موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:01 دقيقة • April 30th, 2023
تنمو خط الخلايا المطلوب كطبقة أحادية ثنائية الأبعاد ملتصقة. قم بإزالة وسائط الثقافة واغسلها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS. ثم أضف التربسين واحتضن بينما تنفصل الخلايا عن سطح القارورة وتصبح مستديرة الشكل. أضف وسائط جديدة لتحييد التربسين وتعليق الخلايا. انقل الخليط إلى أنبوب مخروطي الشكل ، واستخدم جهاز طرد مركزي لتكسير الخلايا.
استبدل المادة الطافية بوسائط جديدة وأعد تعليق حبيبات الخلية. استخدم مقياس كثافة الدم لحساب أرقام الخلايا وحساب تركيز العمل. بعد ذلك ، انقل الكمية المناسبة من مزيج الخلايا إلى صفيحة بئر منخفضة الالتصاق منخفضة القاع واحتضنها. تستقر الخلايا في القاع وتتراكم. سوف ترتبط في النهاية ببعضها البعض وتشكل مجموعة خلية ثلاثية الأبعاد مدمجة ، كروية.
في مثال البروتوكول ، سنرى كيفية توليد كرويات ثلاثية الأبعاد من خط خلايا سرطان القولون ، وكيف يتم تطبيق التصوير الحي لتتبع تكوينها. ابدأ بغسل خط خلايا سرطان القولون والمستقيم محل الاهتمام بخمسة ملليلتر من PBS ، وإزالة الخلايا من قاع القارورة باستخدام 0.5 مل من التربسين لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. بعد تأكيد الانفصال تحت المجهر ، قم بتحييد إنزيم تفكك الخلية ب 10 ملليلتر من الوسط الكامل ، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق الحبيبات في خمسة ملليلتر من الوسط الكامل الطازج للعد, وأعد تعليق الخلايا عند 1.5 في 10 إلى ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية