदार्थ को 14 दिनों के लिए हर दिन नवीनीकृत किया गया था। इसके बाद, नमूने निर्जलित थे और एक सार्वभौमिक प्रोटोकॉल का पालन करते हुए पैराफिन में एम्बेडेड थे। गुच्छा या भाषाई पक्ष को नीचे की ओर होना चाहिए, क्योंकि विमान के स्लाइस को विभाजित किया जाना चाहिए। अंत में, नमूना क्लैंप पर नमूना तय करते समय, कोंडिल और क्राउन पक्ष 5 ° -20 ° उभरे हुए होने चाहिए। संक्षेप: पीओएम = पैराफॉर्मलडिहाइड; ईडीटीए = एथिलीनडायमाइन टेट्रा-एसिटिक एसिड। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 3: माउस मैंडिबुलर पहले दाढ़ और निष्कर्षण सॉकेट की स्टीरियोस्कोपिक छवियां। (ए) दाएं मैंडिबुलर पहले दाढ़ की स्टीरियोस्कोपिक छवि, पीले तीर द्वारा इंगित की जाती है। (बी) सर्जरी के बाद पहले दाएं मैंडिबुलर मोलर का निष्कर्षण सॉकेट, पीले तीर द्वारा इंगित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 4: एच एंड ई धुंधला। सर्जरी के बाद (ए) 1 सप्ताह और (बी) 4 सप्ताह में निष्कर्षण सॉकेट का एच एंड ई धुंधला होना। पीले तीर पहले दाढ़ निष्कर्षण सॉकेट उपचार की निकटता में मैंडिबुलर दूसरे दाढ़ का संकेत देते हैं। धराशायी आयत रेखा उपचार के पहले दाढ़ निष्कर्षण सॉकेट क्षेत्र को इंगित करती है। स्केल सलाखों: 500 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: आईएफ धुंधला होने के माध्यम से एसपी 7 का पता लगाना। यह छवि माउस जबड़ा अस्थि मज्जा कोशिकाओं और आसपास के त्रिकोणीय हड्डी में एसपी 7 अभिव्यक्ति के वितरण को एक होमियोस्टैसिस अवस्था (स्वस्थ नियंत्रण), क्रमशः 1 सप्ताह और 4 सप्ताह के बाद सर्जरी के बाद दिखाती है। सफेद डैश्ड लाइन ने ट्रेब्युलर हड्डी के अनुमानित पैमाने को समेट दिया। पीले तीर ों ने विशिष्ट एसपी 7-व्यक्त कोशिकाओं का संकेत दिया। स्केल सलाखों: 50 μm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
मुराइन सॉकेट हीलिंग मॉडल हड्डी के उपचार और पुनर्जनन में अंतर्निहित तंत्र को उजागर करने के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है, अंततः नैदानिक चुनौतियों को हल करता है। मौजूदा अध्ययनों ने छेदक निष्कर्षण मॉडल और मैक्सिलरी मोलर निष्कर्षण मॉडल की संभावना का प्रदर्शन किया है, जबकि अध्ययनों ने मैंडिबुलर फर्स्ट मोलर मॉडल13,17,18 का उपयोग नहीं किया है। हालांकि, कृंतक जीवन के लिए छेदक महत्वपूर्ण हैं, और उनकी हानि घातक हो सकती है। इसके अलावा, चूंकि मैक्सिला में हड्डी जबड़े की तुलना में अधिक कैंसेलस है, इसलिए उपचार प्रक्रिया के दौरान अंतर्निहित तंत्र में कुछ असमानता हो सकती है। इसलिए, एक व्यवहार्य मैंडिबुलर पहला दाढ़ निष्कर्षण मॉडल स्थापित करना आवश्यक है।
दांत निकालने में सबसे महत्वपूर्ण विचारजड़ टूटने से बचना है। मुराइन दाढ़ छोटे और कमजोर होते हैं, और जबड़े में अवशेष जड़ों को निकाला नहीं जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में, हालांकि, पूरी सर्जरी के दौरान जड़ तोड़ने वाला जोखिम मौजूद है। इस प्रकार, दाढ़ को कसकर पकड़ना और बल को सख्ती से नियंत्रित करना महत्वपूर्ण है। विशिष्ट होने के लिए, डिस्टल प्रतिरोध को समाप्त करते समय, किसी को सावधान रहने की आवश्यकता होती है कि ताज को कुचल न दें; मेसियल प्रतिरोध को समाप्त करते समय, किसी को सतर्क रहने की आवश्यकता होती है ताकि सुई जड़ के कांटे से न बढ़े; अंतराल प्रस्तुत करने के लिए सुइयों का उपयोग करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि अंतराल जड़ और वायुकोशीय प्रक्रिया के बीच माना जाता है, इसलिए किसी को अधिक घूर्णी बल लागू नहीं करना चाहिए, क्योंकि इससे जड़ टूटने का उच्च जोखिम हो सकता है।
म्यूरिन मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालना कठिन है और मास्टर करने के लिए पर्याप्त प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। ऑपरेशन के दौरान, निम्नलिखित सहित आपात स्थिति हो सकती है: (1) दांत निष्कर्षण उपकरण जबड़ा और जीभ की गतिशीलता के कारण नरम ऊतकों को फिसलते हैं और छुरा घोंपते हैं, जिससे हल्के से गंभीर रक्तस्राव हो सकता है। इस मामले में, कोई एक साफ सूखी कपास की गेंद को मुंह में जमा कर सकता है, रबर बैंड छोड़ सकता है, और इसे थोड़ी देर के लिए अनायास बंद कर सकता है। रक्तस्राव को रोकने के लिए संपीड़न का सुझाव नहीं दिया जाता है, क्योंकि इससे व्यापक घाव और रक्तस्राव हो सकता है। (2) ऑपरेटरों को अक्सर वायुकोशीय हड्डी प्लेट आरक्षण या दाढ़ जड़ आरक्षण पर एक द्विआधारी विकल्प का सामना करना पड़ता है, क्योंकि पहले दाढ़ को जबड़े के साथ कसकर जोड़ा जाता है। इस बंधन बल को कम करने के लिए, ऑपरेटर लिंगुअल या बैकल बोन प्लेट को तोड़ सकता है; अन्यथा, सॉकेट में एक क्रूर रोटेशन बल जड़ (ओं) को तोड़ने की ओर जाता है। क्या कोई हड्डी की प्लेट को संरक्षित करने का विकल्प चुनता है, यह शोध उद्देश्य पर निर्भर करता है। (3) मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालना मैक्सिलरी पहले दाढ़ या छेदक की तुलना में अधिक दर्दनाक हो सकता है। हम सर्जरी के बाद माउस के जागने तक जांच के साथ देखने का सुझाव देते हैं। (4) मैंडिबुलर दूसरे दाढ़ की मेसिअल जड़ कमजोर होती है क्योंकि मस्तिष्क क्षेत्र में सीमित ऑपरेशन रूम होता है; कभी-कभी, यहां तक कि दूसरे दाढ़ का मुकुट भी नष्ट हो सकता है। क्योंकि दूसरे दाढ़ की अनुपस्थिति पहले दाढ़ निष्कर्षण सॉकेट उपचार के अवलोकन को प्रभावित नहीं करती है, इस दुर्घटना को अनदेखा किया जा सकता है। (5) दांत निष्कर्षण के दौरान माउस की संज्ञाहरण गहराई की बारीकी से निगरानी करें, क्योंकि यह मनुष्यों और कृन्तकों दोनों के लिए एक दर्दनाक प्रक्रिया है। निष्कर्षण पूरा होने तक संज्ञाहरण के सर्जिकल विमान को बनाए रखने के लिए आवश्यकतानुसार एनेस्थेटिक एजेंटों का प्रशासन करें। इसके अलावा, रबर बैंड से लंबे समय तक दबाव जीभ में ऑक्सीजन की कमी का कारण बन सकता है, जो पीला झिल्ली की विशेषता है। ऐसे मामलों में संचालन को तुरंत रोक दिया जाना चाहिए, उपकरणों को हटा दिया जाना चाहिए, जिससे माउस को ठीक होने का समय मिल सके।
एक साथ लिया गया, अकुशल ऑपरेटर अनजाने में चूहों को अनपेक्षित चोट पहुंचा सकते हैं, जैसा कि बिंदु 1 में सूचीबद्ध है। सभी प्रयोगशाला जानवरों की सुरक्षा और कल्याण सुनिश्चित करने के लिए, यह दृढ़ता से वकालत की जाती है कि इस कौशल में महारत हासिल करने और वास्तविक चूहों पर लाइव प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करने से पहले मुराइन शवों पर पर्याप्त अभ्यास किया जाए।
यद्यपि यह प्रोटोकॉल जबड़े की हड्डी के उपचार और पुनर्जनन पर ध्यान केंद्रित करने वाले शोधकर्ताओं के लिए एक वैकल्पिक विधि प्रदान करता है, लेकिन इसमें कई कमियां हैं। (1) जबड़ा तय नहीं किया जा सकता है और इसमें व्यापक लचीलापन है। नतीजतन, लिफ्ट को वायुकोशीय हड्डी पर एक स्थिर-अभिनय बिंदु पकड़ना मुश्किल होता है, जिससे कुछ आपात स्थिति होती है। (2) वयस्क नर चूहों ने जबड़ा हड्डियों को तेज कर दिया है, इसलिए मेसियल प्रतिरोध को खत्म करना कठिन हो सकता है। (3) यह प्रोटोकॉल बाएं मैंडिबुलर पहले दाढ़ निष्कर्षण पर लागू नहीं होता है।
निष्कर्ष में, हालांकि इस प्रोटोकॉल ने म्यूरिन मैंडिबुलर पहले दाढ़ को निकालने के विवरण का प्रदर्शन किया है, ऑपरेटरों को अभी भी एक सफल सर्जरी करने के लिए बहुत अभ्यास और सावधानी की आवश्यकता है।
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Disclosures
