Larve Locomotion Assay: High-Throughput Metode til undersøgelse Neurobehavioral Toksicitet af en forbindelse i Zebrafish Larver

Den første er en kontrolplade, der indeholder Hanks opløsning.

Den neurotoksiske forbindelse i eksponeringsopløsningen trænger ind i embryonernes ydre membran ved passiv diffusion og ændrer nervesystemets processer såsom opmærksomhed, koordination og muskelaktivitet.

Overfør brøndpladen til en optagelsesplatform og træk dækslet ned. Lad larverne akklimatisere sig i 10 minutter. Sæt skiftende cyklusser af lys og mørke perioder ved hjælp af softwaren.

Zebrafisklarver udviser normalt mere bevægelse i mørke og mindre bevægelse i lyset. Registrer den samlede afstand, som larverne i kontrollen og eksponeringsgrupperne har tilbagelagt i hver periode. Hvis forbindelsen er neurotoksisk, viser larverne endnu mere bevægelse i mørket og i lyset end kontroldyr.

I den følgende protokol vil vi udføre adfærdstest på zebrafisklarver, der udsættes for neurotoksiske forbindelser.

- Mindst 2 timer før du udfører et forsøg, indstille rumtemperaturen til 28 grader Celsius og tilføje 800 mikroliter af eksponering opløsning til hver brønd af en 48 godt mikroplate. Derefter bruge en 1 milliliter pipette med en modificeret spids til at overføre en larve i 200 mikroliter af eksponering opløsning til hver brønd af mikropladen, som forberedelse til et bevægelse og stivinkel eksperiment.

Når alle parametrene er indstillet, skal du skrue ned for belysningen i testrummet og lade larverne akklimatisere sig i systemet i 10 minutter. Ved afslutningen af akklimatiseringsperioden skal du klikke på Eksperimentér og udfør og oprette den mappe, hvor de eksperimentelle filer skal gemmes. Indtast derefter resultatnavnet og klik på Baggrund og Start.

I slutningen af eksperimentet skal du klikke på Eksperimentér og Stop.