تميز باستخدام مواد متطايرة الجرثومي الثانوي قداس الطيف Electrospray التأين (سيسي - MS)

التأين بالرش الكهربائي الثانوي أو قياس الطيف الكتلي أو CS EMS تحليل المواد المتطايرة البكتيرية دون الحاجة إلى أي عينة. ما قبل العلاج. يتم إزاحة مساحة رأس الثقافة البكتيرية بواسطة ثاني أكسيد الكربون في غرفة تفاعل cssi. عندما تعبر المواد المتطايرة غرفة تفاعل مباحث أمن الدولة ، فإنها تمر عبر سحابة الرش الكهربائي وتصبح مؤينة.

بمجرد التأين ، يتم سحب المواد المتطايرة إلى مطياف الكتلة لتحليلها. يتم تمرير الغاز الناقل الزائد والمواد المتطايرة البكتيرية غير المتفاعلة من خلال مرشح 0.22 ميكرون لإزالة أي عوامل بكتيرية كإجراء إضافي لتنفيس الحماية للغطاء الكيميائي. في النهاية ، يوفر بروتوكول CSI MS هذا بصمات أصابع متطايرة بكتيرية في غضون دقائق.

نتوقع أن يتم استخدام هذه التقنية في العديد من التطبيقات ، بما في ذلك الزفير ، وتحليل التنفس للأمراض المعدية ، أو حتى تطبيقها على النظم الغذائية حيث قد نكون قادرين على اكتشاف مسببات الأمراض الموجودة على طعامنا أو N. هناك العديد من المزايا الرئيسية لهذه التقنية. على الطرق الحالية مثل غربلة GCMS و MS و PT و RM S أولا ، لا تتطلب المواد المتطايرة أي معالجة مسبقة قبل التحليل.

ثانيا ، من الممكن تجزئة أيونات معينة في الخليط المتطاير ، مما يجعل التعرف على المركب أسهل. وثالثا ، إنه سريع. يستغرق الأمر عادة أقل من خمس دقائق.

لتحليل كل عينة ، اختر الوعاء المناسب لتنمية ثقافتك ، مع مراعاة متطلبات نمو الأنواع ، بالإضافة إلى التوصيل الفعال للمواد المتطايرة إلى مطياف الكتلة. في هذا العرض التوضيحي ، اخترنا زجاجات وسائط محرقة قياسية سعة 100 مل. يتم تسليم المواد المتطايرة البكتيرية إلى مطياف الكتلة بواسطة تيار من الغاز الناقل لتجميع الناقل.

تناسب خطوط الغاز زجاجات الثقافة ذات الأغطية الملولبة التي تحتوي على منفذي إغراء على الأقل. أدخل خطوط مدخل ومخرج الغاز من خلال منافذ الإغراء ، وقم بتوصيل أي منافذ إضافية قبل زراعة العينات. اضغط على الأوعية واغمرها في الماء للتحقق من وجود تسرب.

تسرب الغاز هو السبب الرئيسي للنتائج غير النمطية في شكل ضعيف أو غائب. تنمو إشارات الأيونات المتطايرة بين عشية وضحاها. مزارع الإشريكية القولونية ، K 12 ، والهوائية الكاذبة ، PAO واحد في LB Lennox لإعداد مكررتين بيولوجيتين لكل نوع.

قم بإعداد تسع زجاجات استزراع معقمة تحتوي على 50 مل من LB Lennox وزجاجة واحدة غير ملقحة لاستخدامها كتلقيح فارغ لكل مزرعة ليلية في زجاجتين عينتين. إنشاء التكرارات التقنية ، احتضان الثقافات والفراغ لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. نظرا لأن CEMS مصمم خصيصا لأخذ عينات من المواد المتطايرة ، قلل من استخدام منتجات العناية الشخصية العطرية قبل استخدام الأداة بإحكام.

بتغطية جميع المواد الكيميائية المتطايرة في المختبر وتحكم في مسودات الهواء قدر الإمكان أثناء الاختبار لمنع تلوث جهازك وخطوط نقل الغاز. باستخدام العوامل البيولوجية القابلة للحياة ، قم بتثبيت مرشحات بحجم المسام المناسب في خط الغاز الناقل. لن تتداخل المرشحات مع نقل المواد المتطايرة إلى غرفة تفاعل sesi, ولكنها قد تؤثر بشكل طفيف على كفاءة نقل الهباء

للتحقق من إيقاف تشغيل مصدر الجهد وأن النظام قد تم تفريغه من الكهرباء ، تحقق من إيقاف تشغيل أضواء المؤشر على مورد الجهد. تأكد من أن الجهد على جهاز القياس المتعدد هو صفر وتأريض الأسلاك الكهربائية. في هذا الوقت ، قم بتثبيت محلول الرش الكهربائي للتحليل.

في وضع الأيونات الموجبة ، نستخدم محلول رش كهربائي من 0.1٪ حمض الفورميك و 5٪ ميثانول و 94.9٪ ماء من أجل تحقيق شدة الإشارة والاستقرار الأمثل ، قم بتشغيل الغاز الناقل لثاني أكسيد الكربون واضبط معدل التدفق على لترين في الدقيقة. اضغط على خزان الرش الكهربائي لبدء توصيل محلول الرش الكهربائي إلى غرفة التفاعل بمعدل تدفق يبلغ خمسة نانولتر في الثانية. بعد ذلك ، قم بتشغيل مصدر الجهد واضبط الجهد على 2.5 كيلو فولت.

الجهد المطبق على شدة أيون الإشارة واستقرار مخروط الرش الكهربائي Tailor لجهد نظامنا بين اثنين وخمسة كيلو فولت. تقديم أفضل النتائج في تمرين الوضع الأيوني الإيجابي الحذر حيث أن الأسطح المعدنية لمصدر التأين في هذه المرحلة قادرة على إحداث صدمة خطيرة. الآن قم بإعداد طريقة ضبط لمراقبة طيف SEMS.

قم بإلغاء تحديد خانة الاختيار اكتساب قنوات متعددة أو MCA. اضبط وقت الاستحواذ على 10 إلى 15 دقيقة وابدأ الحصول على البيانات. راقب أطياف خلفية الغاز الناقل وقم بإجراء تعديلات مضبوطة بدقة على الجهد المطبق للحصول على كروماتوجرام أيوني إجمالي مستقر وعمليات مسح قابلة للتكرار.

استمر في جمع الأطياف و A TIC لمدة خمس دقائق لضمان استقرار الجهاز مع الأداة المؤمنة. أدخل معلمات الاكتساب حسب ما يناسب تجربتك. سجل طيف خلفية الغاز الناقل للتجارب المستقبلية.

لجمع طيف فارغ. قم بتوجيه تدفق الغاز الناقل عبر خطوط الالتفافية ، ثم قم بتوصيل العينة الفارغة بالصمامات المغلقة بخطوط نقل الأداة. افتح الصمامات على زجاجة العينة وأغلق صمامات خطوط الالتفاف.

للأطياف القابلة للتكرار. اسمح للنظام بالتوازن لمدة 30 ثانية وخلال هذه الفترة تستقر الرطوبة في غرفة التفاعل. لضمان توازن النظام ، راقب TIC ، والذي سيتغير خلال فترة التوازن التي يتبعها الاستقرار.

بمجرد أن يتم موازنة النظام ، ابدأ في جمع الطيف. بعد جمع الطيف ، قم بإزالة زجاجة العينة عن طريق فتح خطوط تجاوز الغاز الناقل أولا. ثم إغلاق صمامات العينة.

وأخيرا ، إزالة زجاجة العينة. اغسل النظام بالغاز الناقل لمدة دقيقتين إلى أربع دقائق لإزالة الرطوبة والمواد المتطايرة الممتصة من خطوط النقل ومنع العينة من ترحيل العينة. اجمع بيانات بصمات الأصابع المتطايرة لكل عينة بكتيرية بشكل متقطع ، وجمع أطياف فارغة إضافية بشكل متقطع لضمان طرح فارغ شامل.

وضع الأيونات الإيجابية بصمات الأصابع المتطايرة للإشريكية القولونية و p aerogen. نمت هوائية في LB Lennox لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية متميزة. يهيمن الإندو على الطيف المتطاير الإشريكية القولونية بنسبة كتلة إلى شحنة تبلغ 118 ، في حين أن طيف الهواء الكاذب يحتوي على مجموعة أكبر من القمم القابلة للإضافة للبروتين.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تسجل المعلمات الآلية التي قمت بتحسينها لتحليلك ، مثل الجهد المطبق ، وتكوين محلول الرش الكهربائي ، ومعدل تدفق الغاز الناقل. من المهم أيضا أن تحتفظ بسجلات الأطياف التمثيلية الخاصة بك حتى تتمكن من إعادة إنتاج تحليلاتك في المستقبل. لا تنس أن العمل مع البكتيريا المسببة للأمراض والجهد العالي قد يكون خطيرا للغاية.

لذلك ، يجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل الحد من الوصول إلى css CMS أثناء التجربة. حتى الآن يجب أن تكون قادرا على الحصول على أطياف CSS و EMS بشكل متكرر للمواد المتطايرة البكتيرية في نظامك. حظ سعيد.