موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:59 دقيقة • July 8th, 2025
مجمعات البروتين Multimeric ضرورية لمختلف العمليات البيولوجية.
لفصل مجمعات البروتين في حالتها الأصلية بواسطة multimer-PAGE ، خذ محللة الأنسجة التي تحتوي على المجمعات المرغوبة. قم بتحميل المحللة على مجموعة هلام ل Blue native PAGE.
املأ النظام بمخزن مؤقت قلوي يحتوي على صبغة أنيونية زرقاء وقم بتوصيله بمصدر الطاقة. عند درجة الحموضة القلوية ، ترتبط جزيئات الصبغة بمركب البروتين مما يضفي عليه شحنة سالبة إجمالية دون تغيير الطبيعة. ينتقل مركب البروتين السليم سالب الشحنة عبر الجل كشريط أزرق.
بعد الحد الأدنى من التشغيل ، والسماح للبروتين السليم بالهجرة إلى هلام الحل ، قم باستئصال الشريط الذي يحتوي على المركب. احتضان الشريط في محلول يحتوي على عامل ربط متقاطع للسماح لمجموعاته التفاعلية بالتفاعل مع مجموعات الأمين للبروتين القريب ، مما يؤدي إلى استقرار المركب متعدد الفرصة.
استبدل محلول الربط المتقاطع بكاشف التبريد لتهدئة نشاط الروابط المتقاطعة غير المتفاعلة. أضف SDS - منظف أنيوني - يضفي شحنة سالبة موحدة على مركب البروتين السليم مع الحفاظ على حجمه الأصلي ومكياجه.
ضع الشريط المعالج في كاسيت جديد وأعد صبه في جل SDS-PAGE جديد. أثناء الرحلان الكهربائي ، ينتقل مركب البروتين المتقاطع سالب الشحنة نحو الأنود الموجب ويظهر كشريط عالي الوزن الجزيئي في الجل.
لبدء هذا الإجراء ، استعد للرحلان الكهربائي لجل بولي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية