الفصل القائم على الكروماتوغرافيا ذات الطبقة الرقيقة لنيوكليوتيدات (p) ppGpp المعزولة من البكتيريا التي تسببها الإجهاد
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:43 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بمستخلصات النيوكليوتيدات ذات العلامات الإشعاعية التي تم الحصول عليها من مزرعة بكتيرية قبل وبعد تحريض الإجهاد.
تحت الضغط ، تقوم الإنزيمات البكتيرية بتحويل ثلاثي فوسفات الغوانوزين وثنائي فوسفات غوانوزين إلى نيوكليوتيدات غوانوزين خماسي فوسفات وغوانوزين رباعي فوسفات.
ضع المستخلصات على صفيحة كروماتوغرافيا رقيقة الطبقة مطلية مسبقا ببوليمر كاتيوني كمرحلة ثابتة.
ضع اللوحة في غرفة تحتوي على مخزن مؤقت كمرحلة متحركة ، مع التأكد من بقاء السائل أسفل البقعة لمنع الانتشار المبكر.
اسمح للمخزن المؤقت بالصعود عن طريق العمل الشعري ، وفصل النيوكليوتيدات سالبة الشحنة إلى نطاقات مميزة بناء على شحنتها وحجمها.
بعد التطوير ، قم بإزالة اللوحة وتجفيفها في الهواء وتقليم الجزء العلوي للتخلص من النظائر الحرة وتقليل إشارة الخلفية.
قم بتعريض اللوحة لشاشة حساسة للإشعاع لاكتشاف الإشارة المشعة.
تكشف المستويات المتزايدة من رباعي فوسفات غوانوزين وخماسي فوسفات غوانوزين بعد تحريض الإجهاد عن تحولات ديناميكية في تجمع نيوكليوتيدات غوانوزين.
أولا ، قم بتعيين لوحة 20 × 20 سم PEI السليلوز TLC.
استخدم المقص لإزالة أعلى خمسة سنتيمترات ، واستخدم قلم رصاص ناعم لتحديد خط الأصل على بعد سنتيمتر واحد من الحافة. ضع قطرة خمسة ميكرولتر من كل عينة على سطح جزيرة الأمير إدوارد.
قبل أن تجف البقعة ، انقل اللوحة إلى خزان يحتوي على طبقة من فوسفات أ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية