فحص سلوك التجنب الكيميائي في الديدان المعدلة وراثيا باستخدام مقايسة التجنب التناضحي

في الديدان الخيطية ، يمكن للخلايا العصبية الحسية الكيميائية - ASH - أن تستشعر تغيرات الأسمولية في محيطها بسبب المواد الطاردة للحشرات الكيميائية. ردا على ذلك ، تبتعد هذه الديدان عن المواد الطاردة للحشرات ، مما يؤدي إلى سلوك التجنب الكيميائي.

يمكن أن يؤدي تراكم البروتين غير الطبيعي داخل الخلايا العصبية ASH إلى تغييرات في سلوك التجنب الكيميائي.

لفحص سلوك التجنب التناضحي في الديدان ، ابدأ بيرقات الديدان الخيطية المعدلة وراثيا مع مجاميع البروتين في الخلايا العصبية ASH. عالج الديدان الخيطية بمركبات نشطة بيولوجيا تقلل من تراكم البروتين وتستعيد سلوك التجنب في بعض الديدان.

انقل الديدان المعالجة إلى صفيحة وسائط معدة مسبقا وخالية من الطعام للحفاظ عليها في مرحلة اليرقات. تحتوي الصفيحة على الجلسرين - مادة كيميائية عالية القوة التناضحية - موجودة في مركزها ، مما يخلق حاجزا تناضحيا لتقسيم الصفيحة إلى منطقتين ، منطقة طبيعية ومنطقة فخ.

استكمل منطقة المصيدة بالتخدير لإيقاف حركة الديدان التي تعبر الحاجز. أضف قطرة من البيوتانيديون إلى منطقة المصيدة لجذب جميع الديدان ، مما يجعلها تتحرك نحوها.

لا تستطيع الديدان المصابة بتراكم البروتين أن تشعر بالإجهاد التناضحي ، وتعبر خط الحاجز ، وتتخدر في منطقة المصيدة. تبتعد الديدان ذات السلوك الكيميائي المستعاد عن الجلسرين وتبقى داخل المنطقة الطبيعية.

يرتبط عدد الديدان في المنطقة الطبيعية بفعالية المركبات النشطة بيولوجيا في استعادة سلوك التجنب الكيميائي.

بالنسبة لمقايسة التجنب التناضحي ، قسم صفيحة NGM الخالية من الطعام إلى مناطق طبيعية ومناطق فخ ، عن طريق إنشاء خط جلسرين 8 مولار في المنتصف. بعد ذلك ، انشر خط أزيد الصوديوم 200 ملليمولار على بعد حوالي 1 سم من خط الجلسرين لشل الديدان الخيطية التي تعبر حاجز الجلسرين إلى منطقة المصيد

انقل حوالي 200 ديدان خيطية لكل منها إلى المنطقة العادية لثلاث صفائح مكررة لكل مجموعة. ثم أضف قطرة من 1٪ من البيوتانيديون إلى منطقة المصيدة لجذب الديدان الخيطية. غطي غطاء طبق بتري على الفور ، واحتضنه على حرارة 23 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة.

سجل عدد الديدان الخيطية في كلتا المنطقتين تحت المجهر ، واحسب مؤشر التجنب.