التحول الجيني القائم على نواقل الكروموسوم الاصطناعية البكتيرية الثنائية في نباتات نبات الأرابيدوبس: تقنية لتوليد نباتات معدلة وراثيا بإدخال نسخة واحدة

ابدأ بنباتات نبات الأرابيدوبسيس التي تحمل رؤوس أزهار غير ناضجة. اغمس رؤوس الأزهار في معلق خلية Agrobacterium الذي يحمل T-DNA المستنسخ بكروموسوم اصطناعي بكتيري ثنائي أو BIBAC ، وهو ناقل يتكاثر في كل من بكتريا قولونية ونظامي Agrobacterium. يمكن أن يوفر ناقل T-DNA الثنائي هذا الجينات المعدلة وراثيا كبيرا مثل جين مقاومة مبيدات الأعشاب وعلامات الفلورسنت القابلة للتحديد على طول محفز خاص بالبذور.

بينما لا تزال رؤوس الزهور مغمورة ، قم بتحريك النباتات برفق لتعزيز ملامستها مع Agrobacterium. بفضل قدرته المتأصلة على إصابة النباتات ، ينقل Agrobacterium الجينات المعدلة إلى الخلية الزهرية عندما يدخل الجين المعدل إلى الخلية ، ينتقل إلى النواة ويندمج مع جينوم النبات.

الآن ، لف النبات في غلاف بلاستيكي واحتضانه في الظلام للاحتفاظ بالرطوبة لتحسين التحول. قم بإزالة الفيلم وزراعة النباتات في ظل ظروف فسيولوجية حتى تنتج البذور.

بعد ذلك ، قم بحصاد البذور وراقبها تحت المجهر الفلوري لاختيار المحولات. الآن ، قم بزراعة البذور المحولة في ظروف مناسبة حتى الإنبات. رش النباتات بمبيدات الأعشاب واحتضنها.

تعاني النباتات ذات الإدراج المتعدد للجينات المعدلة من إسكات الجينات وتذبل ، في حين أن النباتات ذات الإدخال أحادي النسخة تعبر عن إنزيم نشط لتمثيل التمثيل الغذائي لمبيدات الأعشاب وتبقى على قيد الحياة من العلاج. استخرا