Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour commencer, faire pousser les embryons dans 3 boîtes de Pétri. La première est une plaque de contrôle qui contient la solution de Hank - une solution de sel équilibrée. Les deuxième et troisième plaques ont la solution de Hank avec un composé potentiellement neurotoxique à différentes concentrations.
Le composé neurotoxique de la solution d’exposition pénètre la membrane externe des embryons par diffusion passive et modifie les processus du système nerveux tels que l’attention, la coordination et l’activité musculaire. Une fois que les embryons se développent en larves de l’âge approprié, transférez chaque larve dans un puits individuel d’une plaque de puits de 48 puits. Gardez une trace de l’état de traitement de chaque animal.
Transférer la plaque du puits sur une plate-forme d’enregistrement et retirer le couvercle. Laisser les larves s’acclimater pendant 10 minutes. Définir des cycles alternatifs de périodes de lumière et d’obscurité à l’aide du logiciel.
Les larves de poisson zèbre présentent normalement plus de mouvement dans l’obscurité et moins de mouvement dans la lumière. Enregistrez la distance totale parcourue par les larves de la lutte et les groupes d’exposition à chaque période. Si le composé est neurotoxique, les larves montrent encore plus de mouvement dans l’obscurité et dans la lumière que les animaux de contrôle.
Dans le protocole suivant, nous effectuerons des tests comportementaux sur les larves de poisson zèbre exposées à des composés neurotoxiques.
- Au moins 2 heures avant d’effectuer une expérience, réglez la température ambiante à 28 degrés Celsius et ajoutez 800 microlitres de solution d’exposition à chaque puits d’une microplaque de puits de 48 puits. Utilisez ensuite une pipette de 1 millilitre avec une pointe modifiée pour transférer une larve dans 200 microlitres de solution d’exposition à chaque puits de la microplaque, en préparation d’une expérience de locomotion et d’angle de trajectoire.
Lorsque tous les paramètres ont été définis, baissez l’éclairage dans la salle d’essai et permettez aux larves de s’acclimater dans le système pendant 10 minutes. À la fin de la période d’acclimation, cliquez sur Expérimenter et Exécuter, et créez le dossier dans lequel les fichiers expérimentaux doivent être enregistrés. Entrez ensuite le nom du résultat et cliquez sur Arrière-plan et Démarrer.
À la fin de l’expérience, cliquez sur Expérience et Arrêt. Puis retournez la microplaque de puits 48 à l’incubateur de lumière pour des expériences ultérieures.
