Summary
Bu protokol, faredeki mandibular ilk azı dişinin nasıl çıkarılacağına dair adım adım ayrıntıları gösterir. Çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunar.
Abstract
Bu çalışma, alveoler kemik rejenerasyonu ve intramembranöz ossifikasyonu incelemek için uygulanabilir bir model sağlamak için murin mandibulada bir molar ekstraksiyon modelinin geliştirilmesini tanıtmaktadır. Bu modeli oluşturmak için mandibular ilk azı dişini çıkarmak için C57 / J6 fareleri kullanıldı. Ötanazi yapıldı ve bilateral mandibulalar sırasıyla ameliyattan 1 hafta ve 4 hafta sonra toplandı. Daha sonra seri stereoskopik hasat, histolojik değerlendirme ve immünofloresan boyama başarılı cerrahi göstermek için yapıldı. Ameliyattan hemen sonra, stereoskopik görüntüler boş bir ekstraksiyon soketi gösterdi. 1 haftada hematoksilin ve eozin (H&E) ve ameliyat sonrası 4 haftada Masson boyaması, orijinal kökün alanının sırasıyla kısmen ve tamamen kemik trabekülleri ile dolu olduğunu göstermiştir. İmmünofloresan boyama, homeostaz tarafı ile karşılaştırıldığında, Sp7 ekspresyonunun ameliyattan 1 hafta sonra arttığını ve alveoler fossada güçlü osteogenezi düşündürdüğünü göstermiştir. Tüm bu sonuçlar uygulanabilir bir murin diş çekimi soketi iyileştirme modeli göstermiştir. Çene kemiği defekti iyileşmesi veya soket iyileşmesi mekanizmalarını ortaya koyan yeni çalışmalar bu yöntemi benimseyebilir.
Introduction
Diş çekimi sonrası soket iyileşmesi, istenmeyen iyileşme altında soket kanaması, kuru soket ve hatta çene osteomiyeliti gibi istenmeyen komplikasyonlara neden olabilen yaygın bir klinik senaryodur 1,2,3. Bu komorbiditeler hastaların yaşam kalitesini bozabilir ve daha da kötüsü, masif kemik kaybı nedeniyle protez rehabilitasyonunu hayati derecede zorlayabilir4. Soket iyileşme aşamaları aydınlatılmış olmasına rağmen, çeşitli prognoz zorluklarıyla karşılaşıldığında diş çekimi sonrası cerrahi sonrası klinik bakımı yönlendirmede yetersiz kalmaktadır4.
Soket iyileşme sürecinde altta yatan mekanizmaları daha iyi anlamak ve yukarıdaki durumları önlemek için hayvan modellerine dayalı çok sayıda çalışma yapılmıştır. Sp7, osteoblast farklılaşmasında ana düzenleyicidir ve iskelet gelişimi, kemik hemostazı ve kemik rejenerasyonunda hayati bir rol oynar 5,6. Rasyonel soket iyileşme modelleri, Sp7'nin travma sonrası kemik rejenerasyonundaki fazlalığını gösterebilir. Ek olarak, uzun kemik kırığı iyileşmesinden farklı olarak, sadece tek bir osteojenik süreç, intramembranöz ossifikasyon, ekstraksiyon soketinin iyileşme sürecini içerir7. Bu, hayvan dişi çekimi modelini implant tabanlı tedavileri incelemek için en uygun hale getirir, çünkü implant osseointegrasyonu aynı osteojenik kural8'e uyar.
On yıllar boyunca, diş çekme modeli sıçanlarda, tavşanlarda ve köpeklerde gerçekleştirilmiştir, çünkü bu türler 9,10,11 üzerinde çalışmaya uygun büyük dişlere sahiptir. Bununla birlikte, genetik modifikasyon için gelişen talepler ve insanlara daha uyarlanabilir bir genetik arka plan olarak, fareler bir diş çekme modeli oluşturmak için giderek daha fazla kullanılmaktadır. Daha sonra, araştırmacılar fenotipleri sadece12 gözlemlemek yerine, genomu değiştirilmiş fareleri kullanarak soket iyileşme sürecinde belirli bir hücre popülasyonunun rolünü çözebilirler. Murin diş çekimi soket modelleri arasında, önceki çalışmalar murin maksiller diş ve kesici diş ekstraksiyon soketlerinin kuruluş ve iyileşme sürecini göstermiştir13,14,15,16. Bununla birlikte, prognozun iyileşme paterni ve dedektif ve gözlemsel zaman noktaları, protokoller arasında farklılık gösterebilir. Bu, akademisyenlerin bir murin soketi iyileştirme modeli oluşturmaları için evrensel bir kritere hitap etmektedir.
Bu çalışmada yukarıdaki konular için uygulanabilir bir murin soket iyileştirme modeli oluşturulması amaçlanmıştır. Farelerdeki mandibula azı dişleri, maksiller azı dişleri ve kesici dişlere kıyasla ayırt edici morfolojik özelliklere sahiptir ve benzersiz avantajlar ve dezavantajlar getirir. Murin mandibulasına odaklanan modeller şu anda vakum bazlı olduğundan, bu protokol farelerde mandibular ilk azı dişini çıkarmak için başarılı bir yöntem sağlamaya çalıştı. Bu protokolün, soket iyileşmesinin altında yatan mekanizmaları ortaya çıkarmak ve klinik bakımı belirtmek için temel araştırmacıları yeni fikirlerle aydınlatacağını umuyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Sichuan Üniversitesi, Batı Çin Stomatoloji Okulu Etik Komitesi (WCHSIRB-D-2017-041) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Bu çalışmada ticari bir kaynaktan elde edilen yetişkin C57BL/6 fareler (bakınız Malzeme Tablosu) kullanılmıştır.
1. Cerrahi öncesi hazırlık
- Enstrüman hazırlama
- Asansör olarak kullanılmak üzere tek kullanımlık şırıngalardan çeşitli iğneler (26G, 25G, 23G; bakınız Malzeme Tablosu) hazırlayın. İğne kafasını Şekil 1'de gösterildiği gibi yaklaşık 20°-40° döndürün.
- Dişli oftalmik cımbızları forseps olarak hazırlayın. Farelerin azı dişlerinin boyutuna uyduğundan ve azı dişlerini sıkıca tutabildiğinden emin olun. İdeal cımbız boyutu Şekil 1A, B3'te gösterilmiştir.
- Ağız açıcı olarak kullanılacak bir lastik bant (tıbbi lateks eldivenden yırtılabilir), cerrahi platform olarak bir köpük tahta veya mantar tahtası, cerrahi alanı aydınlatmak için bir far ve ameliyat sonrası canlanma için bir ısıtma yastığı edinin. Kuru bir pamuk topunu küçük parçalara ayırın ve işlem sırasında kanama meydana gelirse cerrahi bölgeye uygulayın.
- Anestezi hazırlığı
- Fare, 'ayak parmağı sıkışma' yöntemi ile onaylanan genel anesteziyi sağlayan herhangi bir uygun anestezi protokolü ile uyuşturulabilir. Anesteziyi takiben, farenin gözlerine veteriner merhem sürün.
NOT: Tercih edilen genel anestezik protokol şunlar olabilir: intraperitoneal (IP) olarak ksilazin (10 mg / kg) ve ketamin (100 mg / kg) ile indüksiyon ve idame;
Bu çalışma için anestezi indüksiyonu ve idamesi için izofluran ve %1 pentobarbital sodyum (50 mg/kg, IP) gerektiğinde ek dozlarla kullanıldı.
- Fare, 'ayak parmağı sıkışma' yöntemi ile onaylanan genel anesteziyi sağlayan herhangi bir uygun anestezi protokolü ile uyuşturulabilir. Anesteziyi takiben, farenin gözlerine veteriner merhem sürün.
- Dezenfeksiyon ve Sterilizasyon hazırlığı
- Çalışma platformunu ve açık hava tepegözünü %75 etanol püskürtücü ile dezenfekte edin. Her fare prosedüründen önce, yeni bir tek kullanımlık iğne setinin kullanılması önerilir.
NOT: Dişli cımbızlar tekrar kullanılabilir ve buhar sterilizasyonu gibi tercih edilen herhangi bir yöntem kullanılarak sterilize edilebilir.
- Çalışma platformunu ve açık hava tepegözünü %75 etanol püskürtücü ile dezenfekte edin. Her fare prosedüründen önce, yeni bir tek kullanımlık iğne setinin kullanılması önerilir.
2. Cerrahi süreç
- Farenin ve mandibulasının sabitlenmesi
- Yapışkan bant kullanarak fareyi sırtüstü pozisyonda cerrahi bir platforma bağlayın. İki adet 26 G iğneyi yörüngesel kulak düzlemine uygun olarak ve diğer iki adet 26 G iğneyi de mandibulanın altına rahatça sabitleyin.
- Lastik bandı iğnelerin etrafına uygulayın ve ağzı açık tutmak için kesici dişleri çaprazlayın. Görüş alanını engellemesini önlemek için dili hafifçe dışarı çekin ve cerrahi tarafın karşısındaki lastik bandın altına sabitleyin (Şekil 1C).
- Distal direncin ortadan kaldırılması
- Azı dişini cımbızla mesial olarak tutun, 23 G'lik bir iğneyi distal kökün bukkal alveolar kemiğine zorlayın ve bir aralık oluşturun.
NOT: Bu adım büyük bir dikkatle atılmalıdır, çünkü çok derine gömülü bir iğne muhtemelen kökü koparacaktır. - Daha sonra, aralığı genişletmeye devam etmek için 25 G'lik bir iğneye geçin ve kökü alveolar fossadan dışarı bastırmak için iğneyi yavaşça ileri ve dilsel olarak (fare anatomik pozisyonuyla) döndürürken periapikal bölgeye doğru hassas bir şekilde ilerleyin.
- Azı dişini cımbızla mesial olarak tutun, 23 G'lik bir iğneyi distal kökün bukkal alveolar kemiğine zorlayın ve bir aralık oluşturun.
- Mesial direncin ortadan kaldırılması
- Yeterli alan olduğunda, kök çatalına yerleştirmek ve azı dişini oklüzal olarak kaldırmak için 23 G'lik bir iğne kullanın. Azı dişini sıkıca tuttuktan sonra, başka bir 23 G iğnesi alın ve bir aralık oluşturmak için lingual mesial periodontal membrana zorlayın.
- Ardından, 25 G'lik bir iğne ile değiştirin ve yavaşça ileri ve bukkal olarak döndürün. Altta yatan bazı engeller azı dişinin lüksasyonunu engelliyorsa, kök tepesine nüfuz etmek için 26 G'lik bir iğne kullanın ve işlemleri tekrarlayın.
- Son ekstraksiyon
- Dişi çekin ve çekerken kronun oklüzal düzlemin üzerinde yükseldiğinden ve iki sağlam kökün açıkça görülebildiğinden emin olun.
NOT: Dişin lüksasyonu (çıkığı) prosedürün en acı verici ve sıkıntılı anı olarak kabul edilir. Dişin yerinden çıkmasından önce, anestezik derinlik ayak parmağı sıkışma testi kullanılarak yeniden değerlendirilmeli ve buna göre, gerekirse ılımlı bir anestezik ajan dozu uygulanmalıdır.
- Dişi çekin ve çekerken kronun oklüzal düzlemin üzerinde yükseldiğinden ve iki sağlam kökün açıkça görülebildiğinden emin olun.
- Ameliyat sonrası bakım
- Dişi çektikten sonra, kanamayı durdurmak için kuru pamuk uygulayın, dili yeniden konumlandırın, deri altından karprofen (5 mg / kg) uygulayın ve anesteziden iyileşene kadar fareyi sabit bir sıcaklıkta ısıtma yastığına koyun.
