Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til å begynne med, vokse embryoene i 3 Petri retter. Den første er en kontrollplate som inneholder Hanks løsning - en balansert saltløsning. Den andre og tredje platen har Hanks løsning med en potensielt nevrotoksisk forbindelse ved forskjellige konsentrasjoner.
Den nevrotoksiske forbindelsen i eksponeringsløsningen trenger inn i embryoenes ytre membran ved passiv diffusjon og endrer nervesystemets prosesser som oppmerksomhet, koordinering og muskelaktivitet. Når embryoene utvikler seg til larver av riktig alder, overfør hver larve til en individuell brønn på en 48 brønnplate. Hold oversikt over behandlingstilstanden for hvert dyr.
Overfør brønnplaten til en opptaksplattform og trekk ned dekselet. La larvene akklimatisere seg i 10 minutter. Sett vekslende sykluser av lyse og mørke perioder ved hjelp av programvaren.
Sebrafisk larver viser normalt mer bevegelse i mørket og mindre bevegelse i lyset. Registrer den totale avstanden som er reist av larver av kontrollen og eksponeringsgruppene i hver periode. Hvis forbindelsen er nevrotoksisk, viser larver enda mer bevegelse i mørket og i lyset enn kontrolldyr.
I følgende protokoll vil vi utføre atferdstester på sebrafisk larver utsatt for nevrotoksiske forbindelser.
- Minst 2 timer før du utfører et eksperiment, sett romtemperaturen til 28 grader Celsius og tilsett 800 mikroliter eksponeringsløsning til hver brønn av en 48 brønnmikroplate. Bruk deretter en 1 milliliter pipette med en modifisert spiss for å overføre en larve i 200 mikroliter av eksponeringsløsning til hver brønn på mikroplaten, som forberedelse til et bevegelses- og banevinkeleksperiment.
Når alle parametrene er satt, skru ned belysningen i testrommet og la larvene akklimatisere seg i systemet i 10 minutter. På slutten av akklimatiseringsperioden klikker du på Eksperimenter og utfør, og oppretter mappen der de eksperimentelle filene skal lagres. Skriv deretter inn resultatnavnet og klikk på Bakgrunn og Start.
På slutten av eksperimentet klikker du på Eksperimenter og stopp. Returner deretter 48 brønnmikroplaten tilbake til lysinkubatoren for etterfølgende eksperimenter.
