Summary
Cet article décrit l’utilisation d’une application logicielle, mAbScale, pour le calcul des masses pour les protéines thérapeutiques à base d’anticorps monoclonaux.
Abstract
Les masses biothérapeutiques sont un moyen de vérifier l’identité et l’intégrité structurelle. La spectrométrie de masse (MS) de protéines intactes ou de sous-unités protéiques fournit un outil d’analyse facile pour les différentes étapes du développement biopharmaceutique. L’identité de la protéine est confirmée lorsque la masse expérimentale de la MS se situe dans une plage d’erreur de masse prédéfinie par rapport à la masse théorique. Bien qu’il existe plusieurs outils informatiques pour le calcul des poids moléculaires des protéines et des peptides, ils n’ont pas été conçus pour une application directe aux entités biothérapeutiques, ont des limitations d’accès en raison de licences payantes ou nécessitent le téléchargement de séquences protéiques sur des serveurs hôtes.
Nous avons développé une routine modulaire de calcul de masse qui permet de déterminer facilement les masses moyennes ou monoisotopiques et les compositions élémentaires des glycoprotéines thérapeutiques, y compris les anticorps monoclonaux (mAb), les anticorps bispécifiques (bsAb) et les conjugués anticorps-médicament (ADC). La nature modulaire de ce cadre de calcul basé sur Python permettra d’étendre cette plate-forme à d’autres modalités telles que les vaccins, les protéines de fusion et les oligonucléotides à l’avenir, et ce cadre pourrait également être utile pour l’interrogation des données de spectrométrie de masse descendantes. En créant une application de bureau autonome open source avec une interface utilisateur graphique (GUI), nous espérons surmonter les restrictions liées à l’utilisation dans des environnements où les informations propriétaires ne peuvent pas être téléchargées sur des outils Web. Cet article décrit les algorithmes et l’application de cet outil, mAbScale, à différentes modalités thérapeutiques à base d’anticorps.
Introduction
Au cours des deux dernières décennies, les produits biothérapeutiques ont évolué pour devenir un pilier de l’industrie pharmaceutique moderne. La pandémie de SRAS-CoV2 et d’autres maladies potentiellement mortelles ont encore accru la nécessité d’un développement plus rapide et plus large de molécules biopharmaceutiques 1,2,3.
Le poids moléculaire biothérapeutique est critique pour l’identification de la molécule, en combinaison avec d’autres tests analytiques. Les masses de sous-unités intactes et réduites sont utilisées tout au long des cycles de vie de découverte et de développement dans le cadre de stratégies de contrôle visant à maintenir la qualité, comme décrit dans le QTPP (Quality Target Product Profile)4.
Le développement analytique dans l’industrie biopharmaceutique repose fortement sur les mesures de masse pour l’analyse de la masse intacte et la caractérisation en profondeur à l’aide de la cartographie peptidique ou de la surveillance par méthode multi-attributs (MAM). Au centre de ces techniques utilisant des plates-formes modernes de spectrométrie de masse (MS) se trouve la capacité de fournir des mesures de masse précises à haute résolution (HR/AM). La plupart des instruments HR/AM offrent des précisions de masse comprises entre 0,5 et 5 ppm, qui s’adaptent à la plage de masse. La capacité de mesurer avec précision les masses de grosses molécules intactes permet d’identifier rapidement et en toute confiance les produits thérapeutiques à grandes molécules. Comme la résolution isotopique ne peut pas être atteinte dans des conditions expérimentales typiques pour les grosses molécules (>10 kDa), les masses moyennes doivent être calculées pour la comparaison et l’identification 5,6.
Un spectre de masse protéique intact ou sous-unitaire typique représente le profil protéoforme global, qui contient des informations composites sur les différentes formes moléculaires résultant des modifications post-traductionnelles (PTM) et de toute différence de structure primaire, telle que les clips ou les variantes de séquence. La facilité et le débit relativement élevés de ces mesures les rendent attrayantes pour la caractérisation et les contrôles de surveillance en cours de processus 7,8. L’analyse des données pour ces expériences nécessite généralement que l’utilisateur définisse l’espace de recherche des formes moléculaires (gamme de PTM ou d’autres formes moléculaires). Pour les protéines glycosylées, cet espace de recherche est largement déterminé par l’hétérogénéité des glycoformes. Les combinaisons de plusieurs PTM, de configurations de liaisons disulfure et d’autres variations le long de la structure primaire rendent le calcul de toutes les formes moléculaires possibles fastidieux. Par conséquent, le calcul manuel des formes moléculaires possibles est un processus qui prend du temps et des ressources et qui présente un fort potentiel d’erreur humaine.
Nous présentons ici un outil de calcul de masse qui a été développé en tenant compte des caractéristiques les plus importantes des molécules biothérapeutiques, telles que les anticorps monoclonaux, les bsAb, les ADC, etc. L’outil permet d’incorporer facilement des variables de l’espace de recherche pour le calcul cohérent des masses et des compositions élémentaires. La nature modulaire de cet outil permettra de le développer et de l’appliquer au calcul de masse et à l’appariement de masse pour d’autres modalités.
Le module d’interface graphique permet à l’utilisateur de spécifier l’entrée pour le calcul de la masse, comme illustré à la figure 1 ; Plus précisément, l’utilisateur saisit des séquences d’acides aminés d’une seule lettre pour les chaînes d’anticorps légères et lourdes. Les modifications courantes pour la cyclisation N-terminale à chaîne lourde et l’écrêtage de la lysine C-terminale sont incluses sous forme de cases à cocher. De plus, la formule chimique/la composition élémentaire peut être ajoutée/soustraite de ces chaînes protéiques via la zone de texte Chem Mod correspondante. Cela permet à l’utilisateur d’ajouter une composition élémentaire qui comprend de multiples modifications post-traductionnelles ou une charge utile de petites molécules dans le cas d’un ADC. Comme la plupart des anticorps monoclonaux thérapeutiques sont conçus pour éliminer les sites de glycosylation dans la chaîne légère, la glycosylation dans la chaîne légère est facultative et peut être spécifiée à l’aide d’une case à cocher sur l’interface graphique.
Une variante typique de l’analyse de la masse intacte pour les anticorps est une analyse de masse sous-unitaire réduite, où la chaîne légère est détachée de la chaîne lourde en réduisant les liaisons disulfure interchaînes. Selon la force de l’agent réducteur utilisé, les liaisons disulfure intra-chaîne peuvent être clivées ou non. Les utilisateurs ont la possibilité d’entrer le nombre total de liaisons disulfure en fonction du sous-type d’IgG ou dans le cas d’un ADC9 conjugué à la cystéine.
L’application calcule les masses de manière ascendante, dans laquelle les compositions élémentaires sont d’abord calculées pour les chaînes lourdes et les chaînes légères individuelles. Ensuite, l’écrêtage de Lys de la cyclisation N-terminale à chaîne lourde (HC) est pris en compte en ajustant les compositions élémentaires calculées. Toutes les modifications chimiques spécifiées sont ensuite appliquées aux chaînes lourdes et/ou légères. En fonction du type d’analyse et des modèles de liaison disulfure spécifiés par l’utilisateur, le nombre d’hydrogènes est ajusté pour les deux chaînes polypeptidiques. Les masses glycosylées HC et de chaîne légère (LC) (en option) sont calculées en fonction de l’entrée de l’utilisateur. Enfin, plusieurs masses HC et LC sont combinées, et les numéros de liaison disulfure sont automatiquement mis à jour pour le calcul de la masse intacte.
Avec des molécules plus grosses telles que des protéines intactes, les masses monoisotopiques ne peuvent pas être mesurées en raison du défaut de masse additif lors de l’utilisation de spectromètres de masse avec un pouvoir de résolution typique. Au lieu de cela, les masses nominales ou moyennes sont mesurées ou déclarées 5,10,11,12,13. Les masses élémentaires moyennes peuvent varier en fonction de la source utilisée pour les masses sélectionnées14,15. Bien que les différences dans les masses élémentaires puissent être faibles, elles peuvent s’additionner pour atteindre des valeurs significatives pour les calculs de poids moléculaire de grosses molécules. Les masses élémentaires moyennes utilisées par défaut dans l’application logicielle sont indiquées dans le tableau supplémentaire 1. Pour les environnements réglementés comme le domaine de la recherche et du développement (R-D) biopharmaceutique, il est important de maintenir des masses moléculaires constantes, car les changements de masse peuvent impliquer des changements dans l’entité moléculaire lors des dépôts réglementaires. Pour assurer la cohérence de l’utilisation des masses élémentaires, un dictionnaire des masses élémentaires est inclus avec l’outil logiciel sous la forme d’un fichier texte csv (valeurs séparées par des virgules) : Element_Mass.csv (Fichier de codage supplémentaire 1). De même, une liste organisée des compositions de glycanes généralement observées sur les anticorps monoclonaux est incluse : Glycan.csv (Supplementary Coding File 2). Les deux fichiers sont enregistrés dans le même dossier qu’une application exécutable et peuvent être modifiés par l’utilisateur pour utiliser une liste de masse élémentaire spécifique ou une bibliothèque de glycanes.
Figure 1 : Interface graphique de l’application mAbScale. Le module GUI permet à l’utilisateur de spécifier l’entrée pour le calcul de la masse. L’utilisateur saisit des séquences d’acides aminés d’une seule lettre pour les chaînes d’anticorps légères et lourdes. Les modifications courantes pour la cyclisation N-terminale à chaîne lourde et l’écrêtage de la lysine C-terminale sont incluses sous forme de cases à cocher. Les formules chimiques/compositions élémentaires peuvent être ajoutées/soustraites via la zone de texte Chem Mod correspondante. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
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Protocol
Le flux de travail de haut niveau pour mAbScale est illustré à la figure 2. Chaque étape a des branches de décision internes plus sophistiquées, des boucles et une combinatoire. Un flux de travail algorithmique détaillé décrivant le processus de calcul est présenté dans la figure supplémentaire 1. La sortie de l’application est enregistrée sous forme de feuille de calcul dans le dossier sélectionné par l’utilisateur. Le fichier de sortie se compose de plusieurs feuilles de calcul distinctes, qui peuvent être classées en tant qu’entrée utilisateur, calculs de poids moléculaire et références pour les dérivations de masse isotopique moyenne (un exemple de sortie est fourni dans des tableaux supplémentaires). Les feuilles de calcul d’entrée de l’utilisateur comprennent les séquences d’acides aminés des protéines et d’autres informations saisies par l’utilisateur, les masses élémentaires moyennes et les masses de glycanes, qui sont utilisées pour calculer la composition élémentaire et les différents poids moléculaires. Les feuilles de calcul de la masse moléculaire comprennent la composition chimique des différentes formes, la masse réduite avec et sans glycosylation et modification chimique, et la masse intacte avec et sans glycosylation et modification chimique. Les feuilles contenant des masses de demi-anticorps seront générées automatiquement si l’utilisateur saisit deux HC différents et/ou deux LC différents dans la page de saisie de l’utilisateur, car les demi-anticorps sont des impuretés primaires qui doivent être identifiées et quantifiées par rapport à l’hétérodimère souhaité. Le code source de mAbScale est accessible via le référentiel suivant : https://github.com/kkhatri99/mAbScale.
Figure 2 : Vue d’ensemble des étapes du calcul des compositions élémentaires et des masses à l’aide de l’application. Le code couleur peut être utilisé pour établir un lien avec le flux de processus décrit dans la figure supplémentaire 1. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.
1. Ouverture de l’application mAbscale
- Ouvrez l’application logicielle en double-cliquant sur l’icône du fichier exécutable.
2. Saisie de la séquence
- Saisissez les séquences de chaînes lourdes et de chaînes légères dans les zones de texte respectives marquées d’un 1 sans espace.
- Pour les bsAbs, ajoutez des chaînes lourdes ou légères supplémentaires dans le deuxième ensemble de zones de texte marquées 2. Laissez 2 blancs pour les anticorps monoclonaux avec des chaînes lourdes et des chaînes légères identiques.
- Cochez les cases Cyclisation N-Terminal et/ou Écrêtage C-Terminal, si ces variantes de bornes à chaîne lourde sont applicables.
- Ajoutez toutes les modifications chimiques, y compris l’éditeur de liens et la charge utile pour les molécules ADC, aux zones de texte Heavy Chain Chem Mod et/ou Light Chain Chem Mod.
- Spécifiez les modifications sous forme de compositions élémentaires, telles que CaCl2. La modification sera ajoutée à la sous-unité ou à la chaîne protéique respective.
REMARQUE : Une composition chimique peut également être soustraite d’une sous-unité ou d’une chaîne en préfixant la composition élémentaire par un signe -. Par exemple, -H2O soustraira une molécule d’eau de la composition et de la masse de la sous-unité.