3. Fare mandibulasının ve ekstraksiyon soketinin görüntülenmesi
- Numunelerin hazırlanması
- Servikal çıkık ile fareyi ötenazi yapın. Mandibula ve zigomatik kemere bağlı iskelet kaslarını kesmek için oftalmik makas kullanın. Mandibulanın alt kenarı boyunca boğazdan yükselen dala ve daha sonra kondilin arka tarafına kesin ve ardından mandibulayı aşağı çekin ve alt kesici orta çizgi boyunca kesin. Bu şekilde, iki ayrı mandibula hasat edilir.
- Standart prosedür17'yi izleyerek fiksasyon, demineralizasyon ve dehidrasyon gerçekleştirin. 17'yi gömerken, oklüzal düzlemin kasetin kenarına paralel olduğundan emin olun (bkz. Mandibulayı kasetin alt kısmına, alt kenarı eğimli olacak şekilde sabitleyin (Şekil 2).
NOT: Bu protokol mandibula bölgesinin sagital düzlemini sunar.
- Numunenin mikrotom üzerine sabitlenmesi
- Kondili ve taç tarafını 5°-20° daha fazla çıkıntı yapmak için mikrotomdaki numune kelepçesini düzenleyerek kök hamuru ile birlikte taç hamurunun entegre bir görüntüsünü elde edin (Şekil 2).
- Bölümlerin hazırlanması
NOT: Kondil her zaman kesilecek ilk anatomik yapıdır. Kaybolduğunda, molar alan daha sonra birkaç dilim halinde kesilebilir.- Mikrotom aralığını 5 μm'ye kaydırın, her sekiz dilimde bir toplayın ve son dilimde dentin için keşif yapın. Taç dentini ilk önce herhangi bir kök apikal dentin olmadan ortaya çıkarsa, kök bölgesini çıkıntı yapmak için numune kelepçesini ayarlayın ve bunun tersi de geçerlidir.
- Bölümlerin toplanması
NOT: Dentin hem taç hem de apikal alanda eşit olarak elde edilene kadar kesme açısı uygundur.- Bu yönde kesin ve diş pulpası hem taç hem de köklerde görünene kadar dilimleri mikroskop altında izleyin. Parafin örneğinin yüzeyinde belirsiz bir azı dişi konturu göründüğünde kesitleri toplayın17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu yöntemin pratik kullanımını aydınlatmak için, iki sağlıklı C57BL / 6 faresinin (3 aylık, her ikisi de dişi) sağ mandibular ilk azı dişi çıkarıldı ve sırasıyla 1 hafta ve 4 hafta boyunca takip edildi. Hasarsız sol mandibulalar sağlıklı kontrol olarak kullanıldı. Şekil 1A, 26-23 G iğneler ve dişli bir oftalmik cımbız dahil olmak üzere cerrahi cihazın spesifik özelliklerini göstermektedir. 26 G iğne tam olarak çıkarılır ve bükülür. 25 G iğne, nokta atışında yaklaşık 25 ° bükülür. 23 G iğneleri ameliyatın temel taşıdır ve sırasıyla yaklaşık 25° ve 35°'de bükülür (Şekil 1B1,B2). Cımbızlar, murin azı dişlerinin şekline uyan 1 mm uzunluğunda bir dişe sahiptir (Şekil 1B3). Şekil 1C, ameliyattan önce farenin durumunu göstermektedir. Anahtar noktalar, başın etrafındaki dört pimin yeri ve dilin soldaki lastik bandın altına sabitlenmesidir.
Şekil 3A , sağ mandibuler birinci azı dişinin pozisyonunu ve morfolojisini göstermektedir. Şekil 3B , diş soketinin çekim sonrası hemen pıhtı ile dolduğunu göstermektedir. 1 hafta ve 2 haftada, fareler ötenazi yapıldı ve mandibulalar demineralize edildi, parafin17'ye gömüldü ve dilimler halinde bölümlere ayrıldı. Şekil 4A , soketin iyileşme sürecini 1 haftada göstermektedir. Bazı sünger benzeri trabeküler kemikler oluştu, ancak pıhtı kaldı. 2 haftadaki iyileşme sürecinde (Şekil 4B), soket tamamen sünger kemiklerle doluydu, yani rejenerasyon kabaca tamamlandı. İmmünofloresan (IF) boyaması da histopatoloji boyama sonuçlarını doğruladı. Şekil 5'te, Sp7 kemik iliği hücrelerinde, özellikle kemik oluşturan cephe olan kenar boşluğunda yaygın olarak eksprese edilmiştir. Homeostaz durumu altında, trabeküler kemikler tutarlı ve birleşikti, kemik iliği hücre blokları adalar gibi serpildi. Bununla birlikte, ameliyattan 1 hafta sonra, çok sayıda Sp7 eksprese eden hücre, yeni oluşan trabeküler kemiğin etrafına serpiştirildiği ekstraksiyon soketini doldurdu. Ameliyattan 4 hafta sonra, durum tersine döndü ve tekrar büyük ölçüde birleşmiş trabeküler kemiğe döndü ve Sp7 eksprese eden hücrelerin aktivitesi homeostaz durumuna yaklaşan bir seviyeye geriledi.
Şekil 1: Cerrahi aletlerin ve ameliyatla hazırlanan farelerin nesne görüntüleri . (A) Cerrahi aletler esas olarak 26, 25 ve 23 G iğnelerden ve dişli bir cımbızdan oluşuyordu. (B) İğneler 20°-40° (B1,2) arasındaki nokta noktasında bükülmüştür. Cımbızın dişi yaklaşık 1 mm büyüklüğünde olmalıdır (B3). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Diş çekiminden kesitlemeye kadar olan prosedürün akış şeması. Bu görüntü, diş çekiminden kesitlemeye kadar şematik bir akışı göstermektedir. Sağ mandibular ilk azı dişi protokole göre çıkarıldı, daha sonra fare ötenazi yapıldı ve mandibula toplandı. Hasattan sonra, mandibula 24 saat boyunca% 4 POM'a batırıldı, daha sonra% 10 EDTA'ya tekrar batırıldı; sıvı 14 gün boyunca her gün yenilendi. Daha sonra, örnekler dehidre edildi ve evrensel bir protokolü izleyerek parafine gömüldü. Bukkal veya lingual taraf, sagital düzlem dilimlerinin kesitli olması gerektiğinden, yüzü aşağı bakmalıdır. Son olarak, numuneyi numune kelepçesine sabitlerken, kondil ve taç kenarları 5 ° -20 ° çıkıntılı olmalıdır. Kısaltmalar: POM = paraformaldehit; EDTA = etilendiamin tetra-asetik asit. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Resim 3: Fare mandibular birinci azı dişinin ve ekstraksiyon soketinin stereoskopik görüntüleri. (A) Sarı okla gösterilen sağ mandibular birinci azı dişinin stereoskopik görüntüsü. (B) Ameliyat sonrası ilk sağ mandibuler azı dişinin sarı okla gösterilen ekstraksiyon soketi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Resim 4: H&E boyama. Ekstraksiyon soketinin (A) 1 hafta ve (B) ameliyattan 4 hafta sonra H&E boyaması. Sarı oklar, mandibular ikinci azı dişinin birinci molar ekstraksiyon soketi iyileşmesinin yakınında olduğunu gösterir. Kesikli dikdörtgen çizgi, iyileşen ilk azı dişi çıkarma soketi alanını gösterir. Ölçek çubukları: 500 μm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 5: Sp7'nin IF boyama ile saptanması. Bu görüntü, Sp7 ekspresyonunun fare mandibula kemik iliği hücrelerinde ve çevresindeki trabeküler kemikte homeostaz durumu (sağlıklı kontrol) altında, sırasıyla ameliyattan 1 hafta ve 4 hafta sonra dağılımını göstermektedir. Beyaz kesikli çizgi, trabeküler kemiğin tahmini ölçeğini şekillendirdi. Sarı oklar tipik Sp7 eksprese eden hücreleri gösteriyordu. Ölçek çubukları: 50 μm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Murin soket iyileştirme modeli, kemik iyileşmesi ve rejenerasyonunda altta yatan mekanizmaları çözmek ve sonuçta klinik zorlukları çözmek için önemli bir yöntemdir. Mevcut çalışmalar kesici diş ekstraksiyon modeli ve maksiller molar ekstraksiyon modelinin olasılığını gösterirken, çalışmalar mandibular birinci molar model13,17,18'i kullanmamıştır. Bununla birlikte, kesici dişler kemirgen yaşamı için çok önemlidir ve bozulmaları ölümcül olabilir. Ayrıca, maksilladaki kemik mandibuladan daha iptalöz olduğundan, iyileşme sürecinde altta yatan mekanizmalarda bazı farklılıklar olabilir. Bu nedenle, uygulanabilir bir mandibular ilk azı dişi ekstraksiyon modeli oluşturmak gereklidir.
