معالجة أرجل الحشرات للفحص المجهري الفلوري: طريقة للحفاظ على الهياكل العصبية العضلية للتصوير

- للبدء ، اغمر الحشرات المخدرة في محلول الإيثانول بنسبة 70٪ لتقليل مقاومة البشرة للماء. بعد ذلك ، اغسل الأنسجة واخترقها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات يحتوي على منظف لمدة 30 دقيقة على الأقل للسماح باختراق الأنسجة أثناء التثبيت.

بعد ذلك ، قم بإزالة الرأس والبطن من الصدر. استخدم الملقط لتطبيق ضغط لطيف على تقاطع coxa-thorax ، وافصل الساق. ضع الساقين بحذر في محلول بارافورمالدهيد مثلج بنسبة 4٪ طوال الليل للسماح لها باختراق الأنسجة. يعمل بارافورمالدهيد على إصلاح الأنسجة عن طريق ربط البروتينات.

ثم قم بإزالة محلول التثبيت وغسل الأنسجة عدة مرات باستخدام محلول ملحي يحتوي على منظف يحتوي على الفوسفات. قبل التركيب ، ضع الأرجل في عازلة تثبيت نقية أو مخففة قليلا ليوم واحد على الأقل لتوفير وقت كاف لدخول المخزن المؤقت إلى الأنسجة.

أخيرا ، قم بتركيب الأرجل في قطرة من وسط التركيب. استخدم فاصلا بين شريحة المجهر وقلة الغطاء لمنع العينة من التلف ، وقم بتأمين الحامل بطلاء الأظافر.

في المثال التالي ، سنرى تشريح وتثبيت وتركيب ذبابة الفاكهة السوداء أرجل البطن.

- ابدأ بملء العدد المناسب من الآبار في صفيحة زجاجية متعددة الآبار بنسبة 70٪ من الإيثانول. استخدم فرشاة لإضافة 15 إلى 20 ذبابا مخدرا بثاني أكسيد الكربون من أي عمر أو جنس إلى كل بئر ، وامسح الذباب برفق في الإيثانول حتى يتم غمره بالكامل.

بعد ما لا يزيد عن دقيقة واحدة ، اشطف الذباب ثلاث مرات بمحلول منظف خافض للتوتر السطحي غير أيوني بنسبة 0.3٪ في محلول ملحي مخزن بالفوسفات لمدة 10 دقائق على الأقل لكل غسلة. بعد الغسيل الأخير ، استخدم الملقط لإزالة رأس وبطن كل ذبابة دون الإضرار بالجزء الصدري أو الساقين ، واستخدم طرف زوج من الملقط الدقيق لتطبيق الضغط برفق ولكن بثبات على تقاطع coxa-thorax لفصل ساق واحدة عن الجزء الصدري.

ضع الأرجل في بئر واحد من طبق جديد متعدد الآبار ، يحتوي على 4٪ بارافورمالدهيد طازج على الثلج ، لحضانة طوال الليل عند 4 درجات مئوية.

- من المهم دفع الساقين برفق إلى المخزن المؤقت للتثبيت دون تركها تطفو للحصول على أرجل ثابتة جيدا.

- في اليوم التالي ، اغسل الساقين خمس مرات في محلول منظف خافض للتوتر السطحي غير أيوني طازج بنسبة 0.3٪ لمدة 20 دقيقة لكل غسلة. بعد الغسيل الأخير ، استبدل المنظف بوسيط التثبيت واحتفظ بالساقين في وسط التثبيت لمدة 24 ساعة على الأقل.

في اليوم التالي ، أضف ما يقرب من 20 ميكرولترا من الجلسرين بنسبة 70٪ بجوار الطرف المطلي لشريحة المجهر الزجاجي وقم بتغطية الجلسرين بغطاء 22 × 22 ملم. بعد ذلك ، أضف حوالي 10 ميكرولتر من وسط التثبيت على يمين الغطاء وقم بتطبيق خط ثان سعة 30 ميكرولتر من وسيط التركيب على يمين خط 10 ميكرولتر.

باستخدام ملقط دقيق ، انقل ساق واحدة من اللوحة متعددة الآبار في قطرة متوسطة إلى شريط 10 ميكرولتر من وسط التركيب في اتجاه خارجي لأعلى أو لأسفل. كرر حتى يتم تركيب ستة إلى ثمانية أرجل ومحاذاتها ، ووضع غطاء ثان على الساقين بحيث يستقر الغطاء الثاني قليلا على الغطاء الأول. بعد ذلك ، استخدمي طلاء الأظافر في كل ركن من أركان الغطاء لتثبيتها في مكانها.