Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans komen voor bij twee geslachten: hermafrodieten, die twee X-chromosomen hebben, en mannetjes, die slechts één X-chromosoom hebben dat XO of X null wordt genoemd.
Hermafrodieten produceren zowel oöcyten als sperma en kunnen zich voortplanten door zelfbevruchting. Bijna al hun gameten dragen een X-chromosoom, dus nakomelingen die het gevolg zijn van zelfbevruchting zijn meestal hermafrodieten.
Zelden gaat het X-chromosoom verloren tijdens gametogenese, wat resulteert in mannelijke nakomelingen die slechts ongeveer 0,1 tot 0,2% van de tijd krijgen. Dit is geen praktische manier om genoeg mannetjes te verzamelen voor een experiment of genetisch kruis waarvoor we ze nodig hebben.
In plaats daarvan kunnen we een hermafrodiet maken met een mannetje, wat resulteert in ongeveer de helft van de nakomelingen die mannelijk zijn. Bij het uitvoeren van dit genetische kruis, moet u meer mannetjes dan hermafrodieten opnemen om een efficiënte paring te garanderen. In het volgende voorbeeld zullen we een paringsplaat opzetten en mannelijke wormen isoleren ter voorbereiding om spermatids in vitro te verzamelen en te bestuderen.
- Ten eerste, verkrijg een groot aantal mannetjes door het kruisen van vijf wildtype mannetjes en een hermafrodiet op een klein gazon van E. coli OP50 bacteriën gezaaid in het midden van een nematoden groeimedium of NGM plaat. Ongeveer 50% van de volgende generatie zal wildtype mannetjes zijn.
Om mannetjes in het L4-stadium te verzamelen, onderzoekt u de ontwikkelingsstadium- en staartmorfologie onder een ontledende microscoop. Een L4-stadiumworm wordt geplukt op basis van staartmorfologie. Een mannelijke worm heeft een afgeronde staart, terwijl een hermafrodiet een puntige staart heeft.
Pluk met behulp van een platinadraad 7 tot 10 L4-stadium mannetjes per experiment en breng ze over naar NGM-plaat gezaaid met OP50 en laat ze een dag of twee groeien. Het kweken van celibataire mannetjes bij afwezigheid van hermafrodieten voorkomt het verlies van sperma en dus zal een groot aantal spermatids beschikbaar zijn tijdens de experimentele procedure.
