ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أشكر لورا لوري آن الذين طوروا هذه التقنية في المختبر. معتمد من قبل النظام المنسق NIHMH70926. كان مدعوما من قبل جنيفر Gutzman الزمالة CSBi / ميرك ما بعد الدكتوراه.

بروتوكول الجزء 1 : الاستعداد للmicroinjection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحضير للحقن عن طريق سحب الإبر الشعرية باستخدام إبرة سوتر مجتذب الآلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل الإبرة مع صبغة الفلورسنت (مثل تكساس وديكستران الأحمر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الإبرة في جهاز micromanipulator وmicroinjection. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الإبرة إلى الحجم المناسب في زاوية لإنشاء تلميح مشطوف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس حجم انخفاض والتحقق من أنه من بين 2nl - 1 في حقن في قطاع النفط. </li></ol> الجزء 2 : تحضير الأجنة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الأجنة 30 دقيقة في وقت سابق من مرحلة الفائدة. على سبيل المثال ، لدراسة البطينين في 24 التسميد آخر ساعة (HPF) ، حقن أجنة في 23.5 HPF. مرحلة الأجنة وفقا لكيميل وآخرون. (4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت stereomicroscope ، إزالة بعناية المشيماء من أجنة باستخدام ملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام طبق من البلاستيك مغطاة agarose 1 ٪ ، كزة ثقوب في agarose مع البلاستيك 100-200 غيض ماصة ميكرولتر. إزالة بعناية شمعات agarose من الثقوب باستخدام ملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة في وسائل الإعلام في جنين طبق agarose مع الثقوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة tricaine (مصنوعة وفقا لWesterfield (5)) إلى وسائل الإعلام لتخدير الجنين ومنع الحركة خلال التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكان برفق ذيل الجنين إلى أسفل في حفرة ، وتوجيهه بحيث أجهزة الحقن في الجانب الخلفي من الجنين. </li></ol> الجزء 3 : عن طريق الحقن في المخ بطين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحقن الدماغ البطين ، وترتيب الإعداد المجهرية بحيث طرف الإبرة في نفس الحقل للعرض والجنين على الطاقة العالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضعت بعناية الإبرة من خلال roofplate رقيقة من الدماغ المؤخر الخلفي عادل لhingepoint r0/r1 دون أن تصيب أنسجة الدماغ أدناه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الصبغة فقط ما يكفي لملء تماما البطينين. قد يستغرق عدة حقن لملء الفضاء البطين ، اعتمادا على مرحلة من مراحل الجنين. </li></ol> الجزء 4 : التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام قطعة نظيفة من 1 ٪ agarose المغلفة الطبق ، كزة ثغرات جديدة في الطبق ، وإزالة شمعات ، وإضافة إلى تخدير tricaine الأجنة ومنع الحركة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ذيل الجنين البطين حقن في حفرة وموقف للحصول على صورة الظهرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط صورة باستخدام الضوء المرسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انها حيوية للغاية لعدم نقل الجنين أو المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير الإعدادات في المجهر والتقاط صورة مع ضوء الفلورسنت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة الجنين لالتقاط صور مع كل الاطراف ضوء المنقولة وضوء الفلورسنت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفظ الصور كملفات TIFF لمعالجة الصور في Photoshop. </li></ol> الجزء 5 : معالجة الصور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمعالجة الصور في فوتوشوب ، مفتوحة على ضوء الصور المنقولة وضوء الفلورسنت من الجنين نفسه في اتخاذ نفس الموقف. تأكد من كافة الإعدادات هي نفسها عن كل صورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسحب صورتك الفلورسنت على ضوء الصورة المنقولة وخط لهم بالضبط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع صورة الفلورسنت المحدد ، حدد &quot;صورة&quot; ، &quot;تسويات&quot; ، ثم &quot;استبدال اللون&quot; ، وتغيير خلفية سوداء إلى بيضاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في إطار &quot;استبدال اللون&quot; ضبط &quot;ضبابي&quot; عامل إلى اليمين حتى الصور الفلورسنت تبدو موحدة في اللون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في إطار &quot;الطبقات&quot; ، حدد &quot;ضرب&quot; لعرض الصور تراكب. ينبغي صورتك الفضاء البطين تطابق صورة الضوء المرسل تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفظ هذا الملف وكرر عن أي صور أخرى. </li></ol> نتائج ممثل / نتائج وتظهر الصور المناسبة حقن البطين في الشكل رقم 1 لوحات م ، في حين ترد على سبيل المثال من الصور الحقن غير صحيحة في EH. الحقن المناسبة لها حواف حادة وصبغ غير منتشر. ويمكن حقن غير صحيحة ، والذي يحدث عندما يتم إدخال الإبرة بعيدا جدا في البطين ويضرب أنسجة المخ أدناه ، ينتج صبغة ما هو خارج مرئية من الفضاء والبطين في صفار البيض. <img src="/files/ftp_upload/1218/1218figure1.png" alt="الشكل 1" width="600" height="742" /> الشكل 1. وترد البطين حقن 25 أجنة HPF نوع البرية (م) وتصحيح طريقة الحقن (EH) طريقة الحقن غير صحيحة على سبيل المثال. (A ، E) brightfield الظهرية الصور مع صور المقابلة فلوري (B ، F) وتراكب الصور الفلورسنت وbrightfield (C ، G) لطرق الحقن الصحيحة وغير الصحيحة على حد سواء هو مبين. الأسهم تشير إلى المناطق التي تكون فيها صبغة تجاوزت مساحة بطين الدماغ بسبب حقنة البطين غير صحيحة (راجع &quot;أخطاء&quot;). الأمامي وإلى اليسار في جميع الصور. المشاكل : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr style="font-weight:bold; font-size:16px;"><td> مشكلة </tد&gt; <td> سبب </td><td> علاج </td></tr><tr><td> كنت سحق الجنين مع الإبرة. </td><td> إبرة حادة جدا الخاص بك هو الطرف أو كبير جدا. </td><td> تبدأ إبرة جديدة وليس كسرها حتى الظهر. شطبة الخاص إبرة لجعلها حادة مثل إبرة المحقنة. </td></tr><tr><td> الصبغة هي في جميع أنحاء الجنين وصفار (انظر الشكل 1E - H). </td><td> ذهب إبرة الخاص من خلال الأنسجة ولم البقاء في الفضاء البطين. </td><td> إبرة الخاص بك قد لا تكون حادة بما فيه الكفاية ، لذلك كنت غير قادر على التحكم في سرعة الثقب. </td></tr><tr><td> صبغة باهتة جدا أو ليس في الدماغ المقدم. </td><td> عدم استخدام ضغط مرتفع بما يكفي لحقن أو إبر الخاص لم يكن كافيا حتى الأمامية للوصول إلى الدماغ المقدم عند حقن الصبغة. </td><td> زيادة ضغط حقن إبرة أو مكان الأمامي الخاص أكثر قليلا خلال الحقن. يمكنك وضع الإبرة في الدماغ المتوسط ​​، الدماغ المؤخر الحدود إذا كان المطلوب المزيد من التفاصيل في الدماغ المقدم. يمكنك أيضا ببساطة الانتظار قليلا لصبغ لنشر مزيد من المشاورات قبل التصوير. </td></tr><tr><td> صورك الفلورسنت مظلمة حول حواف بعد تغيير اللون في Photoshop. </td><td> نسيت لتغيير &quot;ضبابي&quot; الإعداد في إطار استبدال اللون. </td><td> نقل &quot;ضبابي&quot; وصولا إلى الحق في استبدال لون النافذة. </td></tr><tr><td> سوف لا ثقب إبرة roofplate الدماغ المؤخر. </td><td> لم يتم خفض الإبرة بشكل صحيح. </td><td> جعل إبرة جديدة. إذا كنت تفعل الكثير من حقن الابر قد تحتاج عدة لأنها يمكن أن تحصل مملة. </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li>
<li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li>
<li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead%2Fatp1a1a.1+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li>
<li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Westerfield, M. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , University of Oregon Press. (1995).</li>
</ol>

نحن في هذا الفيديو لشرح كيفية حقن صبغة الفلورسنت (تكساس الأحمر ديكستران) في الدماغ الزرد النامية البطينين. وتستخدم هذه الطريقة لتصور الفضاء بطين الدماغ على النقيض من الظهارة العصبية المحيطة بها ومفيد للغاية في تحديد شكل مساحة البطين وكذلك على شكل أنسجة المخ المحيطة بها. أنها تسمح لنا أن نفهم بشكل أفضل في عملية تشكيل بطين الدماغ والمخ التشكل على مر الزمن في الأجنة الحية. هذا الأسلوب هو أداة ممتازة لدراسة عيوب الدماغ وتشكيل البطين الأولي لتوصيف ودراسة التشكل المسوخ الدماغ.

<table><tbody><tr><td>ملقط (Forceps)</td><td>أداة</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب شعرية (إبر)</td><td>أدوات</td><td>Frederick Haer and Co.</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>أطباق مغطاة بالأغاروز</td><td>أدوات</td><td>أغاروز (Seakem GTG; Lonza) أطباق (Corning)</td><td>أغاروز (50027) أطباق (430166)</td><td>اجعل عمق الأغاروز في الطبق حوالي 2-3 mm اعتماداً على مرحلة الجنين التي يتم حقنها</td></tr><tr><td>مجهر تشريحي</td><td>مجهر</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>كاميرا مجهرية ذات قدرات فلورية ومع برنامج لالتقاط الصور</td><td>أدوات</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>رؤوس ماصات 1-200 &amp;mu;</td><td>أدوات</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>1111-0806</td><td>هذا الحجم مثالي لثقب ثقوب في الأغاروز بحيث تستقر الأجنة فيها بشكل مثالي.</td></tr><tr><td>فوتوشوب (Photoshop)</td><td>تحليل الصور</td><td>Adobe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>حلقة نقل الأجنة</td><td>أدوات</td><td></td><td></td><td>قم بصناعة هذه الحلقة بنفسك باستخدام ماصة زجاجية وشعرة أو خيط صيد، ثم أغلقها بشمع النحل.</td></tr><tr><td>حاقن مجهري</td><td>أدوات</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PL1-100</td><td></td></tr><tr><td>جهاز سحب الإبر (Needle Puller)</td><td>أدوات</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td>الإعدادات (الحرارة 785، السحب 70، السرعة 40، الوقت 70).</td></tr><tr><td>المناول المجهري (Micromanipulator)</td><td>أدوات</td><td>Narishige International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>صبغة فلورية Texas-Red Dextran 70,000MW</td><td>كاشف</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>D1830</td><td>تتوفر أوزان جزيئية أخرى عند الرغبة.</td></tr><tr><td>تريكاين (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td><td>كاشف</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>وسط نمو الأجنة</td><td>كاشف</td><td></td><td></td><td>وفقاً لـ Westerfield (5)</td></tr></tbody></table>

الزرد حقن الدماغ البطين

Zebrafish Brain Ventricle Injection

مطلوب السليم تشكيل بطين الدماغ أثناء التطور الجنيني للدماغ وظيفة المخ المعتادة. البطينات الدماغية هي تجاويف الحفظ للغاية داخل المخ التي تمتلئ السائل النخاعي. في الزرد ، وبعد تشكيل الأنبوب العصبي ، والظهارة العصبية يخضع لسلسلة من التشنج والطيات في حين يملأ بسائل مما أدى إلى تشكيل بطين الدماغ. نحن في حاجة من أجل فهم عملية تشكيل البطين ، والتغيرات التي تحدث في شكل الظهارية العصبية في نفس الوقت ، وسيلة لتصور الفضاء البطين بالمقارنة مع أنسجة المخ. ومع ذلك ، فإن طبيعة الأجنة الزرد الشفافية يجعل من الصعب التفريق بين الأنسجة من الفضاء البطين. ولذلك ، قمنا بتطوير تقنية الحقن بطين الدماغ حيث يتم ملء الفراغ البطين مع صبغة الفلورسنت والتقط بواسطة المجهر وbrightfield الفلورسنت. ثم تتم معالجة brightfield والصور الفلورسنت وفرضه في Photoshop. هذا الأسلوب يسمح للتصور من الفضاء البطين مع صبغة الفلورسنت ، وبالمقارنة مع شكل الظهارة العصبية في صورة brightfield. ويمكن استخدام حقن الدماغ الزرد في البطين من 18 ساعة من خلال التسميد آخر مراحل اليرقات في وقت مبكر. وقد استخدمنا هذه التقنية على نطاق واسع في دراساتنا تشكيل بطين الدماغ والتشكل ، وكذلك في وصف المسوخ التشكل الدماغ (1-3).

بعد تشكيل الأنبوب العصبي ، ويضيق الظهارة العصبية والطيات في حين أن أنبوب يملأ مع السائل النخاعي الجنينية (eCSF) لتشكيل البطينين المخ الجنينية. قمنا بتطوير هذه التقنية حقن البطين لتصور أفضل السوائل تملأ الفضاء على النقيض من الشكل ظهاري في جنين حي.

يعد التكوين السليم لبطينات الدماغ أثناء تطور الدماغ الجنيني أمراً ضرورياً لوظائف الدماغ الطبيعية. وبطينات الدماغ هي تراكيب محفوظة للغاية...

تبدأ هذه العملية بتحديد المرحلة العمرية لأجنة أسماك الزيبرا. وعندما تصل الأجنة إلى المرحلة المطلوبة، يتم إخراجها من الغشاء الكوريوني. بعد ذلك، تُحدث ثقوب في طبق مطلي بمادة aros باستخدام رأس ماصة لتثبيت الأجنة، ثم توضع الأجنة برفق في الثقوب بحيث تكون ذيولها متجهة للأسفل.بعد تثبيت الأجنة، يتم حقن صبغة فلورية بعناية في الحيز البطيني للجنين عبر الدماغ الخلفي. وبعد الحقن البطيني، يتم تصوير الأجنة ومعالجة البيانات باستخدام برنامج Photoshop. مرحباً، أنا جينيفر غوتمان من مختبر الدكتورة هازل سيف في معهد وايت هيد للأبحاث الطبية الحيوية في MIT في كامبريدج، ماساتشوستس.سنعرض لكم اليوم إجراءً خاصاً بحقن بطينات دماغ سمكة الزيبرا. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة تكوين بطينات الدماغ والتشكل المورفولوجي للنسيج العصبي الظهاري في أسماك الزيبرا الحية. ونظراً لطبيعة أجنة سمكة الزيبرا الشفافة، قد يكون توصيف شكل بطينات الدماغ أمراً صعباً.تُعد هذه التقنية وسيلة مفيدة وبسيطة للتمييز بين الحيز المليء بالسوائل والأنسجة المحيطة، ولتوصيف الأجنة الطافرة التي قد تعاني من عيوب في تكوين بطينات الدماغ. لذا، فلنبدأ الآن. للتحضير لحقن بطين دماغ سمكة الزيبرا، نبدأ بصناعة إبر الحقن.يُستخدم جهاز سحب الشعيرات (needle puller) من شركة Sutter لسحب الإبر الشعرية. ثم تُملأ الإبرة الشعرية بصبغة فلورية، مثل Texas red dextrin. بعد ذلك، يتم تركيب الإبرة المملوءة في مِتحكم دقيق (micro manipulator) ضمن جهاز الحقن المجهري.اقطع الإبرة بزاوية للحصول على الحجم المناسب. ولإنشاء طرف مائل، قم بقياس حجم القطرة من الإبرة وتحقق من أنه يتراوح بين 1 إلى 2 nanoliters لكل حقنة في الزيت. لبدء مرحلة الإجراء هذه، ووفقًا لـ Kimmel، يجب حقن جميع الأجنة قبل 30 دقيقة من المرحلة المراد دراستها.على سبيل المثال، لدراسة البطينات بعد 24 ساعة من الإخصاب، يتم حقن الأجنة بعد 23 ساعة ونصف من الإخصاب. يوضع الجنين في المرحلة المراد دراستها تحت المجهر المجسم، ويُزال الغشاء الكوريوني بعناية من الجنين باستخدام الملقط. بعد ذلك، يتم تحضير طبق aros للأجنة باستخدام طبق بلاستيكي مغطى بـ 1% aros، وتُحدث ثقوب في الـ aros باستخدام طرف ماصة بلاستيكية سعة 1 إلى 200 µL.قم بإزالة سدادات aros من الثقوب بعناية باستخدام الملاقط. انقل الجنين ووسط نمو الأجنة إلى طبق aros ذو الثقوب. أضف trica إلى الوسط لتخدير الجنين ومنع حركته.أثناء التجربة، ضع الجنين برفق بحيث يكون الذيل للأسفل داخل الفتحة، ووجهه بحيث تكون أداة الحقن على الجانب الخلفي من الجنين. الآن وبعد وضع الجنين وتوجيهه بشكل صحيح في طبق الأجاروز، أصبحنا مستعدين لعملية الحقن في بطين الدماغ. أولاً، قم بتجهيز إعدادات التلاعب الدقيق بحيث تكون طرف الإبرة في نفس مجال الرؤية الذي يظهر فيه الجنين تحت قوة تكبير عالية.أدخل الإبرة بعناية عبر الصفيحة السقفية الرقيقة للدماغ الخلفي، خلف نقطة مفصل R zero R one مباشرةً دون لمس أنسجة الدماغ الموجودة أسفلها، ثم احقن كمية كافية من الصبغة لملء البطينات بالكامل. قد يتطلب الأمر عدة عمليات حقن لملء مساحة البطينات اعتماداً على مرحلة الجنين. وعندما يتم حقن الجنين ويصبح جاهزاً للتصوير، يتم تحضير طبق أجاروز جديد للجنين.باستخدام طبق نظيف مطلي بـ 1%aros، قم بثقب ثقوب في الطبق وإزالة السدادات. انقل الجنين إلى الطبق وأضف trica لتخدير الجنين ومنع حركته. ضع ذيل الجنين الذي تم حقنه في البطين في الثقب في وضعية مناسبة لالتقاط صورة ظهرية.أصبح الجنين الآن جاهزاً للتصوير. التقط صورة باستخدام الضوء النافذ. من الضروري جداً عدم تحريك الجنين أو المجهر.بعد ذلك، قم بتغيير إعدادات المجهر والتقط صورة باستخدام الضوء الفلوري. أعد وضع الجنين لالتقاط صور جانبية باستخدام كل من الضوء النافذ والضوء الفلوري. احفظ جميع الصور في ملفات من أجل معالجة الصور باستخدام برنامج Photoshop.لمعالجة الصور في برنامج Photoshop، افتح صور الضوء النافذ والضوء الفلوري لنفس الجنين والتي تم التقاطها في الموضع ذاته. تأكد من أن جميع الإعدادات متطابقة. لكل صورة، اسحب الصورة الفلورية فوق صورة الضوء النافذ وقم بمحاذاتهما بدقة مع تحديد الصورة الفلورية. اختر تعديلات الصور (image adjustments)، ثم استبدال اللون (replace color) وقم بتغيير الخلفية السوداء إلى اللون الأبيض.في نافذة استبدال اللون، قم بضبط عامل التمويه (fuzziness) نحو اليمين حتى تبدو الصورة الفلورية موحدة اللون. في نافذة الطبقات، اختر "تضاعف" (multiply). لعرض الصور المتراكبة، يجب أن تتطابق صورة حيز البطين مع صورة الضوء النافذ تماماً.احفظ هذا الملف وكرر العملية لأي صور أخرى. إذا تم إجراء الحقن البطيني بشكل صحيح، يجب أن تظهر الصور حوافاً حادة في الصبغة غير المنتشرة كما هو موضح هنا في هذه الصور بعد 25 hours من الإخصاب؛ حيث تظهر اللوحة A صورة الحقل المضيء، وتظهر اللوحة B الصورة الفلورية، وتظهر اللوحة C الصورة المتراكبة.يظهر منظر جانبي للصورة المتراكبة في اللوحة D. من ناحية أخرى، إذا تم إدخال الإبرة بعمق زائد أثناء الحقن البطيني، فستخترق أنسجة الدماغ أسفل الحيز البطيني، مما يؤدي إلى حقن غير صحيح. وينتج عن ذلك ظهور الصبغة خارج الحيز البطيني وفي المح، كما هو موضح هنا. وتظهر اللوحة E صورة المجال المضيء.يُظهر اللوح F الصورة الفلورية ويُظهر اللوح G الصورة المتراكبة. ويظهر عرض جانبي للصورة المتراكبة في اللوح H. تشير الأسهم إلى المناطق التي تجاوز فيها الصبغ مساحة بطين الدماغ. في هذا الفيديو، أوضحنا كيفية حقن الصبغ الفلوري في بطينات دماغ أسماك zebrafish النامية.تُستخدم هذه الطريقة لتصوير حيز بطينات الدماغ تباينًا مع الظهارة العصبية المحيطة، وهي مفيدة للغاية في تحديد شكل حيز البطينات وكذلك شكل أنسجة الدماغ المحيطة. تتيح لنا هذه التقنية فهم عملية تكوين بطينات الدماغ وتشكل الدماغ بشكل أفضل بمرور الوقت في الجنين الحي. كما تُعد أداة ممتازة لدراسة عيوب تكوين بطينات الدماغ، وللتوصيف الأولي لطفرات تشكل الدماغ.هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة يمكن من خلالها تحليل الدماغ النامي في أجنة الفقاريات الزرد يعيش في قرار خلية واحدة بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. ويشمل هذا الأسلوب الذي كنا حقن الجنين الزرد وحيدة الخلية وجبل لاحقا وصورة الدماغ النامي.

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

نقدم طريقة لجمع السائل النخاعي (CSF) وخلق نظام الذي يفتقر CSF داخل منظومة البطين الزرد الجنينية الدماغ. وهذا يسمح لمزيد من الدراسة من تكوين CSF ومتطلباتها خلال نمو المخ الجنينية.

دليل الصرف من البطينين الدماغ الجنينية اسماك الزرد

يصف هذا الفيديو التثقيب الكهربائي في الجسم الحي ، وهي تقنية لتوصيل الحمض النووي إلى الخلايا البطانية الدبقية في أسماك الزرد البالغة.

في الجسم الحي التثقيب الكهربائي: طريقة خاصة بالموقع لنقل أسماك الزرد

يصف هذا الفيديو تقنية التشريح الدقيق للدماغ من سمكة الزرد البالغة. تساعد هذه الطريقة في الحصول على غلاف داخلي مشتق من الدماغ بالكامل يمكن دراسته بشكل أكبر.

تشريح دماغ أسماك الزرد: تقنية علم الأعصاب للأسماك

يوضح الفيديو الحقن المجهري لعديدات السكاريد الدهنية (LPS) في أدمغة يرقات سمك الزرد للحث على التهاب الأعصاب. يتم وضع اليرقات على طبق مبطن بالأغروز ، ويتم إدخال الإبرة في بطينين الدماغ ، ويتم حقن LPS. يؤدي LPS المحقون إلى استجابة مناعية تؤدي إلى التهاب الأعصاب.

إحداث التهاب عصبي في يرقات الزرد بحقن عديدات السكاريد الدهنية

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن ببتيدات الأميلويد أحادية اللون في الدماغ الأمامي لسمك الزرد البالغ لتوليد سمية الأميلويد ، مما يحاكي الضرر العصبي الذي يظهر في مرض...

إنشاء نموذج مرض الزهايمر في دماغ أسماك الزرد من خلال حقن الببتيد النشواني

في هذه المقالة، ونحن يبرهن على وجود طريقة للتلاعب في التعبير الجيني في الخلايا البطين من الدماغ الانتهائي الزرد الكبار باستخدام العقاقير أليغنوكليوتيد] morpholino. نقدم هذه الطريقة كبروتوكول فعالة وسريعة والتي يمكن استخدامها للدراسات وظيفية في الفقاريات الدماغ الكبار.

المجهرية من التعبير الجيني في الدماغ اسماك الزرد الكبار عن طريق حقن مكروي Cerebroventricular [أليغنوكليوتيد] Morpholino

يوصف التصوير التنمية الدماغية في الزرد اليرقات. كما يتم توفير التقنيات اللازمة لتسهيل 3D التصوير وتعديل وضع الدماغية باستخدام العلاجات الكيميائية.

التصوير والإعمار 3D من الهياكل الدماغية في الجنينية اسماك الزرد

يعتمد هذا الأسلوب علي حقن 0.5 − 3 μL من محلول في الصدر من zebrafish الكبار. الاجراء بكفاءة يسلم البروتينات والمركبات الكيميائية في القرب من القلب الزبرافيش دون الاضرار الجهاز. هذا النهج هو مناسبه لاختبار اثار العوامل الخارجية علي انسجه مختلفه من القلب.

حقن داخل الصفاق لدراسة القلب البالغ زبرافيش

يصف هذا البروتوكول الحقن داخل البطين (ICV) لأسماك الزرد البالغة مع السمية العصبية 6-hydroxydopamine (6-OHDA) في الدماغ البطني (Dn) وتقييم الضعف والتعافي اللاحق لآفة سلوك السباحة باستخدام اختبار الخزان المفتوح ، الذي يصاحبه تحليل باستخدام برنامج تتبع الفيديو.

التقييم الحركي لنموذج مرض باركنسون القائم على أسماك الزرد البالغة الذي يسببه 6-هيدروكسي دوبامين

يوضح هذا البروتوكول الحقن الدقيق لعديد السكاريد الشحمي في منطقة بطين الدماغ في نموذج يرقات الزرد لدراسة الاستجابة الالتهابية العصبية الناتجة والسمية العصبية.

الحقن المجهري للبطين الدماغي لعديد السكاريد الشحمي في يرقات الزرد لتقييم الالتهاب العصبي والسمية العصبية

تعلم تقنية حقن البطين الدماغي في أجنة سمك الزرد باستخدام صبغة فلورية لتحسين تصوير الفراغات المملوءة بالسائل النخاعي الجنيني. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة تشكّل البطين الدماغي ومورفولوجيا الظهارة العصبية في الأجنة الحية.

الزرد حقن الدماغ البطين

استكشف المزيد من الفيديوهات