सभी मूल डेटा और छवियों को इस पेपर में शामिल किया गया है। लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।
Acknowledgments
यह काम चीन 81825005 (एलवाई), 82201045 (एफवाई), और 82100982 (एफएल) के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन और सिचुआन प्रांत विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम 2021 जेडीआरसी 0144 (एफएल), 2022 जेडीआरसी 0130 (एफवाई) द्वारा समर्थित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
| C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
| DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
| Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
| Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
| Microtome | Leica | RM2235 | |
| Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
| Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
| Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |
References
- Mamoun, J. Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques. Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).
- Laraki, M., Chbicheb, S., El Wady, W.
- Soundia, A., et al. Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease. Bone. 90, 133-141 (2016).
- Araújo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. Alveolar socket healing: what can we learn. Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).
- Hojo, H., Ohba, S. Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases. International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647 (2022).
- Zhou, X., et al. Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).
- Ito, S., et al. Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture. Bone Reports. 16, 101522 (2022).
- Vasak, C., et al. Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs. Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).
- Araújo, M. G., Lindhe, J. Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog. Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).
- Kim, I. -S., Ki, H. -C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -B. The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).
- Kanyama, M., et al. Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction. Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).
- Zhou, S., et al. The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets. Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).
- Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice. Frontiers in Immunology. 12, 678873 (2021).
- Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study. PLoS One. 13 (2), 0191665 (2018).
- Vieira, A. E., et al. Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization. PLoS One. 10 (5), 0128021 (2015).
- Min, K. -K., et al. Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket. Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).
- Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration. Science Advances. 8 (29), (2022).
- Kuroshima, S., et al. Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice. Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).
- Ahel, V., et al. Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps. The British Journal of Oral & Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).
