تحليل دقيق وعالي الإنتاجية لنمو البكتيريا باستخدام قارئ الميكروبليت

ابدأ بالبكتيريا المحفوظة في مخزون الجلسرول، الذي نما سابقا حتى المرحلة الأسية المبكرة لضمان حالات فسيولوجية متجانسة ونمو قابل للتكاثر.

أضف وسط نمو ودوامة لإعادة تعليق البكتيريا بشكل متساو.

قم بتخفيف التعليق تسلسليا باستخدام وسائط جديدة للحصول على مجموعة من كثافات الخلايا الابتدائية.

تحميل العينات في الآبار الداخلية للوحة متعددة الآبار، مع ترك آبار الحافة ممتلئة بوسائط فارغة لتقليل التغيرات المرتبطة بالتبخر.

ضع اللوحة في مجموعة قارئ الألواح الصغيرة للحفاظ على هز مستمر ودرجة حرارة مثالية لنمو البكتيريا.

مع تكاثر البكتيريا، تزداد الكثافة البصرية أو الكمية الزائدة للزراعة.

قس التوزيع الزائد على فترات محددة.

اطرح القيم الأولية للتوزيع الخارجي (OD) التي تم الحصول عليها من الآبار الفارغة لتصحيح امتصاص الخلفية.

ثم نحسب معدل النمو من قيم OD المتتالية المقاسة عند فترات زمنية محددة، مما يتيح زيادة إنتاجية وقياس دقيق لديناميكيات نمو البكتيريا.

لتسجيل النمو في الوقت الحقيقي، أضف حوالي 25 ملليلتر من M63 إلى خزان كاشف معقم. ثم أضف 900 ميكرولتر من M63 إلى الأنابيب الدقيقة استعدادا لصنع التخفيف التسلسلي. بعد ذلك، أضف 900 ميكرولتر من M63 إلى مخزون الجلسرول المذاب والدوامة.

نقل 100 ميكرولتر من التخفيف ذو العشرة طيات إلى أنبوب دقيق آخر يحتوي على 900 ميكرولتر من M63 والدوامة. كرر هذه الخطوة حتى يتم تحقيق العدد المطلوب من التخفيفات. الآن، املأ الآبار عند حافة صفيحة ميكرولوح مسطح القاع المعقمة بسعة 96 بئر بسعة 200 ميكرولتر من M63، باستخدام ماصة ذات ثماني قنوات.

تحميل 200 ميكرولتر من كل عينة مخففة إلى آبار الميكرولوح وفقا لجدول المرجع. لتجنب الطبقات المخصصة بسبب التسخين وكفاءة البذر، لا تستخدم أبدا الآبار على حافة الصفيحة الصغيرة لعينات العينات وتحميل نفس العينة في عدة آبار في مواقع مختلفة على الصفيحة الدقيقة. ضع الميكرولوبلايت ببئر 96 على قارئ اللوحة.

افتح خيار القراءة الآن في مدير المهام واختر البرنامج. اضغط على موافق لبدء القياس. وأخيرا، احفظ التسجيل كملف تجريبي جديد لتحليل البيانات.