- Spécifiez les modifications sous forme de compositions élémentaires, telles que CaCl2. La modification sera ajoutée à la sous-unité ou à la chaîne protéique respective.
3. Spécification du nombre de liaisons disulfure
- Spécifiez le nombre de liaisons disulfure dans les molécules de protéines dans la zone de texte intitulée Nombre total de disulfures.
- Entrez le nombre de disulfures de HC non réduits dans la zone de texte Sulfures de HC non réduits et le nombre de disulfures de LC non réduits dans la zone de texte Disulfures de LC non réduits , en fonction de l’étendue de la réduction (complète ou partielle).
NOTA : L’analyse de masse réduite des sous-unités d’anticorps monoclonaux implique la réduction/séparation des chaînes lourdes et légères liées au disulfure. - Si une glycosylation est présente sur la chaîne légère anticorps monoclonal, cochez la case La chaîne légère est glycosylée .
4. Définition du dossier de sortie et exécution de l’application
- Cliquez sur le bouton Parcourir pour sélectionner un dossier de sortie pour la zone de texte Dossier de sortie .
- Entrez le nom du fichier de sortie sans extension de fichier (automatiquement enregistré au format .xlsx) dans la zone de texte Fichier Excel (sans ext).
- Cliquez sur le bouton Soumettre pour lancer la demande. Le fichier de sortie se trouve dans le dossier désigné.
REMARQUE : Les masses élémentaires et la liste des glycanes peuvent être personnalisées en éditant les fichiers texte délimités Element_Mass.csv (Fichier de codage supplémentaire 1) et Glycane.csv (Fichier de codage supplémentaire 2), respectivement. Ces fichiers doivent être placés dans le même dossier que le fichier exécutable mAbScale.exe (Supplementary Coding File 3) pour que l’application puisse s’exécuter. L’application sera fermée automatiquement après une exécution. L’utilisateur devra redémarrer l’application si un deuxième calcul est nécessaire.
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Representative Results
Une variété d’anticorps monoclonaux a été sélectionnée pour représenter différents types d’anticorps monoclonaux. Un étalon d’anticorps monoclonaux disponible dans le commerce a été choisi pour représenter un anticorps monoclonal conventionnel avec des chaînes lourdes identiques, des chaînes légères identiques et un site de glycosylation lié à l’azote dans la région Fc. Un anticorps monoclonal avec une glycosylation supplémentaire liée à l’azote à chaîne légère, un anticorps monoclonal bispécifique et un anticorps monoclonal conjugué anticorps-médicament (ADC) ont également été choisis pour élargir l’utilisation de l’application. La composition chimique, la masse calculée, la masse mesurée et l’erreur de masse de ces exemples d’anticorps monoclonaux sont résumées dans le tableau 1. Les compositions chimiques des protéines et les masses calculées rapportées par mAbScale ont été confirmées par GPMAW16, un programme d’analyse de la structure primaire des protéines et des peptides.
Pour l’analyse de la masse intacte, les échantillons d’anticorps monoclonaux ont été dilués à 1 mg/mL à l’aide d’eau de qualité LC-MS et injectés pour analyse. Pour l’analyse réduite, les échantillons ont d’abord été traités avec du dithithréitol et incubés à 37 °C pendant 15 min pour cliver les liaisons disulfure inter-chaînes. Tous les échantillons ont été analysés à l’aide d’un système UPLC Acquity couplé à un spectromètre de masse. Une colonne BEH 200 SEC a été utilisée pour le dessalage en ligne et la séparation des chaînes lourdes et légères à l’aide d’une méthode isocratique avec eau/acétonitrile (65 :35) et 0,1 % d’AGT comme phase mobile. Le spectromètre de masse a fonctionné en mode ions positifs, et les données ont été acquises avec une plage de balayage de 700 à 5 000 m/z.
Les flux de travail intacts et réduits de Protien Metrics, Inc. (PMi) Byos ont été utilisés pour traiter les spectres bruts intacts et réduits, respectivement. La plage de masse protéique a été fixée à 143 000-163 000 Da pour la déconvolution de masse intacte, 47 000-53 000 Da pour la déconvolution de masse HC et 20 000-27 000 Da pour la déconvolution de masse LC. Pour le prélèvement automatisé de masse/pic, la différence minimale entre les pics de masse a été fixée à 15 Da, et le nombre maximum de pics de masse a été limité à 10. Une liste des glycanes attendus a été saisie/sélectionnée pour l’onglet d’appariement de masse, et la limite supérieure de la tolérance d’appariement de masse a été fixée à 10 Da.
Les faibles erreurs de masse entre les masses calculées et les masses mesurées se situaient dans les critères d’acceptation des erreurs de masse normales (≤10 Da pour les mAb intacts, ≤5 Da pour les chaînes lourdes réduites et les chaînes légères, respectivement), ce qui suggère que les masses calculées étaient exactes17.
Pour le calcul des masses théoriques de l’ADC, une modification chimique de la composition élémentaire de l’agent de liaison/charge utile peut être ajoutée à des sous-unités d’anticorps monoclonaux spécifiques. Cependant, seule la masse moléculaire d’un rapport de charge de médicament sera incluse dans la sortie. La masse moléculaire composite des anticorps ayant des rapports de charge médicamenteux différents doit être ajoutée manuellement par l’utilisateur. Ces fonctionnalités pourraient être ajoutées dans une version ultérieure de mAbScale ou pourraient être modifiées avec le soutien de la communauté, étant donné la nature open-source de ce projet.
Tableau 1 : Comparaison des masses calculées et mesurées pour différentes sous-unités d’anticorps monoclonaux et formes moléculaires. Les compositions chimiques, les masses calculées, les masses mesurées et les erreurs de masse des exemples d’anticorps monoclonaux sont résumées dans ce tableau. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.
Figure supplémentaire 1 : Flux de travail algorithmique détaillé pour mAbScale. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Tableau supplémentaire 1 : Les masses élémentaires moyennes calculées utilisées dans mAbScale14,15. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Fichier de codage supplémentaire 1 : Liste des masses élémentaires. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Fichier de codage supplémentaire 2 : Liste des glycanes. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
Fichier de codage supplémentaire 3 : Application groupée - exécutable mAbScale. Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.
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Discussion
mAbScale fournit une interface utilisateur intuitive avec la possibilité de modifier les blocs de construction pour les calculs de masse et d’élément. On s’attend à ce que les utilisateurs aient une compréhension de base de la molécule cible pour utiliser l’application, en déduire les masses correctes et interpréter les résultats. Par exemple, la feuille de sortie de masse intacte ou réduite peut être écrasante en raison des nombreuses rangées de masses intactes ou réduites, puisque la base de données de glycanes par défaut contient 88 glycanes liés à l’azote que l’on trouve couramment dans la partie Fc des anticorps thérapeutiques, et que l’application calcule toutes les masses de glycoformes possibles qui sont incluses dans la base de données18, 19. Le 19. Alors que la plupart des anticorps monoclonaux thérapeutiques sont conçus pour éliminer la glycosylation dans la région Fab, certains anticorps monoclonaux peuvent conserver ce site de glycosylation, ce qui pourrait encore augmenter le nombre total de protéoformes glycosylés. Il est recommandé aux utilisateurs de créer une base de données de glycanes qui se concentre sur les glycoformes les plus appropriées pour une molécule donnée afin de réduire la complexité de la sortie et de mieux aligner les résultats avec les masses mesurées pour l’identification des pics de masse.
Le niveau de complexité augmente encore avec les bsAb en raison de l’hétérogénéité des chaînes légères et lourdes. Cette application logicielle génère toutes les permutations et combinaisons possibles avec les séquences LC et HC et les glycoformes fournies pour permettre la génération de tous les sous-produits potentiels du mauvais appariement ou de l’appariement incomplet des sous-unités d’anticorps, telles que les demi-anticorps. Cela laisse à l’utilisateur le soin de filtrer les protéoformes les plus appropriées pour leur utilisation. La sortie du logiciel divise les sorties glycosylées et non glycosylées dans des feuilles de calcul distinctes, ce qui facilite la révision par l’utilisateur. Les masses moléculaires intactes et réduites sont également séparées, et toutes les combinaisons possibles de demi-anticorps pour les bsAb sont répertoriées dans une feuille de calcul dédiée pour simplifier davantage l’absorption des résultats traités.
L’une des limites de la version actuelle du logiciel est que l’application calcule les masses de l’ADC avec un seul rapport médicament/anticorps à la fois, car la structure chimique de la charge utile est entrée dans les zones de texte Heavy Chain Chem Mod et Light Chain Chem Mod. Pour chaque rapport médicament/anticorps (DAR), la composition élémentaire doit être saisie par l’utilisateur pour un nouveau calcul.
La possibilité de calculer les masses des protéines intactes est fournie par plusieurs applications, mais elles nécessitent soit l’achat d’une licence commerciale, soit sont des outils basés sur le Web qui nécessitent que les séquences protéiques soient téléchargées 16,20,21. Ces applications offrent une flexibilité très limitée à l’utilisateur pour ajouter des modifications chimiques personnalisées ou incorporer facilement des liaisons intramoléculaires, telles que les disulfures. De plus, la valeur des applications Web est limitée lorsqu’il s’agit d’informations exclusives et confidentielles, comme dans le cadre du développement pharmaceutique ou d’autres environnements contrôlés, car les informations sur les séquences biothérapeutiques ne peuvent pas être téléchargées sur des serveurs externes. Par conséquent, les chercheurs doivent s’appuyer soit sur des calculs manuels, soit sur des routines programmatiques moins souples, difficiles à diffuser et pouvant entraîner des incohérences.
Nous avons développé un framework open-source pour le calcul de la masse moléculaire et de la composition élémentaire en mettant l’accent sur l’allègement des restrictions associées aux applications existantes. L’application de bureau autonome avec une interface graphique surmontera les restrictions associées au téléchargement d’informations propriétaires sur des serveurs externes et permettra aux utilisateurs d’y accéder facilement. Cet outil peut être utilisé pour les modalités biothérapeutiques les plus courantes, y compris les anticorps monoclonaux, les anticorps monoclonaux et les anticorps monoclonaux. De plus, la gamme de modifications et de masses élémentaires sources peut être facilement personnalisée pour répondre aux besoins de l’utilisateur. La nature flexible de ce flux de travail permettra aux développements futurs d’inclure des applications à d’autres modalités thérapeutiques, telles que les thérapies protéiques non anticorps monoclonaux, les vaccins multi-sous-unités et les oligonucléotides ou l’ARNm. En rendant ce framework open-source, nous espérons engager la communauté dans le développement et l’adaptation à d’autres modalités, ainsi que dans l’ajout de fonctionnalités supplémentaires, telles que le calcul de fragments théoriques pour l’interrogation descendante des données MS.
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Disclosures
Ce logiciel est publié sous licence Apache 2.0. Droits d’auteur (2022) de GlaxoSmithKline Research & Development Limited. Tous droits réservés. Sous licence Apache, version 2.0 (la « Licence ») ; vous ne pouvez utiliser ce fichier que conformément à la Licence. Vous pouvez obtenir une copie de la Licence à l’adresse http://www.apache.org/licenses/LICENSE-2.0. Sauf si la loi applicable l’exige ou si cela a été convenu par écrit, les logiciels distribués dans le cadre de la Licence sont distribués « en l’état », sans garantie ni condition d’aucune sorte, expresse ou implicite. Reportez-vous à la Licence pour connaître le langage spécifique régissant les autorisations et les limitations en vertu de la Licence. L.C. est un employé de GlaxoSmithKline (GSK). T.H. et K.K. ont développé ce logiciel en tant qu’employés de GSK et sont maintenant associés de Merck et de Moderna, respectivement.
Acknowledgments
Les auteurs remercient Robert Schuster pour son aide dans la vérification des données.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acquity UPLC system | Waters Corp., Milford, MA | N/A | Modular system |
| Antibody-drug conjugate (ADC) | GlaxoSmithKline | N/A | Proprietory molecule |
| BEH 200 SEC column | Waters Corp., Milford, MA | 176003904 | |
| Bispecific mAb | GlaxoSmithKline | N/A | Proprietory molecule |
| Byos | Protein Metrics, Cupertino, CA | https://proteinmetrics.com/byos/ Version 4.5 |
|
| GPMAW | GPMAW | http://www.gpmaw.com/ | |
| LC-MS grade water | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA | W6-1 | |
| mAb standard | Waters Corp., Milford, MA | 186009125 | Waters Humanized mAb Mass Check Standard |
| mAbScale | GlaxoSmithKline | Apache License, Version 2.0 | |
| Xevo G2 Q-TOF mass spectrometer | Waters Corp., Milford, MA | N/A | Modular system |
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