Diş çekiminde dikkat edilmesi gereken en önemli husus kök kırılmalarından kaçınmaktır19. Murin azı dişleri küçük ve savunmasızdır ve mandibuladaki kalıntı kökleri çıkarılamaz. Ancak bu protokolde kök kırma riski tüm ameliyat boyunca mevcuttur. Bu nedenle, azı dişini sıkıca tutmak ve kuvveti titizlikle kontrol etmek çok önemlidir. Spesifik olmak gerekirse, distal direnci ortadan kaldırırken, tacı kırmamaya dikkat etmek gerekir; mesial direnci ortadan kaldırırken, iğnenin kök çatalından dalgalanmaması için dikkatli olunması gerekir; Aralıkları oluşturmak için iğneler kullanırken, aralıkların kök ve alveolar süreç arasında olması gerektiğini hatırlamak önemlidir, bu nedenle kök kırılma riski yüksek olabileceğinden, fazla dönme kuvveti uygulanmamalıdır.
Murin mandibular birinci azı dişinin çıkarılması zordur ve ustalaşmak için yeterli eğitime ihtiyaç duyar. Operasyon sırasında, aşağıdakiler dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere acil durumlar ortaya çıkabilir: (1) diş çekme aletleri, mandibula ve dilin hareketliliği nedeniyle yumuşak dokuları kayma ve bıçaklama eğilimindedir, bu da hafif ila şiddetli kanamaya neden olabilir. Bu durumda, temiz ve kuru bir pamuk topunu ağzına bırakabilir, lastik bandı serbest bırakabilir ve bir süre kendiliğinden kapanmasına izin verebilirsiniz. Kanamayı durdurmak için kompresyon önerilmemektedir, çünkü bu daha geniş yırtılmalara ve kanamaya neden olabilir. (2) Operatörler genellikle alveolar kemik plakası rezervasyonu veya azı dişi kökü rezervasyonunda ikili bir seçimle karşı karşıya kalırlar, çünkü ilk azı dişleri mandibula ile sıkıca birleştirilir. Bu bağ kuvvetini hafifletmek için, operatör lingual veya bukkal kemik plakasını kırabilir; Aksi takdirde, soketteki şiddetli bir dönme kuvveti, kök (ler) in kırılmasına neden olur. Kemik plakasını korumayı seçip seçmemek, araştırma hedefine bağlıdır. (3) Mandibular birinci azı dişinin çıkarılması, maksiller birinci azı dişinden veya kesici dişten daha travmatik olabilir. Ameliyattan sonra fare uyanana kadar dikkatle izlemenizi öneririz. (4) Mandibular ikinci azı dişinin mesial kökü, bukkal bölgedeki sınırlı ameliyathane nedeniyle savunmasızdır; Bazen, ikinci azı dişinin tepesi bile tahrip olabilir. İkinci azı dişinin yokluğu, birinci azı dişi ekstraksiyon soketi iyileşmesinin gözlemlenmesini etkilemediğinden, bu kaza göz ardı edilebilir. (5) Diş çekimi sırasında farenin anestezi derinliğini yakından izleyin, çünkü bu hem insanlar hem de kemirgenler için acı verici bir prosedürdür. Ekstraksiyon tamamlanana kadar cerrahi anestezi düzlemini korumak için anestezik ajanları gerektiği gibi uygulayın. Ek olarak, lastik banttan gelen uzun süreli basınç, soluk membranlarla karakterize edilen dilde oksijen yoksunluğuna neden olabilir. Bu gibi durumlarda işlemler derhal durdurulmalı, aletler çıkarılmalı ve farenin iyileşmesi için zaman tanınmalıdır.
Birlikte ele alındığında, vasıfsız operatörler, madde 1'de listelendiği gibi, yanlışlıkla farelere istenmeyen yaralanmalara neden olabilir. Tüm laboratuvar hayvanlarının güvenliğini ve refahını sağlamak için, bu beceriye hakim olmadan ve gerçek fareler üzerinde canlı prosedürler gerçekleştirmeden önce murin kadavraları üzerinde geniş bir uygulama yapılması şiddetle savunulmaktadır.
Bu protokol, çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunsa da, bazı dezavantajları vardır. (1) Mandibula sabitlenemez ve geniş esnekliğe sahiptir. Sonuç olarak, asansörlerin alveoler kemik üzerinde sabit etkili bir nokta tutması zordur ve bu da bazı acil durumlara neden olur. (2) Yetişkin erkek fareler mandibula kemiklerini yoğunlaştırmıştır, bu nedenle mesial direnci ortadan kaldırmak zor olabilir. (3) Bu protokol sol mandibular birinci azı dişi ekstraksiyonu için geçerli değildir.
Sonuç olarak, bu protokol murin mandibular birinci azı dişinin çıkarılmasının ayrıntılarını göstermiş olsa da, operatörlerin başarılı bir ameliyat gerçekleştirmek için hala çok fazla pratik ve dikkatli olmaları gerekmektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Tüm orijinal veriler ve görüntüler bu makalede yer almaktadır. Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı 81825005 (LY), 82201045 (F.Y.) ve 82100982 (F.L.) ve Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Programı 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.) tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 23/25/26 G needle | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | |
| C57/B6J | Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China | C57/B6J | |
| DAPI Staining Solution | Beyotime | Cat#C1005 | |
| Embedding Cassettes | CITOTEST Scientific | 80106-1100-16 | |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | Biosharp | BL700B | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co.,Ltd | R510-22-10 | |
| Masson’s Trichrome Stain Kit | Solarbio | G1340 | |
| Microtome | Leica | RM2235 | |
| Pentobarbital Sodium | Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd | 2018042001 | |
| Rabbit polyclonal | anti-Sp7 | Abcam Cat# ab22552 | |
| Tweezers | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB2-115 |
References
- Mamoun, J. Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques. Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).
- Laraki, M., Chbicheb, S., El Wady, W.
- Soundia, A., et al. Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease. Bone. 90, 133-141 (2016).
- Araújo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. Alveolar socket healing: what can we learn. Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).
- Hojo, H., Ohba, S. Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases. International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647 (2022).
- Zhou, X., et al. Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).
- Ito, S., et al. Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture. Bone Reports. 16, 101522 (2022).
- Vasak, C., et al. Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs. Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).
- Araújo, M. G., Lindhe, J. Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog. Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).
- Kim, I. -S., Ki, H. -C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -B. The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).
- Kanyama, M., et al. Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction. Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).
- Zhou, S., et al. The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets. Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).
- Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice. Frontiers in Immunology. 12, 678873 (2021).
- Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study. PLoS One. 13 (2), 0191665 (2018).
- Vieira, A. E., et al. Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization. PLoS One. 10 (5), 0128021 (2015).
- Min, K. -K., et al. Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket. Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).
- Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration. Science Advances. 8 (29), (2022).
- Kuroshima, S., et al. Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice. Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).
- Ahel, V., et al. Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps. The British Journal of Oral & Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).
