Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. eleganlar iki cinsiyette görülür: iki X kromozomlu hermafroditler ve XO veya X null olarak adlandırılan sadece bir X kromozomu olan erkekler.
Hermafroditler hem oositler hem de sperm üretirler ve kendi kendine döllenerek üreyebilirler. Gametlerinin neredeyse tamamı X kromozomu taşır, bu nedenle kendi kendine döllenmeden kaynaklanan yavrular çoğunlukla hermafroditlerdir.
Nadiren, X kromozomu gametogenez sırasında kaybolur, bu da erkek yavruların zamanın sadece% 0.1 ila 0.2'sine neden olabilir. Bu, ihtiyaç duymamız gereken herhangi bir deney veya genetik haç için yeterli erkek toplamanın pratik bir yolu değildir.
Bunun yerine, bir erkekle hermafrodit yapabiliriz ve yavruların yaklaşık yarısı erkek olur. Bu genetik haçı gerçekleştirirken, verimli çiftleşmeyi sağlamak için hermafroditlerden daha fazla erkek eklediğinizden emin olun. Aşağıdaki örnekte, spermatidleri in vitro olarak toplamak ve incelemek için bir çiftleşme plakası kuracağız ve erkek solucanları izole edeceğiz.
- İlk olarak, bir nematod büyüme ortamının veya NGM plakasının merkezinde tohumlanmış küçük bir E. coli OP50 bakterisi çimi üzerinde beş wildtype erkeği ve bir hermafrodit geçerek çok sayıda erkek elde edin.
L4 evre erkeklerini toplamak için, gelişim evresini ve kuyruk morfolojisini bir diseksiyon mikroskobu altında inceleyin. Bir L4 evre solucanı kuyruk morfolojisine göre toplanır. Bir erkek solucan yuvarlak bir kuyruğa sahipken, hermafrodit sivri bir kuyruğa sahiptir.
Platin bir tel kullanarak, deney başına 7 ila 10 L4 evre erkek seçin ve OP50 ile tohumlanmış NGM plakasına aktarın ve bir veya iki gün boyunca büyümelerine izin verin. Hermafroditlerin yokluğunda bekar erkeklerin büyümesi sperm kaybını önler ve böylece deneysel prosedür sırasında çok sayıda spermatid mevcut olacaktır.
