Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Zu Beginn wachsen die Embryonen in 3 Petrischalen. Die erste ist eine Kontrollplatte, die Hanks Lösung enthält - eine ausgewogene Salzlösung. Die zweite und dritte Platte haben Hanks Lösung mit einer potenziell neurotoxischen Verbindung in verschiedenen Konzentrationen.
Die neurotoxische Verbindung in der Expositionslösung dringt durch passive Diffusion in die äußere Membran der Embryonen ein und verändert die Prozesse des Nervensystems wie Aufmerksamkeit, Koordination und Muskelaktivität. Sobald sich die Embryonen zu Larven des entsprechenden Alters entwickeln, übertragen Sie jede Larve in einen individuellen Brunnen einer 48-Brunnenplatte. Verfolgen Sie den Behandlungszustand für jedes Tier.
Übertragen Sie die Brunnenplatte auf eine Aufnahmeplattform und ziehen Sie die Abdeckung nach unten. Lassen Sie die Larven 10 Minuten akklimatisieren. Stellen Sie abwechselnd Zyklen von hellen und dunklen Perioden mit der Software.
Zebrafischlarven zeigen in der Regel mehr Bewegung im Dunkeln und weniger Bewegung im Licht. Zeichnen Sie die Gesamtstrecke auf, die von den Larven der Kontrolle und den Expositionsgruppen in jeder Periode zurückgelegt wird. Wenn die Verbindung neurotoxisch ist, zeigen Larven noch mehr Bewegung im Dunkeln und im Licht als Kontrolltiere.
Im folgenden Protokoll führen wir Verhaltenstests an den Zebrafischlarven durch, die neurotoxischen Verbindungen ausgesetzt sind.
- Mindestens 2 Stunden vor der Durchführung eines Experiments, stellen Sie die Raumtemperatur auf 28 Grad Celsius und fügen Sie 800 Mikroliter Belichtungslösung zu jedem Brunnen einer 48 Well Mikroplatte. Dann verwenden Sie eine 1 Milliliter Pipette mit einer modifizierten Spitze, um eine Larve in 200 Mikroliter Exposition Lösung zu jedem Brunnen der Mikroplatte zu übertragen, in Vorbereitung für eine Fortbewegung und Pfadwinkelexperiment.
Wenn alle Parameter eingestellt sind, schalten Sie die Beleuchtung im Testraum herunter und lassen Sie die Larven 10 Minuten lang im System akklimatisieren. Klicken Sie am Ende der Akklimatisierungsphase auf Experimentieren und Ausführen, und erstellen Sie den Ordner, in dem die experimentellen Dateien gespeichert werden sollen. Geben Sie dann den Ergebnisnamen ein und klicken Sie auf Hintergrund und Start.
Klicken Sie am Ende des Experiments auf Experimentieren und Stoppen. Bringen Sie dann die 48-Well-Mikroplatte für nachfolgende Experimente zurück in den Licht-Inkubator.
