مقالة منهجية

إعداد Pyrophosphates إينوسيتول الجودة

15.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/3027

⸱

سبتمبر 3, 2011

 ,  ,  ,  , 
1Medical Research Council (MRC), Cell Biology Unit and Laboratory for Molecular Cell Biology, University College London

في هذه المقالة

ملخص

pyrophosphates اينوزيتول تلعب دورا هاما في أمراض السرطان مثل الإنسان ، والسكري والسمنة ، إلا أن الآلية الدقيقة لعمل هو موضع خلاف. عدم وجود pyrophosphates اينوزيتول المتاحة تجاريا يجعل دراسات تفصيلية للمشاكل. نحن هنا وصف بروتوكول بسيطة لإنتاج وعزل ملليغرام من pyrophosphates اينوزيتول.

الملخص

يتواجد الميو-إينوزيتول في الطبيعة إما في صورته غير المعدلة أو في مشتقات مفسفرة أكثر تعقيداً. ومن هذه الأخيرة، يعد إينوزيتول بنتakisفوسفات (IP5) وإينوزيتول هيكسakisفوسفات (حمض الفيتيك أو IP6) الأكثر وفرة في الخلايا حقيقية النواة. ويعتبر IP5 و IP6 من سلائف جزيئات إينوزيتول بيروفوسفات التي تحتوي على رابطة بيروفوسفات واحدة أو أكثر1. وتؤدي فسفرة IP6 إلى إنتاج ثنائي فوسفات إينوزيتول بنتakisفوسفات (IP7 أو PP-IP5) وثنائي ثنائي فوسفات إينوزيتول تتrakisفوسفات (IP8 أو (PP)2-IP4). وقد تم عزل إينوزيتول بيروفوسفات من جميع الكائنات حقيقية النواة التي تمت دراستها حتى الآن. بالإضافة إلى ذلك، فإن فئتي الإنزيمات المتميزتين المسؤولتين عن تخليق إينوزيتول بيروفوسفات محفوظتان للغاية عبر التطور2-4.

تتمتع كينازات IP6 (IP6Ks) بمرونة تحفيزية هائلة، حيث تقوم بتحويل IP5 وIP6 إلى PP-IP4 وIP7 على التوالي، ومن ثم تعزز توليد جزيئات أكثر تعقيداً باستخدام هذه النواتج كركائز5,6. ومؤخراً، تم تحديد فئة ثانية من الإنزيمات المولدة للبيروفوسفات في صورة بروتين VIP1 في الخميرة (المشار إليه أيضاً باسم PP-IP5K)، والذي لديه القدرة على تحويل IP6 إلى IP7 وIP87,8.

تنظم بيروفوسفات الإينوزيتول العديد من العمليات الخلوية المتباينة مثل إفراز الإنسولين9، وطول التيلومير10,11، والانجذاب الكيميائي12، والنقل الحويصلي13، والتوازن الفوسفاتي14، وتحرر بروتين gag في فيروس HIV-115. وقد اقتُرح آليتان للتأثير لهذه الفئة من الجزيئات؛ حيث يمكنها التأثير على الوظيفة الخلوية من خلال التفاعل الخيفي مع بروتينات محددة مثل AKT16، أو بدلاً من ذلك، يمكن لمجموعة البيروفوسفات أن تمنح مجموعة فوسفات لبروتينات مفسفرة مسبقاً17. غير أن الإمكانات الهائلة لمجال البحث هذا تعوقها غياب مصدر تجاري لبيروفوسفات الإينوزيتول، مما يمنع العديد من العلماء من دراسة هذه الجزيئات وهذا التعديل الجديد لما بعد الترجمة. كما أن الطرق المتاحة حالياً لعزل بيروفوسفات الإينوزيتول تتطلب أجهزة كروماتوغرافية متطورة18,19، وتستخدم هذه الإجراءات ظروفاً حمضية قد تؤدي إلى تحلل بيروفوسفات الإينوزيتول20 وبالتالي ضعف الاسترداد. علاوة على ذلك، فإن إجراءات إزالة الأملاح المرهقة بعد الفصل الكروماتوغرافي تقصر استخدامها على المختبرات المتخصصة.

نصف في هذه الدراسة طريقة ميسرة لإنتاج وعزل وتنقية نواتج تفاعلات إنزيمات IP6-kinase و PP-IP5-kinases. وقد أمكن تطبيق هذه الطريقة بفضل قدرة الفصل الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد (PAGE) على فصل فوسفاتات الإينوزيتول عالية الفسفرة20. فبعد إجراء التفاعلات الإنزيمية لـ IP6K1 و PP-IP5K باستخدام IP6 كركيزة، استُخدم PAGE لفصل بيروفوسفاتات الإينوزيتول الناتجة، والتي جرى استخلاصها لاحقاً في الماء.

البروتوكول

1. رد الفعل الأنزيمية -- يوم 1 (1 ساعة بعد الظهر)

  1. الخطوة الأولى هي إعداد 10-20 التفاعلات الإنزيمية المستقلة التي IP 6 K1 أو تحويل الملكية الفكرية VIP1 6 إلى الأشكال الإسوية pyrophosphorylated.
  2. نحن نستخدم له 6 - IP K1 والانزيمات GST - Vip1 تنقيته من E. القولونية وفقا لبروتوكول 17،18 الموصوفة سابقا.
  3. تجهيز 50 ميكرولتر تحتوي على ردود فعل رد فعل 1X العازلة (Hepes 30 ملم 6.8 درجة الحموضة ، و 50 ملي مول كلوريد الصوديوم ، 6 مم MgSO 4 ، 1 ملم DTT) ، 6 فسفوكرياتين ملم (PCR) ، و 25 يو / مل CreatinePhosphoKinase (CPK) ، 5 مم ATP (ملغ الملح) ، 0.3 ملي IP6 ، 0،05-0،1 ميكروغرام صاحب IP - 6 K1 أو ضريبة السلع والخدمات Vip1. ضبط مستوى الصوت مع 2 MiliQ O. DDH
  4. تدور لفترة وجيزة في رد الفعل واحتضان 37 درجة مئوية خلال الليل مع التناوب.

2. بولي أكريلاميد صب جل والتحميل -- يوم 2 (4 ساعات بعد الظهر)

  1. يتم تحضير هلام بولي أكريلاميد باستخدام 24 سم ، 18 سم لوحات زجاجية واسعة والفواصل واسعة 1.5 مم. وعادة ما يتم استخدام ممر 16 أو مشط التحضيرية حارة واحدة.
  2. تحضير مزيج (50 مل / جل) يحتوي على ما يلي : 35.5 ٪ (W / V) الأكريلاميد : مكرر الأكريلاميد 19:01 ، 1X بيرسلفات الأمونيوم تريس / البورات / EDTA (TBE) ، 0.05 ٪ (W / V) (وكالة الأنباء الجزائرية ) ، Temed 0.05 ٪ (W / V). صب مزيج بين لوحات ما قبل محمل الزجاج ، وادخال المشط والسماح للتبلمر 30-60 دقيقة في RT.
  3. مرة واحدة في هلام وبلمرة ، ونقل الجهاز إلى غرفة باردة وقبل تشغيله في TBE 1X لحوالي 30-60 دقيقة على 200-300 فولت.
  4. إضافة 1X صبغة OrangeG (10 ملي تريس - pH7.0 حمض الهيدروكلوريك ، 1 ملم EDTA ، الجلسرين 30 ٪ ، 0.1 ٪ OrangeG) إلى كل التفاعل. تحضير عينة تحتوي على 2 nmol الملكية الفكرية 6 الى تحميل كعنصر تحكم القياسية.
  5. يغسل جيدا جيدا مع كل تشغيل العازلة باستخدام المحاقن والإبر 21G لإزالة أي يعجل ، ثم تحميل الجل. تجنب التحميل على الآبار الجانبية.
  6. تشغيل هلام بين عشية وضحاها على 450-550 فولت (7 mAmp / هلام) ، حتى الفرقة صبغ OrangeG ضمن مشاركة 10 سم من الجزء السفلي من هلام.

3. بمعزل عن الملكية الفكرية 7 -- يوم 3 (4 ساعات) ، ويوم 4 (6-7 عملية التجفيف SpeedVac ساعة)

  1. تفكيك جهاز هلام بعناية وإزالة إحدى الصفائح الزجاجية ترك الجل على الآخر. قطع جزء صغير من الجل من فوق الشريط صبغ OrangeG إلى القاع الذي يحتوي على 6 من IP القياسية ومسار واحد العينة ، كما هو مبين في الشكل 1.
  2. وصمة عار على قطع جزء من هلام مع الأزرق طولويدين (0.1 ٪ (W / V) طولويدين الزرقاء ، و 20 ٪ (W / V) والميثانول ، 2 ٪ (W / V) الجلسرين) لبضع دقائق (1-3 دقائق) أو حتى الفرقة بيروفوسفات اينوزيتول تظهر. وضع لوحة من الزجاج الخلفي إزالة سابقا على رأس لمنع هلام هلام غير ملوثين من التجفيف.

ينبغي أن الفرقة الملكية الفكرية 7 تكون مرئية منذ تشغيله بشكل أبطأ قليلا من مستوى 6 IP. وينبغي للاعبي التنس المحترفين ، والذي يعمل بشكل أسرع من 6 الملكية الفكرية ، وأيضا أن تكون مرئية (الشكل 1). نقل الجزء الملون من هلام في التوصل إلى حل لإزالة البقع (20 ٪ (W / V) الميثانول) لبضع دقائق ، يغسل أي فائض في الزرقاء وإعادة طولويدين الجل مع الجل غير ملوثين.

إذا كان مطلوبا التصور العالي الأشكال الإسوية اينوزيتول pyrophosphorylated (IP IP 8 و 9) ، وصمة عار الجل مع الحل طولويدين تلطيخ الأزرق لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، يغسل الأزرق طولويدين مع الحل دي تلطيخ لحوالي 15 دقيقة.

  1. مع خفض شفرة حلاقة الملكية الفكرية 7 الفرقة على الجزء غير ملوثين من هلام به كمرجع للملكية الفكرية موقف ترحيل 7 العزم مع الجل الملون (الشكل 1).
  2. وضع الملكية الفكرية 7 الفرقة التي قطعت من الجل على أنبوب 15 مل و 10 مل من إضافة 2 MilliQ O. DDH وضع الأنابيب في التناوب لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. رفض السائل لإزالة الفائض من جزيئات الأكريلاميد TBE والمجهرية.
  3. بعد ذلك ، نفذ two - جفاف الماء دورات. إضافة 5 مل من 50 ٪ (W / V) الميثانول إلى أنبوب مع هلام يحتوي على 7 الملكية الفكرية وتدوير في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. نقل شريحة هلام لأنبوب جديد 15 مل تحتوي على 5 مل من 2 MilliQ O DDH وتدوير في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. لا يتخلص من الميثانول وMilliQ H O 2 من الأنابيب. تكرار الجفاف دورة الماء مرة أخرى ، من خلال إعادة نقل هلام بولي أكريلاميد في 15 مل من الأنابيب المستخدمة سابقا. لا يمكن أن يؤديها واحد من يغسل طوال الليل.
  4. لتركيز IP eluted 7 ، جفاف 10 مل معا (5 مل MilliQddH 2 O و 5 مل 50 ٪ الميثانول (ث / ت)) باستخدام SpeedVac ساخنة عند 60 درجة مئوية.
  5. مرة واحدة على عينات جافة تقريبا ، ونقل السائل المتبقي (300-600 ميكرولتر) لa1.5 مل أنبوب الطرد المركزي وتدور لمدة 2 دقيقة في 5000 دورة في الدقيقة.
  6. طاف جمع ونقل الى الطازجة 1.5 مل أنبوب الطرد المركزي ؛ مغادرةأسفل 20-30 ميكرولتر أنها قد تحتوي على جزيئات الأكريلاميد.
  7. إذا كان ذلك ضروريا الاستمرار في عملية التجفيف باستخدام SpeedVac غير مدفأة. وخفضت بشكل كبير في انتعاش IP 7 إذا العينات يجف تماما ، ثم إنهاء عملية التجفيف عندما تصل عينات حجم 100-300 ميكرولتر.

4. تحديد تركيز 7 الملكية الفكرية والنقاء.

  1. استخدام 2-5 ميكرولتر من العينة تعافى 7 IP لتشغيل على هلام PAGE ، على غرار الأقسام 2،2-2،5. تحميل العديد من التخفيفات IP 6 (أي 0.5 ، 1 ، 2 ، 4 nmol) وفقا لمعايير وتركيز 4 nmol من بولي - P علامة. بعد تشغيل هلام ، تصور الأشكال الإسوية بيروفوسفات اينوزيتول بواسطة تلطيخ واجتثاث تلطيخ الجل كامل مع حل طولويدين الأزرق ، وبعد الإجراء الموضح في القسم 3.2 (الشكل 2A).
  2. بعد تلطيخ طولويدين ، يمكن تحديد التركيزات عن طريق مسح الجل ومقارنة الاختلافات في كثافة تتراوح بين 6 الملكية الفكرية والملكية الفكرية 7 ، وذلك باستخدام برامج التصوير مثل J - الصور ، كما هو مبين في الشكل 2B.

5. ممثل النتائج :

ويمكن تحويل التحضيرية الأنزيمية للملكية الفكرية من 6 إلى 7 باستخدام IP IP 6 K1 وVIP1 الانزيمات حلها بسهولة باستخدام التحليل PAGE (الشكل 1). التحميل من 6 الملكية الفكرية باعتبارها التحكم في حجم جنبا إلى جنب مع تلوين طولويدين الجل الأزرق يتيح التعرف على المشتقات pyrophosphorylated ، حيث أنها تعمل بشكل أبطأ اعتمادا على عدد من المجموعات الفوسفات الموجودة على الحلبة اينوزيتول. الإجراء المذكورة أعلاه يسمح للتنقية سهلة من 7 IP. وكشف تحليل لبيروفوسفات اينوزيتول يطهر PAGE نقاء الملكية الفكرية لدينا 7 (الشكل 2A). ومن المثير للاهتمام ، و1/3PP-IP 5 ايزومير من الناتج 7 IP من VIP1 يهاجر أبطأ قليلا من أيزومر 5 5PP - IP من 7 IP التي تم إنشاؤها بواسطة K1 6 IP. 6 استخدام معايير الملكية الفكرية تسمح الكمي سهلة للتركيز IP المنقى 7 (الشكل 2B). 7 قبل استخدام الملكية الفكرية لمزيد من التجارب ، يمكن تقييم نشاطها البيولوجي
(الشكل 3). 5PP - IP هو المحتضنة 5 مع VIP1 ومع الفوسفاتيز 7 IP DDP1 (diphosphoinositol phosphohydrolase متعددة الفوسفات). بشكل روتيني ، يتم تحويل الملكية الفكرية تنقيته من 7 إلى 8 من VIP1 الملكية الفكرية والملكية الفكرية التي DDP1 6 (الشكل 3).

الشكل 1
الشكل 1 : من تلطيخ طولويدين PAGE والعزلة من الفرقة الملكية الفكرية 7 قطع جزء من الجل الذي يحتوي على معيار (IP 6) والملون باستخدام حل طولويدين الأزرق. الفرق الثلاثة تمثل (من أعلى إلى أسفل) 7 IP ، IP 6 و ATP. ثم كان متحالفا الجزء الملون من هلام مع ما تبقى من هلام. هذا يسمح للتوطين جزء من هلام يحتوي على 7 الملكية الفكرية ، والتي يمكن بعد ذلك قص وتنقيته (مربع متقطع).

الشكل 2
الشكل 2 : تحليل PAGE الملكية الفكرية منتجات التفاعل 6 K1 وVIP1. أ) تم استخدام تحليل IP 6 (4 ، 2 ، 1 ، 0.5 nmol) عن طريق تلوين طولويدين الأزرق من أجل تحديد IP 7 تركيز تنقيتها من كل 6 IP K1 (IP - 5PP 5) وVIP1 (1/3PP-IP 5) ردود الفعل. B) مبعثر تحليل مؤامرة لتحديد تركيز الملكية الفكرية المنقى 7. وتم تحديد التركيزات وفقا لكثافة الموجات ، محسوبة باستخدام البرمجيات imageJ ، مقارنة كميات محددة مسبقا من 6 IP. والمحور السيني يمثل شدة ، ويمثل المحور Y - تركيزات التي أعرب عنها في nmol.

الشكل 3
الشكل 3 : تحليل النشاط 7 IP البيولوجي لتحديد نوعية الملكية الفكرية المنقى 7 المحتضنة نحن 5PP 5 - IP (IP 6 K1 IP ولدت 7) مع VIP1 أو مع الفوسفاتيز 7 DDP1 IP وحلها ثم رد الفعل على الصفحة. كشفت وتلطيخ دابي طولويدين الإنتاج المتوقع من 8 VIP1 الملكية الفكرية وتحويل الملكية الفكرية من 7 إلى 6 من DDP1 IP.

المناقشة

غير محدودة بشدة استخدام بيروفوسفات اينوزيتول في الكيمياء الحيوية بسبب عدم توفر هذه المركبات التجارية وحساسية الفقيرة من طرق الكشف الحالية. مزيج من صفحة ، والذي تمكن من فصل الجزيئات التي تمتلك عدد مختلف من مجموعات الفوسفات ، وزرقة الطولويدين (الشكل 1) ، وصبغ متبدل اللون الذي يربط لمجموعات الفوسفات ، وتمكن من السهل اكتشاف الأشكال الإسوية pyrophoshate اينوزيتول فتح مجالات جديدة للبحث 20.

نفذت استخدام التكنولوجيا PAGE وصف لتنقية المنتجات بيروفوسفات اينوزيتول رد الفعل الأنزيمية outby إما 6 أو IP K1 VIP1 هو بسيط ، طريقة اقتصادية والموثوق بها التي تسمح لإنتاج كميات كبيرة من الملكية الفكرية ذات جودة عالية 7. لا يقتصر على الطريقة الموصوفة أعلاه لعملية تنقية بسيطة للملكية الفكرية 7 ولكن تعديلات طفيفة على البروتوكول صفها قد تسمح لتنقية مجموعة مختلفة من pyrophosphates اينوزيتول. ويمكن الكشف عن أعلى فسفرته الأشكال الإسوية بيروفوسفات اينوزيتول ، تحتوي على مجموعة الفوسفات أكثر من ثمانية باستخدام الملكية الفكرية (7) أو كميات مختلفة من 6 الملكية الفكرية باعتبارها الركيزة 20،6. ويمكن الكشف عن هذه pyrophosphates اينوزيتول من خلال زيادة طول تلطيخ الداخلي وتنقيته في وقت لاحق (القسم 3.2). علاوة على ذلك ، فإن استخدام الملكية الفكرية باعتبارها الركيزة 5 للتفاعل الأنزيمي السماح للتنقية PP - IP (5) وpyrophosphates اينوزيتول أخرى تحتوي على مجموعة الهيدروكسيل على الحلقة اينوزيتول.

في الختام ، وهذه الطريقة بسهولتها يسمح لتنقية موثوق بها كميات مليغرام من pyrophosphates اينوزيتول مع الأدوات المتاحة على نطاق واسع ، مما يفتح آفاقا جديدة لهذا الحقل البحوث المثيرة.

الإفصاحات

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نشكر ألف ريشيو عن التعليقات المفيدة وقراءة المخطوط. وأيد هذا العمل عن طريق تمويل البحوث الطبية (MRC) المجلس إلى خلية علم الأحياء وحدة الإنسان من قبل برنامج منح العلوم الحدودي (RGP0048/2009-C).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة فهرس العدد
حمض الفيتيك (IP 6) سيغما الدريخ P8810
بولي - P (فوسفات الصوديوم) سيغما الدريخ P8510
ATP ملغ الملح + 2 سيغما الدريخ A9187
OrangeG سيغما الدريخ O3756
فسفوكرياتين (PCR) سيغما الدريخ P7936
CreatinePhospho كيناز (CPK) سيغما الدريخ C3755
GST - Vip1 17 17
له ، IP6K1 18 18
له ، Ddp1 المتوفرة في المختبر المتوفرة في المختبر
الأكريلاميد : مكرر الأكريلاميد 19:01 (40 ٪) Flowgen H16972
بيرسلفات الأمونيوم (APS) سيغما الدريخ A9164
تريس / البورات / EDTA (TBE) سيغما الدريخ تي 9060
Temed BDH 43083G
طولويدين الأزرق سيغما الدريخ 198161
SpeedVac المسيح 100218
جل الأجهزة Hoefer SE600
فراغ مشعب المسيح ألفا 2-4
فراغ مضخة ABM Greiffenberger 4EKF63CX

المراجع

  1. Bennett, M., Onnebo, S. M., Azevedo, C., Saiardi, A. Inositol pyrophosphates: metabolism and signaling. Cell Mol Life Sci. 63, 552-564 (2006).
  2. Burton, A., Hu, X., Saiardi, A. Are inositol pyrophosphates signalling molecules? J Cell Physiol. 220, 8-15 (2009).
  3. Barker, C. J., Illies, C., Gaboardi, G. C., Berggren, P. O. Inositol pyrophosphates: structure, enzymology and function. Cell Mol Life Sci. 66, 3851-3871 (2009).
  4. Shears, S. B. Diphosphoinositol polyphosphates: metabolic messengers. Mol Pharmacol. 76, 236-252 (2009).
  5. Saiardi, A., Erdjument-Bromage, H., Snowman, A. M., Tempst, P., Snyder, S. H. Synthesis of diphosphoinositol pentakisphosphate by a newly identified family of higher inositol polyphosphate kinases. Curr Biol. 9, 1323-1326 (1999).
  6. Draskovic, P. Inositol hexakisphosphate kinase products contain diphosphate and triphosphate groups. Chem Biol. 15, 274-286 (2008).
  7. Mulugu, S. A conserved family of enzymes that phosphorylate inositol hexakisphosphate. Science. 316, 106-109 (2007).
  8. Fridy, P. C., Otto, J. C., Dollins, D. E., York, J. D. Cloning and characterization of two human VIP1-like inositol hexakisphosphate and diphosphoinositol pentakisphosphate kinases. J Biol Chem. 282, 30754-30762 (2007).
  9. Illies, C. Requirement of inositol pyrophosphates for full exocytotic capacity in pancreatic beta cells. Science. 318, 1299-1302 (2007).
  10. Saiardi, A., Resnick, A. C., Snowman, A. M., Wendland, B., Snyder, S. H. Inositol pyrophosphates regulate cell death and telomere length through phosphoinositide 3-kinase-related protein kinases. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 1911-1914 (2005).
  11. York, S. J., Armbruster, B. N., Greenwell, P., Petes, T. D., York, J. D. Inositol diphosphate signaling regulates telomere length. J Biol Chem. 280, 4264-4269 (2005).
  12. Luo, H. R. Inositol pyrophosphates mediate chemotaxis in Dictyostelium via pleckstrin homology domain-PtdIns(3,4,5)P3 interactions. Cell. 114, 559-572 (2003).
  13. Saiardi, A., Sciambi, C., McCaffery, J. M., Wendland, B., Snyder, S. H. Inositol pyrophosphates regulate endocytic trafficking. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14206-14211 (2002).
  14. Auesukaree, C., Tochio, H., Shirakawa, M., Kaneko, Y., Harashima, S. Plc1p, Arg82p, and Kcs1p, enzymes involved in inositol pyrophosphate synthesis, are essential for phosphate regulation and polyphosphate accumulation in Saccharomyces cerevisiae. J Biol Chem. 280, 25127-25133 (2005).
  15. Azevedo, C., Burton, A., Ruiz-Mateos, E., Marsh, M., Saiardi, A. Inositol pyrophosphate mediated pyrophosphorylation of AP3B1 regulates HIV-1 Gag release. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 21161-21166 (2009).
  16. Bhandari, R. Protein pyrophosphorylation by inositol pyrophosphates is a posttranslational event. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 15305-15310 (2007).
  17. Azevedo, C., Burton, A., Bennett, M., Onnebo, S. M., Saiardi, A. Synthesis of InsP7 by the Inositol Hexakisphosphate Kinase 1 (IP6K1). Methods Mol Biol. 645, 73-85 (2010).
  18. Otto, J. C. Biochemical analysis of inositol phosphate kinases. Methods Enzymol. 434, 171-185 (2007).
  19. Losito, O., Szijgyarto, Z., Resnick, A. C., Saiardi, A. Inositol pyrophosphates and their unique metabolic complexity: analysis by gel electrophoresis. PLoS One. 4, e5580-e5580 (2009).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

إنزيم كاينيز IP6الفصل الكهربائي للهلام متعدد الأكريلاميدالتفاعلات الإنزيميةعزل IP7دورات التجفيف والترطيبصبغ التوليدين الأزرقتحليل PAGEتوليد IP8النشاط البيولوجي
إعداد Pyrophosphates إينوسيتول الجودة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.