Encyclopedia of Experiments: Biology
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- C. elegans se produisent dans deux sexes: hermaphrodites, qui ont deux chromosomes X, et les mâles, qui n’ont qu’un seul chromosome X appelé XO ou X nul.
Les hermaphrodites produisent à la fois des ovocytes et des spermatozoïdes et peuvent se reproduire par auto-fécondation. Presque tous leurs gamètes portent un chromosome X, de sorte que les descendants qui résultent de l’auto-fécondation sont principalement des hermaphrodites.
Rarement, le chromosome X est perdu pendant la gametogenesis, ayant pour résultat la progéniture masculine seulement environ 0.1 à 0.2% du temps. Ce n’est pas une manière pratique de recueillir assez de mâles pour n’importe quelle expérience ou croix génétique que nous avons besoin d’eux pour.
Au lieu de cela, nous pouvons faire une hermaphrodite avec un mâle entraînant environ la moitié de la progéniture étant mâle. Lors de l’exécution de cette croix génétique, assurez-vous d’inclure plus de mâles que d’hermaphrodites pour assurer un accouplement efficace. Dans l’exemple suivant, nous allons mettre en place une plaque d’accouplement et isoler les vers mâles en préparation pour recueillir et étudier les spermatrodites in vitro.
- Tout d’abord, obtenir un grand nombre de mâles en croisant cinq mâles de type sauvage et une hermaphrodite sur une petite pelouse de bactéries E. coli OP50 ensemencées au centre d’un milieu de croissance nématode ou plaque NGM. Environ 50% de la prochaine génération seront des mâles sauvages.
Pour recueillir les mâles de stade L4, examinez la morphologie du stade du développement et de la queue au microscope disséqué. Un ver de stade L4 est cueilli à partir de la morphologie de la queue. Un ver mâle a une queue arrondie, tandis qu’une hermaphrodite a une queue pointue.
À l’aide d’un fil de platine, choisissez de 7 à 10 mâles de stade L4 par expérience et transférez-les à la plaque NGM ensemencée avec OP50 et laissez-les pousser pendant un jour ou deux. La croissance des mâles célibataires en l’absence d’hermaphrodites prévient la perte de sperme et, par conséquent, un grand nombre de spermatatidés seront disponibles pendant la procédure expérimentale.
