مقايسة تكوين البروتين الكلي: طريقة للكشف عن تراكم البروتين وتحديده في الخلايا المستنبتة عند الحث بواسطة مثبط البروتيازوم

يتم تنظيم إزالة البروتينات غير المطوية في الخلية بشكل رئيسي بواسطة نظام اليوبيكويتين الخلوي والبروتيازوم ، حيث يتم التعرف على البروتين لأول مرة وتمييزه بواسطة يوبيكويتين ، وهو بروتين تنظيمي صغير ، ويتم تهريبه إلى البروتيازوم ، وهو مركب متعدد البروتينات ، للتحلل المائي والتخليص.

يمكن أن يتسبب ضعف نشاط نظام البروتين في اليوبيكويتين ، وهو أمر شائع في الأمراض التنكسية العصبية ، في تراكم البروتينات غير المطوية داخل الخلايا ، مما يشكل مجاميع بروتينية غير قابلة للذوبان ذات تأثيرات سامة للخلايا.

لتصور وقياس تراكم البروتين في المختبر ، احصل على تعليق لخلايا الثدييات المنقولة - معبرا عن بروتين متحور يحمل علامة الفلورسنت يتبنى شكلا غير مطوي مع بقايا كارهة للماء المكشوفة - في وسائط مناسبة.

تزيد الماصة من تركيزات مثبط البروتيازوم على آبار صفيحة سوداء متعددة الآبار لتقليل مضان الخلفية أثناء التصوير. بذر معلق خلايا الثدييات في الآبار. احتضان للسماح للخلايا بالالتصاق بقاع اللوحة والتكاثر.

بمجرد دخوله ، يرتبط مثبط البروتيازوم بالمواقع المحللة للبروتيازوم ويمنع نشاطه ، مما يتسبب في تراكم البروتينات الطافرة المعبر عنها ، والتي تتفاعل بعد ذلك عبر بقاياها الكارهة للماء المكشوفة وتشكل مجاميع سيتوبلازمية ، مما يؤدي في النهاية إلى موت الخلايا.

أضف صبغة ملزمة للحمض النووي الفلوري لتلطيخ نوى الخلية. صور الل